3-第三章-文庫吧在線文庫

　　

【正文】 ⑴ 取材 ⑵ 固定 ：防止產生結構改變。 (6)染色 ：生物分子由原子序數低的輕元素組成，它們散射電子能力弱 ,在電鏡下幾乎不存在明暗反差 ,需加大生物樣品反差，進行染色。然后將組織溶掉，把碳和鉑的膜剝下來，此膜即為復膜（ replica）。 用途： 三態（固態、液態和氣態）物質均可進行觀察。 可將細胞器初步分離，常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。 isopyic sedimentation 用途： 分離 密度不等 的顆粒。 （二）顯示方法 二、細胞組分的化學染色 1. 金屬沉淀法 ：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反應產物最終生成 CoS或 PbS有色沉淀，而顯示出酶活性。 一般用 14C和 3H標記。最初是使用帶放射性的 DNA探針，后來又發明了熒光探針法。包被細胞的液流稱為鞘液，所用儀器稱為流式細胞儀（ flow cytometer）。 用途： 檢測單細胞水平的 DNA損傷 。通常可來自腫瘤組織的細胞群或培養中發生突變或轉化的細胞。 同核體 ：相同基因型的細胞融合而成。顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內移動的機械裝置。 ?流式細胞技術的原理及應用。 第四節 模式生物 由于基因在進化上的保守性和遺傳密碼的通用性，從一種實驗生物得到的有關基因性質或功能方面的信息通常也適用于其他生物。 誘導細胞融合的方法 ：生物方法（仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒）、化學方法（聚乙二醇 PEG）、物理方法（電擊和激光）。 2. 懸浮細胞培養： 適合于進行產業化大規模細胞培養，制取植物代謝產物。 酶標免疫法 （ enzymelabeled antibody method） ：常用的酶有辣根過氧化物酶，酶與底物發生反應后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。 單細胞凝膠電泳 ——單細胞水平的 DNA損傷檢測 原理： 真核 細胞的 DNA分子量很大， DNA超螺旋結構附著在核基質中，該方法用瓊脂糖凝膠將細胞包埋在載玻片上，在細胞裂解液作用下，細胞膜、核膜及其它生物膜破壞，細胞內的 RNA、蛋白質及其它成分進入凝膠，繼而擴散到裂解液中，唯獨核 DNA仍保持纏繞的環區(Loop)附著在剩余的核骨架上，并留在原位。⑤緩沖體系和 Mg2+。 可利用顯微分光光度計對某些成分進行定位、定性和定量測定。 4. 脂溶染色法 ：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。 Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation 組織化學和細胞化學染色方法 （ histochemical and cytochemical staining method）用于對某些細胞成分進行定性和定位研究。 分離活細胞的 介質要求 ： 1）能產生密度梯度，且密度高時，粘度不高； 2） pH中性或易調為中性； 3）濃度大時滲透壓不大； 4）對細胞無毒。 目前超速離心機的最高轉速可達 100000r/min。 二次電子發射量隨試樣表面形貌而變化 ； 二次電子信號被收集、轉換、放大，在電視熒光屏上同步掃描成像。特別是在病毒性致病因子的超微病理診斷中廣泛應用。梯度乙醇。 分辨力 ，放大倍數可達百萬倍。 分辨率： 典型的動物細胞 ——— 10～ 20 ?m 一般的細菌和線粒體 —— ?m (500nm) 普通顯微鏡 ———— (200nm) 暗視野顯微鏡 ———— (4200nm) 應用： 能觀察物體輪廓 ,分不清內部的微細結構。 應用： 觀察細胞形態 統計光密度來定量細胞內成分 三維重建 （四）相差顯微鏡 1. 1953年諾貝爾物理獎 2. 特點 : 可用以觀察活細胞。 非熒光性物質用熒光色素染色后，可產生熒光（二次熒光），以便于進行觀察 。 ——制作光學鏡頭所用的玻璃折射率為 ～ ，所用介質的折射率越接近玻璃的越好。 光學顯微鏡的放大原理和光路圖 普通光學顯微鏡光路圖 主要的性能參數 （ 2）孔徑角 ： 由標本上一點發出的進入物鏡最邊緣光線 L和進入物鏡中心光線 OA之間的夾角 ?/2稱為孔徑角。顯微鏡的鑒別距離越小，分辨率越高。 第四步 . 切片（ section） 目的：切成薄片，便于切片黏附在載玻片上進行染色。 ②間接法：熒光素先和第二抗體 (抗第一抗體的抗體 )偶聯，再與第一抗體作用。 通過致密部分 (如細胞核 ),速度慢 通過疏松部位 (如細胞質 ),速度快 相位差 (光程差 ) 振幅差 (明暗差 ) 相差顯微鏡 倒置相差顯微鏡 載物臺的上方： 光源 長焦距 聚光器 載物臺的下方： 物鏡 應用：直接對培養的 細胞進行觀察 培養中的上皮細胞 活細胞的有絲分裂 在日常生活中，室內飛揚的微粒塵土是不易被看見的，但在暗的房間中若有一束從光線從門縫斜射過來，灰塵便粒粒可見了，這是光學上的 丁達爾現象 。 熒光共振能量轉移原理圖 （七）熒光能量共振轉移技術（ FRET） （八）熒光漂白恢復技術 (FRAP) 熒光漂白恢復技術原理圖 二、電子顯微鏡 （一）透射電子顯微鏡