酶的分子修飾backgrou(留存版)

　　

【正文】 存在下能夠有效地起作用 。 有些抗體能在蛋白質開始伸展的部位或被蛋白酶水解的部位起作用 ， 因而起到穩定作用 。 共價修飾 酶的共價修飾方式 ① 磷酸化 /去磷酸化； ②乙酰化 /去乙酰化； ③腺苷酰化 /去腺苷酰化； ④尿苷酰化 /去尿苷酰化； ⑤甲基化 /去甲基化； ⑥氧化 (S—S)/還原 (2SH)。 ③ 針對異體反應 ,降低生物識別能力 ,降低免疫原性 . ?Low solubility ?Poor stability ?Oral delivery of proteins impossible because they are destroyed by the digestive system ?Injected proteins are quickly removed by renal excretion 酶應用研究上的目的 2. 酶分子的修飾方法 . 酶輔因子的置換修飾 . 大分子結合修飾 . 小分子修飾 . 分子內交聯 . 分子間交聯 . 氨基酸的置換修飾 . 肽鏈的有限水解 . 物理修飾 通過改變酶分子中的輔因子，使酶的特性和功能發生改變，主要是金屬離子的置換，因此該方法又稱為離子置換法。 所以 ， 用抗體穩定酶的方法較普遍 。 ? Overlap extension method requires 2 mutagenic primers and 2 others。 例如用戊二醛將胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶交聯在一起 。 C 95176。 (6)研究酶的固定化技術。 (3)測定酶蛋白部分區域的構象狀態。 C 65176。 結果發現 ， 用 1,4—二氨基丁烷交聯該酶 ， 可得到穩定性有所改善的酶制劑 酶分子內部兩個側鏈基團反應， 增加酶分子表面交聯鍵的數目是穩定酶的方法之一。 fragment that overlap and each have the mutation。 ?在醫學上要解決酶 —抗體復合物在體內的抗原性。 酶的多聚體或酶聚合體的活力和穩定性比單體高就是這個原因 。酶的分子修飾 Enzyme modification 通過主鏈的 “ 切割 ” 、 “ 剪接 ” 和側鏈基團的 “ 化學修飾 ” ,以改變其結構、性質及生物活性等 .這種應用化學方法對酶分子施行種種 “ 手術 ” 的技術 或在體外將酶分子通過人工的方法與一些化學基團 (物質 )，特別是具有生物相容性的 物質 ， 進行共價連接 ， 從而改變酶的結構和性質 。 有些來自嗜熱菌的酶具有較高穩定性 ， 其原因正是由于保護性大分子 (如肽和聚胺 )發揮作用的結果 。最近報告表明，已經成功地由大腸桿菌生產具有完整功能的重組抗體片段，而且用同一種微生物既能生產目的蛋白又生產其抗體的可能性。 fragment and a 3180。 ?Clain 和 Navia首次證實了利用交聯酶晶體 (Crosslinked enzyme crystal,CLEC)技術提高了嗜熱菌蛋白酶的生物活性 ,增加了其熱穩定性。 C EXTENSION 72176。 (4)探索酶的作用機理和催化反應歷程。 (5)探索酶分子的拓撲學及寡聚酶的亞基結合狀態。 C 2535 CYCLES DENATURATION 93176。 ?枯草桿菌蛋白酶經預處理 ,凍干形成交聯酶晶體 ,在有機溶劑和水溶液中的穩定性大大增加 ,活力可提高 13倍 ?利用葡聚糖二乙醛將青霉素Ｇ酰化酶進行交聯 ,使其在55℃ 下的半衰期提高 9倍 ,而Ｖｍａｘ保持不變 用雙功能或多功能試劑使不同的酶交聯起來產生雜化酶 。 ? Amplify a 5180。 缺點： ?制備抗體花費較多，解決的辦法是用微生物來生產。 主要是二價離子的置換修飾 置換修飾過程 酶液中加入 EDTA 透析或超濾 加入金屬離子 置換修飾酶 等價同荷置換 置換修飾的要點 舉例 ?蛋白酶（ Zn2＋ ） 蛋白酶（ Ca2＋ ），活力提高 ? α 淀粉酶 （雜離子型） Ca2＋ 型，活力增加，穩定性增加 ?大分子的非共價修飾 ?大分子的共價修飾 ?大分子的非共價修飾 ?非蛋白質修飾物 多元醇、多糖、多聚氨基酸、多胺 如聚乙二醇、右旋糖苷等 能與酶非共價地相互作用而有效地保護