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分離工程第八章ppt課件(存儲(chǔ)版)

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【正文】離出來(lái)，這技術(shù)屬于（） ?A、吸附層析 ?B、離子交換層析 ?C、分配層析 ?D、親和層析 ?E、凝膠過(guò)濾 ? 回答題 ?凝膠過(guò)濾法和 SDS聚丙烯凝膠電泳這兩種分離蛋白質(zhì)的方法均建筑在分子大小的基礎(chǔ)之上，而且兩種方法均采用交聯(lián)的多聚物作為支持介質(zhì)，為什么在凝膠過(guò)濾時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)有較長(zhǎng)的保留時(shí)間，而 SDS聚丙烯凝膠電泳時(shí)，它又跑的最快？本章作業(yè) ? 電泳的基本原理 ? 電泳技術(shù)的分類(lèi) ? 常用的凝膠電泳技術(shù)有哪些？ ? 聚丙稀酰胺凝膠電泳與 SDSPAGE的異同 ? 瓊脂糖電泳的特點(diǎn)及其應(yīng)用 ? 等電聚焦電泳的基本原理 ? 雙相電泳的概念及其特點(diǎn) 本課程的課堂講授內(nèi)容到此全部結(jié)束謝謝大家！。 ? 其次，一些低 pI的載體兩性電解質(zhì)（荷其次多的負(fù)電）也向陽(yáng)極移動(dòng)，直到它的凈電荷減少到 0才停止。 ? 利用等電聚焦技術(shù)分離、分析的對(duì)象僅限于蛋白質(zhì)和兩性分子。 –因此，在樣品和凝膠中加入 SDS和還原劑后，蛋白質(zhì)分子被解聚為組成它們的多肽鏈，解聚后的氨基酸側(cè)鏈與 SDS結(jié)合后，形成帶負(fù)電的蛋白質(zhì) SDS膠束，所帶電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了蛋白質(zhì)原有的電荷量，消除了不同分子間的電荷差異；同時(shí)，蛋白質(zhì) SDS聚合體的形狀也基本相同，這就消除了在電泳過(guò)程中分子形狀對(duì)遷移率的影響。 ?樣品先被壓縮一個(gè)薄層，然后進(jìn)行電泳。因此，與凝膠的分子篩效應(yīng)（即凝膠的孔徑與電泳的分辨率、電泳速度）密切相關(guān)。 ?聚丙烯酰胺含量適用的分子量范圍 ? 7. 5%凝膠 10kD~1000kD ? %凝膠 1000kD~5000kD ?瓊脂糖或瓊脂糖與聚丙烯酰胺混合物 5000kD ?孔徑從小到大。 ?多孔介質(zhì)稱(chēng)為載體，應(yīng)用最普通的是以濾紙或凝膠為載體故稱(chēng)為紙電泳法或凝膠電泳法。 ? 20世紀(jì)初，電泳法用于蛋白質(zhì)的分離，20世紀(jì) 70年代，電泳多用于分析目的。 ?電泳分離是利用荷電溶質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度的差別進(jìn)行分離的方法。 ?根據(jù)支持物物理性質(zhì)的不同可分為 4類(lèi)： ?濾紙電泳和薄膜電泳，粉末電泳，細(xì)絲電泳，凝膠電泳。 ?凝膠電泳使用的凝膠種類(lèi)和濃度根據(jù)分離料液中溶質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量而異。 ? 一般選擇緩沖液的離子強(qiáng)度為 ~ mol/L之間凝膠濃度的選擇 ? 由于 PAGE電泳分離不僅取決于蛋白質(zhì)的電荷密度，而且取決于分子的大小、形狀。這二節(jié)膠孔徑大小，緩沖液離子成分和離子強(qiáng)度值，電場(chǎng)強(qiáng)度都是不同的。 SDSPAGE 的原理 ? 蛋白質(zhì)分子的解聚 – SDS是一種陰離子去污劑，作為變性劑和助溶性試劑，能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白質(zhì)分子的二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)；而強(qiáng)還原劑，如二硫蘇糖醇、 β巰基乙醇能使半胱氨酸殘基之間的二硫鍵斷裂。載體兩性電解質(zhì) pH梯度等電聚焦 ? 等電聚焦（ isoelectrofocusing） , IEF 利用蛋白質(zhì)分子或其它兩性分子的等電點(diǎn)不同，在一個(gè)穩(wěn)定的、連

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