正文內容

不同類型細胞的培養特點-免費閱讀

2025-10-05 02:43 上一頁面

下一頁面

　　

【正文】毛細血管細小，結構簡單，內皮細胞外有較多的結締組織，進行別離培養有很大困難。受體動物以裸鼠最好。在比重 ~ 層為成纖維細胞，在比重 ~ 層為上皮細胞，再經過別離進行培養。 3．消化排除法： (1) 先是用％胰蛋白酶和％ EDTA (1:1) 混合液漂洗培養細胞一次，然后再換成新的混合液繼續消化，并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養瓶，到半數細胞脫落下來后，便立即停止消化； (2) 把消化液吸入離心管中，離心去上清，吸入另瓶中，加培養液置溫箱中培養；向原瓶內也補加新的培養液繼續培養。刮除程序為： (1) 標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的反面圈下生長腫瘤細胞的部位； (2) 刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標記空間； (3) 用 Hanks 液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細胞； (5) 注入培養液繼續培養，如發現仍有成纖維細胞殘留，可重復刮除至完全除掉為止。腫瘤細胞對培養環境適應性較大。培養方法腫瘤細胞培養成功關鍵在于：取材、成纖維細胞的排除、選用適宜的培養液和培養底物等幾個方面。 (三 ) 培養方法人腦組織可用于神經膠質細胞培養，培養組織來自手術室無菌取腦髓灰質或白質均可用于培養， 1．程序： (1) 細胞懸液制備：獲取腦組織后，先仔細剝除腦膜和血管等纖維成分，置入 Hanks 液中漂洗 1 ~ 2 次后，置于 30 ~ 50倍的 Hanks 液中；腦組織比較柔軟，反復吹打即可制備成細胞懸液； (2) 排除脂肪成分和其它碎塊：把懸液注入離心管中，在室溫直立 5 ~ 10 分鐘后，細胞或細胞團塊自然下沉，脂肪等雜物易漂浮于懸液表層，吸除上清，如此反復二三次可獲較多的細胞成分；第五十三頁，共七十頁。第四十八頁，共七十頁。第四十四頁，共七十頁。一般在融合后二三天內能見到收縮現象；因收縮運動有時可導致細胞從底物脫離。三、肌組織細胞培養 ? 以心肌和骨骼肌培養較為實用。用 40μg 的PHA 注入腹腔中，能產生 6 ~ 8 106 個細胞，而且無刺激性，效果較好。第三十五頁，共七十頁。二、結締組織類細胞培養 (一 ) 成纖維細胞培養 ?包括人在內的各種成纖維細胞都很容易培養，也是其它組織培養時的副產物，極易獲得。 2．初代培養 (1) 取材：取新鮮牛腎上腺數個，先用 Hanks 液洗除血污； (2) 消化：剝除被膜，別離出皮質，切成 l mm3 小塊，加％膠原酶室溫中消化 1 小時；每隔 10 分鐘用吸管吹打懸液令消化充分； (3)過濾：通過不銹鋼紗網濾過，網眼要求只允許能通過小于 110 微米長的毛細血管小段； (4)離心： 650 rpm， 4℃ ，離心 7 分鐘后，棄掉上清膠原酶；第二十七頁，共七十頁。用兔血管內皮細胞培養較好，可傳 10 ~ 30 代； ?不同部位血管內皮細胞生物學性狀不同，對各種作用因素反響亦有很大差異。 (四 ) 內皮細胞培養 ?應用材料：人臍帶臍靜脈、動物大動脈等，用灌流消化法獲取細胞最為簡便。取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝剪成 1mm3 左右的小塊，采用貼壁培養法。 (二 ) 胃上皮細胞培養 ?適于胃上皮細胞生長的條件是： ① 膠原酶和透明質酸酶消化法并用消化細胞； ② 應用膠原底物培養； ③ 制備含有特定成分的培養基；第十二頁，共七十頁。飼細胞的制備： (1)取原代培養的人或動物胚胎成纖維細胞， 90% 集合時制成細胞懸液，再按103 細胞 /毫升重新接種培養； (2)在細胞半集合時，準備絲裂霉素，按 2ug/105 細胞的量參加到培養瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量 30～ 50 戈瑞 (Gy)； (3)細胞經上述處理后， Hanks 液漂洗兩次、更換培養液、再培養 24 小時，胰蛋白酶消化細胞制成懸液，按 5 104/ml接種入新培養基中； (4)48 小時后，即可用于細胞克隆之用。 ? 降低 pH、 Ca2+的含量和溫度等，均利于表皮細胞生長。 ?正常細胞難培養的原因是它們是分化的細胞，對體外生存條件要求嚴格 . ?但只要一切條件適當仍有培養成功可能。第三頁，共七十頁。 ? 向培養基中加氫化可的松 (10 μg/m1)、 106M的異丙基腎上腺素(Isoproterenol) 和 10 ng/m1 促表皮生長因子 (EGF) 能促表皮細胞生長。第八頁，共七十頁。 ? 培養程序： ? (1) 取材：取胃潰瘍或胃癌手術切除胃標本遠端非病變區粘膜少許； ? (2) 清洗：用含慶大霉素 (400μg/m1)和兩性霉素(2μg/m1 的 Hanks)液漂洗后，用鈍器剝離下粘膜，剪成 1mm大小； ? (3) 消化：在 I 型膠原酶和透明質酸酶中，于 37℃ 中消化 80 分鐘； ?

點擊復制文檔內容

環評公示相關推薦

不同類型細胞的培養特點-免費閱讀

攝影技巧：不同類型用光角度的選擇-資料下載頁

血手印在不同類型客體上的顯現-資料下載頁

[精選]如何向四種不同類型的人銷售-資料下載頁

不同類型企業供應鏈管理的路徑-資料下載頁

不同類型物業管理ppt課件-資料下載頁

四種不同類型的停電通知-資料下載頁

不同類型企業營銷案例大全-資料下載頁

2022四種不同類型的自我介紹-資料下載頁

銷售技巧之不同類型顧客應對技巧-資料下載頁

不同類型熱液金礦系統的流體包裹體特征-資料下載頁

蘇教版化學必修2不同類型的晶體1-資料下載頁

2022四種不同類型的自我介紹-資料下載頁

如何與不同類型的人溝通(性格色彩)-資料下載頁

水平井在不同類型油藏中的應用-資料下載頁

四種不同類型客戶的應對方式-資料下載頁

不同類型細胞的培養特點-wenkub

不同類型細胞的培養特點(已修改)

不同類型細胞的培養特點(編輯修改稿)

不同類型細胞的培養特點-wenkub.com

不同類型細胞的培養特點(已改無錯字)