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不同類型細胞的培養特點-wenkub

2024-10-06 02 本頁面

　

【正文】常細胞，在體外培養時都不易生長，建立細胞系更難。第四頁，共七十頁。 (一 )表皮細胞培養 1．特點： ? 在有膠原的底物上易生長； ? 把人或小鼠表皮細胞培養在以 3T3 細胞為飼養層 (用射線照射后 )上時，細胞易生長并可發生一定程度的分化現象。 ?【飼細胞】飼細胞 (Feeder Cells)也稱滋養細胞，是一層經過射線照射或絲裂霉素傷害處理的、用作克隆細胞附著底物的細胞層。第七頁，共七十頁。 (3) 冷消化：換入 % 胰蛋白酶中，置 4℃過夜； (4) 別離：取出皮塊，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開；第九頁，共七十頁。第十一頁，共七十頁。細胞接種后一般在 16 小時內貼壁，細胞呈多角形，成島狀或片狀生長，以后逐漸聯接成片。 1．初代組織塊培養： ?肝組織做組織塊培養效果很好。 2．初代消化法培養： (1) 把肝組織切成 2 ~ 4 立方毫米的小塊，用不合鈣鎂的BSS 液洗兩次； (2) 移入 1:1 的％胰蛋白酶和％膠原酶 (都用無鈣鎂 BSS 配制 ) 中， 4℃ 冷消化 10 ~ 12 小時后，通過 250 微米和 64 微米尼龍網或不銹鋼紗網濾過 (用紗布濾過亦可 )； (3) 收集細胞、 BSS 液洗 1 ~ 2 次、計數、接種培養；第十六頁，共七十頁。第十八頁，共七十頁。 2. 其它如胚胎和幼體動物的大血管，亦可用于培養； (2) 先用三通注射器吸溫 PBS 液注入臍帶的臍靜脈中，洗除殘血；注入口處宜用線繩結扎，以防液體返流；第二十頁，共七十頁。 ?人臍帶易于獲得，培養效果好；細胞生長后，一般傳 6 ~ 7 代后即衰退，難以長期維持。 ?近年毛細血管培養已獲成功； ?利用人的小兒包皮、人脾臟、牛腎上腺、癌組織 (如卵巢癌 ) 等均可；第二十四頁，共七十頁。第二十六頁，共七十頁。第二十八頁，共七十頁。第三十一頁，共七十頁。第三十二頁，共七十頁。小鼠成纖維細胞；細胞來源： swiss小鼠胚胎第三十四頁，共七十頁。但屬不繁殖型細胞群，難以長期生存，好的條件下僅能生活 2 ~ 3周，因之多用作初代培養。 ?實驗多從動物血液、肺、脾和胸腹腔獲取，其中以從動物腹腔取材最常用。人的材料除來源不同外，培養方法大同小異。第四十頁，共七十頁。 (1) 取材：殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成 ~ 厘米小塊； (2)消化：用不含鈣鎂離子的 Hanks 液配的％胰蛋白酶消化，無菌紗網或紗布濾過，合成培養基加 10％小牛 (或馬 )血清培養，為促進分化可加 1％的胎汁；第四十一頁，共七十頁。數日后融合停止，此時能觀察到橫紋。 ?心肌是比較容易培養和生長的組織，可應用多種方法進行培養，如懸滴培養、組織塊培養和消化培養法等，主要取心室肌培養，均能獲得良好的生長效果。在培養成功時，相差顯微鏡下可觀察到橫紋；一周后便可出現節律性收縮現象。四、神經組織細胞培養神經組織主要由兩種神經細胞 (神經元和神經膠質細胞〕組成。神經膠質細胞與神經元有共存關系。第五十一頁，共七十頁。第五十二頁，共七十頁。 2．生長特點： ?接種后初期，細胞可能出現飄浮不貼壁現象，貼壁后在短期內也可能不見細胞分裂現象；細胞適應環境過程較長，然而一旦生長后，即能進入較旺盛的增殖狀態。第五十六頁，共七十頁。取材時盡量防止用退變組織，要挑選活力較好的部位。腫瘤細胞對血清的需求比正常細胞低，正常細胞培養不加血清不能生長，腫瘤細胞在低血清培養基中也能生長。 3．成纖維細胞的排除： ?成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細胞。成纖維細胞排除法 1．機械刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭 (用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲 )，或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用 (也可用特制電熱燒灼器刮除 )。第六十一頁，共七十頁。第六十二頁，共七十頁。 4．膠原酶消化法：本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進行選擇。 5．其它方法：有人發現聚丙烯酰胺有抑制成纖維細胞生長的作用；也有人用聚蔗糖制備成比重 ~ 的密度梯度離心液，參加細胞懸液后，在 23℃ 中 800g 離心 10 分鐘。第六十五頁，共七十頁。 3．動物體媒介培養： ? 為提高腫瘤細胞對體外培養環境的適應力和增加有活力癌細胞 (干細胞 ) 的數量，可采用動物體轉嫁接種成瘤后，再從動物體內取出進行培養，能提高體外培養的成功率。肝癌細胞第六十八頁，共七十頁。取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝剪成 1mm3 左右的小塊，采用貼壁培養法。。動物可用小鼠或雞胚，去頭和內臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養。內容總結

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