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微生物學實驗教案-文庫吧

2026-03-29 13:20 本頁面

【正文】（結晶紫染液、盧戈氏碘液、95%乙醇、石碳酸復紅）5載玻片、蓋玻片、接種環、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。6顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。四、實驗方法和步驟附表1細菌染色法分類附表2 微生物染色常用染料A酸性染料：如酸性復紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。B堿性染料：一般有堿性復紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結晶紫、美蘭、甲基紫等，細菌易被堿性染料染色。C中性（復合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細胞核染色）。D單純染色：這類染料物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類（Sudan b）的染料2革蘭氏染色（1）涂片。（2）初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。（3）媒染：先用新配的盧哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。（4）脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進行脫色約30秒，后立即用流水沖洗。（5）復染：滴加番紅染色液，染1分鐘，水洗后用吸水紙吸干。（6）鏡檢：觀察染色結果。五、實驗報告1 革蘭氏染色的基本原理和意義2 革蘭氏染色成敗的關鍵六、思考題1根據實驗體會，你認為制備染色標本時，應注意哪些事項？ 2制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀察？3做革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關鍵一步是什么？4當你對一株未知菌進行革蘭氏染色時，怎樣能確證你的染色技術操作正確，結果可靠?七、教學反饋實驗四培養基的配制一、實驗目的1學習和掌握配制培養基的一般方法和步驟2學會實驗室滅菌鍋的使用方法二、實驗材料1牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、鏈霉素、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、KNONaCl、K2HPO43H2O、MgSO47H2O、FeSO4.7H2O。2試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH試紙、棉花、牛皮紙、記號筆、線繩、紗布。3 滅菌鍋三、實驗方法(一)牛肉膏蛋白胨培養基的配制牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基。其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g．NaCl5g，瓊脂1520g，水1000mL。1稱藥品：按實際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒杯中。牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯；也可放在稱量紙上稱量，隨后放人熱水中，牛肉膏便與稱量紙分離，立即取出紙片。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速。2加熱溶解：在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網上，小火加熱，并用玻棒攪拌，待藥品完全溶解后再補充水分至所需量。若配制固體培養基，則將稱好的瓊脂放入已溶解的藥品中，再加熱融化，此過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，最后補足所失的水分。3調pH：檢測培養基的pH，若pH偏酸，可滴加1滴1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測，直至達到所需pH范圍。若偏堿，則用1mol/L HCl進行調節。pH的調節通常放在加瓊脂前。應注意pH值不要調過頭，以免回調而影響培養基內各離子的濃度。4過濾：液體培養基可用濾紙過濾，固體培養基可用4層紗布趁熱過濾，以利結果的觀察。5分裝：按實驗要求，可將配制的培養基分裝入試管或三角瓶內。分裝時可用三角漏斗以免培養基沾在管口或瓶口上面造成污染。分裝量：固體培養基約為試管高度的1／5，滅菌后制成斜面。分裝入三角瓶內以不超過其容積一半為宜。半固體培養基以試管高度的1/4為宜，滅菌后垂直待凝。6加棉塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞。棉塞的形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利通汽的作用。要使棉塞總長約3／5塞人試管口或瓶口內，以防棉塞脫落。有些微生物需要更好的通氣，則可用8層紗布制成通氣塞。有時也可用試管帽或塑料塞代替棉塞。7包扎：加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙，以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞。若培養基分裝于試管中，則應先把試管扎成捆后，再于棉塞外包一層牛皮紙。然后用記號筆注明培養基名稱、組別、日期。8滅菌：℃濕熱滅菌20min。如因特殊情況不能及時滅菌，則應放人冰箱內暫存。9擺斜面：滅菌后，如制斜面，則需趁熱將試管口端擱在一根長木條上，并調整斜度，使斜度的長度不超過試管總長度的1/2。10無菌檢查：將滅菌的培養基放入37℃溫箱中培養2448h，無菌生長即可使用。或儲存于冰箱清潔的櫥內，備用。四、實驗結果和報告記錄本實驗配制培養第的名稱、數量，并圖解說明其配制過程，指明要點。五、問題和思考1配制培養基有哪幾個步驟?在操作過程中應注意些什么問題?為什么?2培養基配制完成后，為什么必須立即滅菌?若不能及時滅菌應如何處理？如何進行無菌檢查，3試設計實驗對飲料進行無菌檢查。六、演示1培養基的分裝方法。2試管斜面的擱置方法七、注意事項稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋。調PH時要小心操作，避免回調。不同培養基各有配制特點，要注意具體操作。八、教學反饋實驗五土壤的稀釋、分離、純化及無菌操作技術一、實驗目的和內容1學習從上壤中分離微生物的方法，學習無菌操作技術。2用稀釋法分離細菌、放線茵和霉菌。3用平板劃線法分離微生物。4學習平板接種等無菌操作技術。二、實驗材料1金黃色葡萄球菌和普通變形菌斜面菌種。2已滅菌的牛肉膏、高氏1號、土豆蔗糖固體

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