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基因工程第四章工具酶-文庫(kù)吧

2025-12-08 02:26 本頁(yè)面

【正文】限制性酶的類別與活性 Ⅱ型酶 Ⅲ型酶 Ⅰ型酶蛋白結(jié)構(gòu) 內(nèi)切酶亞基和甲基化酶亞基分開(kāi) 2 亞基的雙功能酶 3 亞基的雙功能酶識(shí)別位點(diǎn) 4 ～ 6bp 序列常為回文 5 ～ 7bp 不對(duì)稱序列兩側(cè)對(duì)稱或不對(duì)稱剪切位點(diǎn) 在限制位點(diǎn) 限制位點(diǎn)上游 24 ～ 26bp 處離限制位點(diǎn) 1000 bp 的非特異位點(diǎn) 限制與甲基化活性分開(kāi) 同時(shí)存在互相排斥 Ⅰ 型、 Ⅲ 型在同一蛋白分子中兼有內(nèi)切和甲基化活性并且其依賴 ATP，作用時(shí)吸收能量。 ? Ⅱ 型：其內(nèi)切酶活性和甲基化活性是分開(kāi)的，只負(fù)責(zé)限制，因此叫限制性內(nèi)切酶。修飾由獨(dú)立的甲基酶完成。而且核酸內(nèi)切作用具有序列的特異性，可識(shí)別回文序列，－ AGCT，便于操作，廣泛應(yīng)用。 ? 特點(diǎn)： ? 識(shí)別特定的核苷酸序列，其長(zhǎng)度為 46個(gè)堿基，甚至 8個(gè)，少數(shù)酶識(shí)別更長(zhǎng)的序列。特定的序列：又叫識(shí)別序列或識(shí)別位點(diǎn)。這些序列的一個(gè)共同特點(diǎn)是具有雙重螺旋對(duì)稱的結(jié)構(gòu)形式，可以進(jìn)行 180度的旋轉(zhuǎn)，呈回文結(jié)構(gòu)。 ? 限制性內(nèi)切酶在識(shí)別序列后，對(duì)雙鏈 DNA進(jìn)行切割，雙鏈鍛裂后，形成特定的酶切末端，叫“粘性末端”。粘性末端有三種形式： 5”突出粘端： EcoRI切點(diǎn) 5G AATTC3 3CTTAA G5 3”突出粘端： PstI切割位點(diǎn) 5CTGCA G 3 3G ACGTC 5 平端： SmaI 切割位點(diǎn) 5CCC GGG 3 3GGG CCC5 二、限制性片斷末端的連接作用 : ?DNA片斷經(jīng)限制性內(nèi)切酶切割后，可自然的重新連接起來(lái)，或環(huán)化起來(lái)；不同 DNA片斷通過(guò)互不的粘性末端之間的堿基配對(duì)而彼此相連接，稱之為分子間連接。同一 DNA片斷通過(guò)互不的粘性末端的堿基配對(duì)連接成環(huán)狀形分子，稱為分子內(nèi)連接。 ?對(duì)重新連接的 DNA片斷經(jīng)加熱處理后，會(huì)重新線性化；

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