紅霉素產(chǎn)生菌的篩選與鑒定生物技術(shù)畢業(yè)論文(存儲(chǔ)版)

　　

【正文】 試驗(yàn) 將接種過(guò)三種菌種的試管分別直立放于試管架上 ,并把它們 放在恒溫箱中用適宜溫度培養(yǎng)，經(jīng)定期觀察發(fā)現(xiàn) ,A、 B、 C接種后菌株僅在在接種線處生長(zhǎng) ,細(xì)而密 ,并未出現(xiàn)擴(kuò)散。無(wú)莢膜 ,無(wú)芽孢。無(wú)莢膜 ,無(wú)芽孢。 紅霉素產(chǎn)生菌的篩選和鑒定 將含有所要篩選的微生物的污泥按搖瓶培養(yǎng)的步驟操作 ,分別往 50ml 普通培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基中加入 5ml 活性污泥 33℃厭氧條件下進(jìn)行富集培養(yǎng)。極差越大，說(shuō)明這個(gè)因素的水平的改變對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響越大。超聲波功率分別為 200W、 300W、400W，誘變時(shí)間分別為 0min、 3min、 6min、 9min、 12min、 15min、 18min、 2min、24min、 27min、 30min。 紅霉素的提取 紅霉素分子結(jié)構(gòu)中有一個(gè)二甲基氨基官能團(tuán)，是一個(gè)弱堿，在酸性條件下與某些酸會(huì)形成鹽，如紅霉素乳酸鹽。在發(fā)酵期間每隔一定時(shí)間也要取樣進(jìn)行分析、鏡檢及無(wú)菌試驗(yàn)，檢測(cè)生產(chǎn)狀況，分析或控制相關(guān)參數(shù)。 紅霉素的藥理作用 類似芐青霉素，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌有強(qiáng)大抗菌作用，包括金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、白喉棒狀桿菌及梭狀芽孢桿菌；對(duì)革蘭陰性菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌、百日咳鮑特菌、布魯菌有較強(qiáng)作用；對(duì)嗜肺軍團(tuán)菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體也有作用。 紅霉素 是國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最廣的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素之一 。 紅霉素簡(jiǎn)介 紅霉素是 1952 年從紅色鏈霉菌培養(yǎng)液中分離出來(lái)的一種 14 元環(huán)大環(huán)內(nèi)醋類堿性抗生素。因此，當(dāng)紅霉素生產(chǎn)中面臨的有效組分偏低等這些問(wèn)題時(shí)，我們?nèi)狈τ行У尼槍?duì)性的解決辦法。由于這些原因造成我國(guó)生產(chǎn)紅霉素的利潤(rùn)很低。這也給中國(guó)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展做出了不小的貢獻(xiàn)。要想獲得高質(zhì)量高產(chǎn)量的紅霉素就必須對(duì)菌種進(jìn)行篩選和鑒定。 I 本 科 畢 業(yè) 論 文 紅霉素產(chǎn)生菌的篩選與鑒定 Study on Erythromycin bacteria screening and evaluation 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）原創(chuàng)性聲明和使用授權(quán)說(shuō)明 原創(chuàng)性聲明 本人鄭重承諾：所呈交的畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文），是我個(gè)人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的成果。由于紅霉素的這種很普遍的用途，所以提高發(fā)酵液中紅霉素產(chǎn)量顯的至關(guān)重要。經(jīng)過(guò)多年的不斷努力，我國(guó)成為全球第一大紅霉素原料藥生產(chǎn)國(guó)，而紅霉素的應(yīng)用也逐漸國(guó)際化，我國(guó)的這種原料優(yōu)勢(shì)使我國(guó)自然成為歐美和東南亞地區(qū)紅霉素原料藥的主要供應(yīng)國(guó)。當(dāng)國(guó)外發(fā)酵單位已達(dá) 8000U/mL~ 12020U/mL 的時(shí)候，我國(guó)還處于研究開發(fā)階段。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展， 國(guó)際上對(duì)紅霉素 產(chǎn)生菌種的基因工程改造進(jìn)行了諸多嘗試，然而研究者并不是對(duì)紅霉素生物合成的次生代謝途徑做特異性的遺傳修飾，而是著力于與產(chǎn)生紅霉素相關(guān)的底物供應(yīng)或者是限制紅霉素產(chǎn)生的因素上。所以這方面的研究還處于試驗(yàn)階段。我國(guó)于 1957年試制成功并投入生產(chǎn)。在 甲醇 、乙醇或丙酮中易溶，在水中極微溶解。生產(chǎn)中還要加入消泡劑以控制泡沫。紅霉素發(fā)酵液過(guò)濾采用板框過(guò)濾機(jī)。 8 第三章 試驗(yàn)結(jié)果 選因素、定水平 （ 1）僅超聲波誘變法定水平 分別取 10ml 出發(fā)菌株的菌懸液于 30 支 25ml 的試管中，放入超聲波清洗器中，水淹沒至試管 2/3 左右，進(jìn)行超聲波處理。