基因診斷與基因治療培訓教程(文件)

　

【正文】 常通過多聚陽離子（如多聚賴氨酸）來實現。錄目 （ 3）基因直接注射技術不需要進行基因工程的繁瑣操作，直接將裸露DNA注入動物肌肉或某些器官組織內。目 錄三、基因干預 （ gene interference） 目 反義 RNA與基因表達調控 （ 2）構建一些能轉錄反義 RNA的重組質粒，將這些質粒轉入細胞中，轉錄出反義 RNA而發揮作用。反義 RNA的關鍵技術問題?反義 RNA進入靶細胞前的降解問題?專一性轉移問題 ① 受體介導的 RNA轉移十分專一，而且效率高；② 被轉移的 RNA是被保護的，與周圍環境之間存在多聚賴氨酸的保護層 ,錄但核酶也可以由兩個 RNA分子組成。錄目 更重要的是，核酶在切斷 mRNA后，又可從雜交鏈上解脫下來，重新結合和切割其它的 mRNA分子。RNAi） 是一種由雙鏈 RNA誘發的基因沉默現象。 RNA） 均能抑制線蟲基因的表達，雙鏈 RNA比單鏈 RNA更為有效。錄（ 1）小干擾性 RNA（ siRNA）（ 2） siRNA與細胞內的某些酶和蛋白質形成復合體，稱為 RNA誘導的沉默復合體（ RNAinduced該復合體可識別與 siRNA有同源序列的 mRNA， 并在特異的位點將該 mRNA切斷RNA， siRNA）目 由于 錄四、基因治療的應用研究 目 (PNP)缺乏癥 n 萊 納 (LeschNyhan)綜合征 錄目 錄?基因干預技術：通過基因干預，抑制腫瘤細胞中過度表達的癌基因，從而降低其惡性表型。耐藥基因治療。目 細胞因子（或受體）基因治療；錄臨床上對腫瘤患者進行化療時，通常面臨兩大難題：（ 1）患者機體內的腫瘤細胞對化療藥物的敏感程度存在差異，特別是某些經過多次化療的患者，其體內的腫瘤細胞已經產生了多藥耐藥性，對多種化療藥物產生交叉耐受，最終導致化療失敗。錄提高化療效果的輔助基因治療目 腫瘤細胞耐藥性與多種糖蛋白或酶：P450）、 谷胱甘肽 S轉移酶（ GST） 以及谷胱甘肽過氧化物酶（ GSHPX）等。病毒感染人體后不僅可能急性發病，還可以在人體內長期潛伏，造成終身傷害。目 錄：根據病毒在機體細胞中復制周期的各個環節來設計的（ 1）抑制病毒與宿主細胞結合：即阻斷病毒表面抗原決定簇與宿主細胞受體間的特異性結合。主要包括：目 錄目 錄謝謝！目 三月 2113:18:5913:18Mar2122Mar211故人江海別，幾度隔山川。 三月 211:18 下午 三月 2113:18March 22, 20231行動出成果，工作出財富。 13:18:5913:18:5913:183/22/2023 1:18:59 PM1成功就是日復一日那一點點小小努力的積累。 22 三月 20231:18:59 下午 13:18:59三月 211楚塞三湘接，荊門九派通。 三月 21三月 21Monday, March 22, 2023閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。勝人者有力，自勝者強。 2023/3/22 13:18:5913:18:5922 March 20231一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。 22 三月 20231:18:59 下午 13:18:59三月 211最具挑戰性的挑戰莫過于提升自我。 三月 2113:18:5913:18Mar2122Mar211越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。 2023/3/22 13:18:5913:18:5922 March 20231空山新雨后，天氣晚來秋。 13:18:5913:18:5913:18Monday, March 22, 20231不知香積寺，數里入云峰。 1:18:59 下午 1:18 下午 13:18:59三月 21沒有失敗，只有暫時停止成功！。 三月 21三月 2113:18:5913:18:59March 22, 20231他鄉生白發，舊國見青山。 三月 21三月 21Monday, March 22, 2023雨中黃葉樹，燈下白頭人。錄 五、基因治療的問題與展望n 治療基因調控元件的選擇n 安全高效載體的構建和轉移技術的選擇n 靶細胞的選擇目 →539。 （ 3）抑制病毒基因組的復制和蛋白質合成。 （ 2）將能夠誘導機體產生保護性免疫應答的病毒抗原基因，如乙型肝炎病毒表面抗原基因等，導入機體，表達的抗原不僅可以誘導機體產生保護性抗體，還可以引發特異性的細胞免疫應答，產生對野生型致病病毒攻擊的防御作用。