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不同類型細胞的培養特點-文庫吧在線文庫

2025-10-08 02:43上一頁面

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【正文】 ?毛細血管細小，結構簡單，內皮細胞外有較多的結締組織，進行別離培養有很大困難。毛細血管小段一般成自 1 ~ 4 個內皮細胞，以后每個小段在底物上慢慢展成特殊形態的細胞島，能持續 2 ~ 5 天。幼兒包皮是培養成纖維細胞的很好對象。 ? 巨噬細胞容易獲得，便于培養，并可進行純化。 2．培養方法： ? 培養巨噬細胞可用各種方法和各種來源獲取細胞，其中以小鼠腹腔取材法最為實用。取材常用生后 1 ~ 2 天的乳鼠 (Wistar 大鼠更好 )。 (二 ) 心肌細胞培養 ?最常用材料： ?雞胚心肌、小鼠、大鼠以及人胎兒心肌等都可應用。第四十六頁，共七十頁。大鼠 c6膠質細胞第五十頁，共七十頁。第五十四頁，共七十頁。一、要點 1．取材：人腫瘤細胞來自外科手術或活檢瘤組織。第五十八頁，共七十頁。 2．反復貼壁法：根據腫瘤細胞比成纖維細胞貼壁速度慢的特點，并結合使用不加血清的營養液， (1) 細胞生長達一定數量后，倒出舊培養液，用胰酶消化后， Hanks 沖洗 2 次，參加不含血清的培養液，吹打制成細胞懸液； (2) 編號為 A、 B、 C 三個培養瓶；首先把懸液接種入 A 培養瓶中，置溫箱中靜止培養 5— 20 分鐘后，輕輕傾斜培養瓶，讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養液，再接種入 B 培養瓶中后；向 A 瓶中補充少許完全培養液置溫箱中繼續培養； (3) B瓶中細胞 5~20 分鐘后，按處理 A 的方法，把培養液注入 C 培養瓶中；再向 B 瓶中補加完全培養基。第六十三頁，共七十頁。選用上述任何一種方法，都需進行試驗，取得必要經驗，找出適合的條件，才能獲得好的效果。 Hela細胞第六十七頁，共七十頁。神經元能發生一定分化現象，如生長突起，但因無增殖能力，最后衰退死亡第七十頁，共七十頁。正常細胞，在體外培養時都不易生長，建立細胞系更難。根據細胞種類不同選用不同的促生長物，常用有胰島素、氫化可的松、雌激素以及其它生長因子。第六十四頁，共七十頁。必要時可反復處理屢次，直至癌細胞純化為止。第五十九頁，共七十頁。 2．培養基： ? 腫瘤細胞對培養基的要求不如正常細胞嚴格，一般常用的 RPMI l6 DMEM、 McCoy5A 等培養基等皆可用于腫瘤細胞培養。 ?腫瘤細胞培養是研究癌變機理、抗癌藥檢測、癌分子生物學極其重要的手段。不僅能獲得生長的膠質細胞并可形成能傳代的二倍體細胞系。 ?神經膠質細胞為較易培養成分，它分少突、星形和小膠質三種。初代培養的雞胚心肌呈紡錘形， ? 純化及生長特點：常雜有成纖維細胞和內皮細胞；心肌細胞亦較其它成分貼壁慢，可反復貼壁法排除其它細胞成分。生長特點：細胞生長開始呈紡錘形，培養 50 ~ 52 小時后將出現融合形成肌細胞狀多核纖維。第三十九頁，共七十頁。 1．培養技術要點： ?[來源和取材 ] 巨噬細胞可來源于人胸水、腹水、血和透析液等材料。第三十三頁，共七十頁。第三十頁，共七十頁。 [凝膠底層制備 ] (1) 取 60 mm Falcon 產培養皿，加 1% Difco 產明膠 (用不合鈣和鎂的 Hanks 液配制 )，鋪蓋瓶底，形成薄層； (2) 置 4℃ 過夜；用前再用少許培養液沖洗一次。第二十二頁，共七十頁。 (3) 待吸凈消化液后，注入離心管中，低速離心別離，用 RPMI 1640 培養基培養 (較其它培養基為好 )，能獲得較純的肝上皮細胞和獲較好的效果。 (三 ) 肝細胞培養 ?肝臟具有取材方便和易于生長的優點，能獲得典型上皮細胞培養。 ?本卷須知：冷消化目的在于使表皮和真皮結合松散；如冷消化后別離下來的表皮膜自身也已松散，此時亦可直接置入 PBS 中用吸管吹打制備細胞懸液；不再經過第二次消化。克隆形成后飼細胞漸死亡，換液時去除。第五頁，共七十頁。類型：正常細胞培養腫瘤細胞培養第二頁，共七十頁。第四頁，共七十頁。 ?【飼細胞】飼細胞 (Feeder Cells)也稱滋養細胞，是一層經過射線照射或絲裂霉素傷害處理的、用作克隆細胞附著底物的細胞層。 (3) 冷消化：換入 % 胰蛋白酶中，置 4℃過夜； (4) 別離：取出皮塊，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開；第九頁，共七十頁。細胞接種后一般在 16 小時內貼壁，細胞呈多角形，成島狀或片狀生長，以后逐漸聯接成片。 2．初代消化法培養： (1) 把肝組織切成 2 ~ 4 立方毫米的小塊，用不合鈣鎂的BSS 液洗兩次； (2) 移入 1:1 的％胰蛋白酶和％膠原酶 (都用無鈣鎂 BSS 配制 ) 中， 4℃ 冷消化 10 ~ 12 小時后，通過 250 微米和 64 微米尼龍網或不銹鋼紗網濾過 (用紗布濾過亦可 )； (3) 收集細胞、 BSS 液洗 1 ~ 2

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