生物化學維生素與輔酶章節考點總結-免費閱讀

　　

【正文】 圖 胰島素的基因工程： A鏈 63 個核苷酸 B 鏈 90 個核苷酸 （三） 序列分析儀 四色熒光基團標記的 ddNTP 七、 DNA 合成（合成探針、引物、基因） 化學合成 —— DNA 合成儀 DNA固相合成（亞磷酸三酯法） 合成方向： 3’ 5’端 5’OH 用二對甲氧三苯甲基（ DMT）保護， 堿基上氨基用苯甲酸保護 3’OH 用氨基磷酸化合物活化 P353 合成過程 保護： 5’OH、活化 3’OH、保護 所有 NH2 DNA 的酶合成 —— PCR 用 DNA聚合酶 I 必備條件： ①模板 DNA（單鏈） ②引物 ③ DNA聚合酶 ④ dATP、 dGTP、 dCTP、 dTTP ⑤一定濃度的 Mg2+ 鏈合成方向： 5 ’ 3’端 新的 DNA鏈合成，從引物 DNA的 3’OH 開始。建立物理圖譜是進一步分析此 DNA的基礎，末端標記法構建 DNA物理圖譜： （ 1）單酶完全降解和部分降解 （ 2）雙酶降解 圖 五、 分子雜交 Southern Blotting P353 圖 523 DNA 樣品 酶切 電泳 變性 轉膜 固定 雜交 洗滌 放射自顯影 變性（ NaOH ） 轉膜（ NC 膜） 固定（ 80℃， 46h） 雜交（高鹽濃度， 68℃，幾小時） Southern Blotting可用于 DNA之間同源性分析，確定特異性 DNA序列的大小和定位。 II 型酶的特點：限制和修飾活性分開，蛋白質結構是單一成分，輔助因子 Mg2+，位點序列旋轉對稱（反向重復）。 避免劇烈攪拌，抑制核酸酶。 P352 圖 522，不同 DNA的復性時間。 GC%=（ ） P351 圖 519 圖 520 Tm值與 GC 含量的關系 ③介質中離子強度 其它條件不變，離子強度高， Tm 高。 P350 圖 518 變性過程 熱變性 因素 酸堿變性（ pH 小于 4 或大于 11，堿基間氫鍵全部斷裂） 變性劑（尿素、鹽酸胍、甲醛） 260nm 吸收值升高。 若溶液中含有雜蛋白或苯酚，則 A260/A280 比值明顯降低。 二、 水解性質 堿水解 室溫， ，得到 2’或 3’磷酸核苷的混合物。 圖 MS2 病 mRNA 5’端先導區中，有一段富含嘌呤的堿基序列，典型的為 5’AGGAGGU3’，位于起始密碼子 AUG 前約 10 核苷酸處，此序列由 Shine 和 Dalgarno 發現，稱 SD 序列。 polyA功能： PolyA是 mRNA由核進入胞質所必需的形式。 ④ 5’末端大多為 pG?或 pC? ⑤二級結構是三葉草形 P345 圖 512 tRNA的二級結構（三葉草模型） 1966 年 Crick 對于 tRNA能識別幾種密碼子的現象，提出堿基配對的“擺動學說”： 認為除 AU、 GC 配對外，還有非標準配對， IA、 IC、 IU，并強調密碼子的 5’端第 2 個堿基嚴格遵循標準配對，而第 3 個堿基可以非標準配對，具有一定程度的擺動靈活性。 P343 圖 510 RNA基本結構 ① 組成 RNA的戊糖是核糖 ② 堿基中 RNA的 U 替代 DNA中的 T，此外， RNA中還有一些稀有堿基。 