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況選定的因素及其水平： 因素 A：超聲波功率（ W） 水平： 200W 300W 400W 因素 B:誘變時(shí)間（ min） 9 水平： 10min 20min 30min 因素 C:LiCl 濃度（ %） 水平： 因素 D： LiCl 使用方法 水平： 培養(yǎng)基中加入 LiCl 孢子懸浮液里 4h 同時(shí)處理 可以確定此實(shí)驗(yàn)為四因素、三水平實(shí)驗(yàn)，可以選擇正交表 L9(34) 項(xiàng)目 1 2 3 4 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 表頭設(shè)計(jì) 水平 A、 超聲波功率 （ W） B、誘變時(shí)間 （ min） C、 Licl 濃度 （ %） D、 Licl 使用方法 1 200 10 培養(yǎng)基中加 Licl 2 300 20 孢子懸浮液處理 3 400 30 同時(shí)處理 頂行：實(shí)驗(yàn)考慮的因素 最左列：實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的次數(shù)，每一列代表試驗(yàn)中安排的各個(gè)因素的水平 實(shí)驗(yàn)方案及其實(shí)驗(yàn)結(jié)果 水平 A、超聲波功率 （ W） B、誘變時(shí)間 （ min） C、 Licl 濃度 （ %） D、 Licl 使用方法 1 200 10 培養(yǎng)基中加 Licl 2 300 20 孢子懸浮液處理 3 400 30 同時(shí)處理 10 試驗(yàn)號(hào) A B C D 生物效價(jià)（ ug） 1 1 1 1 1 4410 2 1 2 2 2 4464 3 1 3 3 3 3221 4 2 1 2 3 3100 5 2 2 3 1 4702 6 2 3 1 2 4649 7 3 1 3 2 3321 8 3 2 1 3 3617 9 3 3 2 1 3867 試驗(yàn)號(hào) A B C D 生物效價(jià)（ ug） 1 1 1 1 1 4410 2 1 2 2 2 4464 3 1 3 3 3 3221 4 2 1 2 3 3100 5 2 2 3 1 4702 6 2 3 1 2 4649 7 3 1 3 2 3321 8 3 2 1 3 3617 9 3 3 2 1 3867 K1 4032 3610 4225 4326 35351 K2 4150 4261 3810 4145 K3 3602 3912 3748 3313 R 548 651 477 1013 11 （ 1）實(shí)驗(yàn)結(jié)果中重要數(shù)據(jù)的計(jì)算方法： K1即第 j列上水平號(hào)為 1的各實(shí)驗(yàn)結(jié)果之和的平均值 K2 即第 j列上水平號(hào)為 2 的各實(shí)驗(yàn)結(jié)果之和的平均值 K3 即第 j列上水平號(hào)為 3 的各實(shí)驗(yàn)結(jié)果之和的平均值 R 即第 j列的極差或其所在因素的極差 （ 2）計(jì)算公式： Rj=MAX{Kj}MIN{kj} R 值（極差）的作用，一般來(lái)說(shuō)，各列的 R 值（極差）是不相等的，這說(shuō)明各因素改變時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響是不相同的。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室采用富集培養(yǎng)的方法，從自然界篩選馴化降解紅霉素的高效菌株，并對(duì)菌株進(jìn)行初步的鑒定，研究外界的營(yíng)養(yǎng)與環(huán)境對(duì)條件對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響，以便在實(shí)際應(yīng)用中通過(guò)控制適當(dāng)?shù)臈l件達(dá)到最佳的生長(zhǎng)效果。用光學(xué)顯微鏡觀察該菌的菌體形狀呈短桿狀 ,革蘭氏染色后菌體呈紫紅色 ,判斷為革蘭氏陰性菌 。用光學(xué)顯微鏡觀察 ,該菌的菌體形狀呈桿狀 ,革蘭氏染色后菌體呈紫紅色 ,屬于革蘭氏陰性菌 。而 C能夠利用硫氨酸、酵母膏和硝酸胺作為唯一氮源 ,卻 不能利用蛋白胨和硝酸鉀。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下所示， A 菌種的發(fā)酵結(jié)果既產(chǎn)酸又產(chǎn)氣， B 菌種能產(chǎn)酸但不產(chǎn)氣， C菌種既不產(chǎn)酸又不產(chǎn)氣。某些菌株在糖代謝過(guò)程中 ,將培養(yǎng)基中的糖先分解為丙酮酸 ,丙酮酸再被分解為甲酸、乙酸、乳酸等。 試驗(yàn)結(jié)果如下所示，表明 A、 B、 C、三種菌種都不能分解乙酰甲基甲醇。紅霉素發(fā)酵屬于有氧發(fā)酵，其中的好氧菌可能會(huì)爭(zhēng)奪一部分氧分而導(dǎo)致發(fā)酵罐通氧量不足，紅霉素產(chǎn)量受到影響。在成長(zhǎng)的過(guò)程中我收到了來(lái)自老師和同學(xué)的幫助，尤其是最后的論文設(shè)計(jì)階段，更是讓人操了不少心。 我也要感謝我的母校安陽(yáng)工學(xué)院，是她提供了良好的學(xué)習(xí)環(huán)境和生活環(huán)境，讓我的大學(xué)生活豐富多姿，為我的人生留下精彩的一筆。 作者簽名： 日 期： 24 學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明 本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。 ：任務(wù)書、開題報(bào)告、外文譯文、譯文原文（復(fù)印件）。 作者簽名： 日期： 年 月 日 學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書 本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。 23 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）原創(chuàng)性聲明和使用授權(quán)說(shuō)明 原創(chuàng)性聲明 本人鄭重承諾：所呈交的畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文），是我個(gè)人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的成果。他真心的希望我們能順利畢業(yè)。 在正交試驗(yàn)時(shí)，我們選定的是四因素三水平，我們比較了各個(gè)菌種的形態(tài)特征，菌落特征，有無(wú)莢膜和革蘭氏染色情況等等。 試驗(yàn)結(jié)果如下所示 ,結(jié)果表明 ,A 具有利用檸檬酸的能力 B、 C 不能利用檸檬酸。 （ 7）乙酰甲基甲醇試驗(yàn) 本試驗(yàn)用的是間接測(cè)定法，細(xì)菌在分解葡萄糖的過(guò)程中