它與某些癌癥、自身免疫性疾病和內分泌疾病也存在一定的關聯。目 耐藥基因治療： 抗原抗體基因治療。主要包括：目 ?腫瘤的免疫基因治療：激發機體腫瘤免疫效應或提高免疫效應細胞功能。（ 2）抑制癌基因的活性，通過干擾癌基因的轉錄和翻譯，發揮抑癌作用；（ 3）增強腫瘤細胞的免疫原性，通過對腫瘤組織進行細胞因子修飾，刺激機體免疫系統產生對腫瘤細胞的溶解和排斥反應；（ 4）通過導入 “自殺基因 ”殺傷癌細胞。n 囊性纖維化病 n 血友病和其他血漿蛋白缺乏癥 可供選擇并符合上述 4條以上要求的不過只有 30余種遺傳病。siRNA的產生目 錄1.RNA干擾技術能夠在哺乳動物中抑制特定基因的表達，建立多種表型；抑制基因表達的時間可以控制在發育的任何階段。目 長雙鏈 RNA被細胞內的雙鏈 RNA特異性核酸酶 Dicer切成 21~23個堿基對的短雙鏈 RNA，稱為小干擾性 RNA（ smallplex,而且其抑制基因表達的效率比反義 RNA至少高 2個數量級。有義 RNA（ senseRNA干擾 （ RNA目 錄目 錄核酶的作用機制 目 核酶是通過靶 RNA分子與核酶分子共同組成酶活性結構域，要從靶分子和核酶分子兩個方面來設計核酶。只要兩個 RNA分子通過互補序列相結合，形成錘頭狀的二級結構（ 3個螺旋區），并能組成核酶的核心序列（ 13個或 11個保守核苷酸序列），就可在錘頭右上方產生剪切反應。核酶錘頭狀的二級、三級結構 （ 4）能直接作用于一些 RNA病毒目 反義 RNA的優點 借助前述的受體介導基因轉移方法 ， 可以實現受體介導的反義 RNA轉移。錄 RNA技轉移術 錄RNA） n 將促進心臟血管生長的基因直接注入實驗鼠的心臟，可使其心臟壁內毛細血管增加 30% ～ 40% ；n 將胰島素基因直接注入鼠骨骼肌細胞，能分泌糖尿病所缺少的胰島素；n 肌內注射凝血因子 Ⅸ 基因，可產生血友病所需的凝血因子 Ⅸ 這樣形成的復合物可被帶有特異性受體的靶細胞吞飲，從而將外源 DNA導入靶細胞。（ 2）受體介導轉移技術 脂質體介導的基因轉移技術使用方便、成本低廉。錄目 錄目 錄AAV的特點l 以潛伏感染為主；l 病毒基因組與細胞共存；l 只要宿主細胞正常， AAV基因表達被抑制而維持潛伏狀態；l 若細胞受刺激，表達應激基因， AAV基因表達從而使 AAV病毒復制；l 產生子代病毒并釋放，又感染新的細胞，建立新的潛伏狀態。Genomic錄目 錄Structure AAV不能獨立復制，只有在輔助病毒（如腺病毒、單純皰疹病毒等）存在時，才能進行復制和溶細胞性感染，否則只能建立溶源性潛伏感染。分裂增殖 l 有兩個環節可能產生復制型腺病毒。錄目 錄目 腺病毒是人類呼吸道感染的病原體，但目前尚未發現與腫瘤發生有關聯。它通過受體介導的內吞作用進入細胞內，然后腺病毒基因組轉移至細胞核內，保持在染色體外，不整合進入宿主細胞基因組中。（ 2）腺病毒 (adenovirus)載體目 目 system目 目 輔助細胞株 (如 PA317)： 由另一種缺陷型反轉錄病毒（即帶有全套病毒包裝蛋白基因，但缺失包裝信號 ψ的反轉錄病毒）感染構建而成。錄反轉錄病毒介導的基因轉移系統；l l 在 U3內有增強子和啟動子； 反轉錄病毒前病毒的結構特點目 transfer)技術 錄目 錄 （五）基因免疫治療 定義 :GCV） 轉變成毒性 GCV三磷酸核苷，后者能抑制 DNA聚合酶活性，導致細胞死亡。virus,錄目 錄自殺基因的作用機制 目 n 應用： 是惡性腫瘤基因治療的主要方法之一。定義 : 通過導入外源基因使靶細胞表達其本身 不表達的基因。targeting）n 細胞內基因同源重組的發生率很低。 目 錄 （一）基因置換 （ gene 體細胞 (somatic目 錄n 基因治療： 指將目的基因通過基因轉移技術（病毒載體介導或者非病毒載體介導的基因轉移技術）導入靶細胞內，目的基因表達產物對疾病起治療作用。錄目 錄Index， PI）值、父權相對指數或親子關系概率值計算方法基本一致。錄法醫案檢中的基因診斷技術n VNTR（可變數目串聯重復序列 /小衛星）的核酸分子雜交分析n STR（短串聯重復序列 /微衛星）的 PCR分析n SNP的基因芯片檢測目 DNA指紋技術是從基因水平檢測 DNA的高度多態性，個體識別率高。錄目 1985年，英國遺傳學家Jeffeys等人用 TR的核心序列為探針進行 RFLP分析時，檢測到許多HVR，并產生相應的圖譜，所得圖譜具有高度的