大腸桿菌 DNA結合蛋白： 每個細胞 H 兩個 28KD 的相同亞基 30000 個二聚體 HU 兩個各 9KD 的 不同亞基 40000 個二體聚體 HLP1 17KD 的亞基 20200 個單體 P 3KD 的亞基 未知 這些 DNA結合蛋白，使 106bp 的 DNA壓縮成為一個手腳架形結構，結構中心是多種 DNA結合蛋白， DNA雙螺旋分子有許多位點與這些蛋白結合，形成約 100個小區，每個小區的 DNA 都是負超螺旋，一個小區的 DNA 有兩個端點被蛋白質固定，每個小區相對獨立。 環形 DNA 的拓撲學特性 以 260bp 組成的線形 BDNA為例，螺旋周數 260/=25。 天然 BDNA的局部區域可以形成 Z0DNA。特別是在復制起點和啟動的 Pribnow 框的 DNA區中，富含 A T 對。 ④堿基處于雙螺旋內部的疏水環境中，可免受水溶性活性小分子的攻擊。磷酸與脫氧核糖彼此通過3/、 5/磷酸二酯鍵相連接，構成 DNA分子的骨架。 c. DNA堿基組成沒有組織和器官的特異性。 一、 DNA 的一級結構 DNA 的一級結構是 4 種脫氧核苷酸（ dAMP、 dGMP、 dCMP、 dTMP）通過 3/、 5/磷酸二酯鍵連接起來的線形多聚體。 核酸中的核苷均為 β型核苷 P332 結構式 腺嘌呤核苷 胞嘧啶脫氧核苷 DNA 的戊糖是：脫氧核糖 RNA 的戊糖是：核糖 三、 核苷酸 核苷中戊糖 C C5 羥基被磷酸酯化，生成核苷酸。 直接證據： T2 噬菌體 DNA感染 用 35S 標記噬菌體蛋白質，感染 ，又用 32P 標記噬菌體核酸，感染 DNA、 RNA的分布（ DNA在核內， RNA在核外）。 TPP 是催化丙酮酸、α 酮戊二酸脫羧反應的輔酶。 功能（抗氧劑 — 油脂氧化） 生理功能：抗生殖不育、肌肉委縮、貧血、血細胞形態異常 機理：有抗氧化活性，能防止不飽和脂肪酸自動氧化，保護細胞膜，延長細胞壽命，還可保護巰基酶的活性。 二、 維 生素 D（ D D3，還有 D D5） P361 有兩種： D3（又名膽鈣化醇）， D2（又名麥角鈣化固醇）。 脂溶性： A、 D、 E、 K，單獨具有生理功能。 活性形式： 11順式視黃醛 P361 視循環 視紫紅質為弱光感受物，當弱光射到視網膜上時，視紫紅質分解，并刺激視神經而發生光覺。 維生素 D3 （膽鈣化固醇）→ 25羥基膽鈣固醇（肝臟）→ 1， 25 一二羥基膽鈣固醇（腎臟）→小腸（促進 Ca2+ 的吸收、運輸 ）及骨骼（促進 Ca2+的沉積 ）中，參與調節鈣磷代謝。 一、 維生 B1 與焦磷酸硫胺素（ TPP） P367 化學名稱：硫胺素， 活性形式：焦磷酸硫胺素（ TPP） 結構 P367 結構式： 硫胺素 活性形式： TPP 硫胺素 + ATP Mg2+ TPP + AMP 硫胺素激酶 來源： 瘦肉、酵母、谷類的胚芽、皮層。 5’— 脫氧腺嘌呤核苷酸鈷胺素是 甲基丙二酸單酰輔酶 A變位酶的輔酶 九、 硫辛酸 丙酮酸脫羧酶復合體中的輔酶 （硫辛酰氨轉乙酰酶和二氫硫辛酰氨脫氫酶的輔酶） 十、 維生素 C 結構 化學名稱：抗壞血酸 來源 :食物。 DNA由 A、 G、 C、 T 堿基構成。 第二節 DNA的結構 一級：脫氧核苷酸分子間連接方式及排列順序。 WatsonCrick 雙螺旋結構建立 的根據 ① Chargaff 規律 1950 年 a. 所有 DNA中， A=T， G=C 且 A+G=C+T。