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2026-01-22 17:44 上一頁面

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【正文】從動物腦中提取 : 5mg50萬只羊腦基因工程 9升大腸桿菌培養液 SS基因基因載體重組體分切接轉篩表 SS 第一節 DNA的重組 DNA Rebination DNA重組接合作用 (conjugation) 轉化作用 (transformation) 轉導作用 (transduction) 轉座 (transposition) 同源重組 (homologous rebination) 位點特異的重組 (sitespecific rebination) 發生在同源序列間的重組稱為同源重組(homologous rebination)，又稱基本重組。例：溶菌時，裂解的 DNA片段被另一細菌攝取。（一） DNA克隆技術水平：分子克隆 (molecular clone) 即 DNA 克隆細胞克隆個體克隆（動物或植物） DNA克隆應用酶學的方法，在體外將各種來源的遺傳物質（同源的或異源的、原核的或真核的、天然的或人工的 DNA）與載體 DNA接合成一具有自我復制能力的 DNA分子 —— 復制子 (replicon)，繼而通過轉化或轉染宿主細胞，篩選出含有目的基因的轉化子細胞，再進行擴增提取獲得大量同一DNA分子，也稱基因克隆或重組 DNA (rebinant DNA) 。羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使 DNA切口封合或使兩個 DNA分子或片段連接 DNA聚合酶 Ⅰ ① 合成雙鏈 cDNA分子或片段連接 ② 缺口平移制作高比活探針 ③ DNA序列分析 ④ 填補 3180。羥基末端進行同質多聚物加尾堿性磷酸酶切除末端磷酸基限制性核酸內切酶定義限制性核酸內切酶 (restriction endonuclease, RE)是識別 DNA的特異序列 , 并在識別位點或其周圍切割雙鏈 DNA的一類內切酶。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + BstⅠ 有些限制性內切酶雖然識別序列不完全相同，但切割 DNA后，產生相同的粘性末端，稱為同尾酶。某功能蛋白宿主細胞重組體目的基因 cDNA：經反轉錄合成的、與 mRNA互補的 DNA鏈。表達載體 (expression vector)為使插入的外源 DNA序列可轉錄翻譯成多肽鏈而特意設計的載體。帶有抗性基因及表型識別等遺傳性標記物。 DNA mRNA mRNA 反轉錄酶 cDNA mRNA的提取與純化從 mRNA制備 cDNA 逆轉錄酶ＤＮＡ聚合酶 mRNA cDNA 雜化雙鏈 cDNA文庫法 cDNA 基因重組轉化核酸探針 cDNA文庫聚合酶鏈式反應（ PCR）目的基因基因載體重組體（二）克隆載體的選擇和構建（三）外源基因與載體的連接 1. 粘性末端連接方式： (1)同一限制酶切位點連接 (2)不同限制酶切位點連接配伍末端連接非配伍末端連接 Bam HⅠ 切割反應 GGATCC CCTAGG T4 DNA連接酶 15186。C 重組體載體自連目的基因自連 3. 同聚物加尾連接在末端轉移酶 (terminal transferase)的作用下，在 DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再進行粘端連接。 5180。 5180。 5180。 5180。 5180。 5180。 3180。 . 便于完全自動化操作，適合大面積、大人群普

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