正文內容

不同類型細胞的培養特點-資料下載頁

2025-09-27 02:43本頁面

　　

【正文】加血清不能生長，腫瘤細胞在低血清培養基中也能生長。腫瘤細胞對培養環境適應性較大。 ? 培養腫瘤細胞仍需加血清和相關生長因子培養更易成功。第五十八頁，共七十頁。 3．成纖維細胞的排除： ?成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細胞。而且成纖維細胞常比腫瘤細胞生長得快，最終能壓制腫瘤細胞的生長。因此排除成纖維細胞成為腫瘤細胞培養中的關鍵。第五十九頁，共七十頁。成纖維細胞排除法 1．機械刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭 (用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲 )，或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用 (也可用特制電熱燒灼器刮除 )。刮除程序為： (1) 標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的反面圈下生長腫瘤細胞的部位； (2) 刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標記空間； (3) 用 Hanks 液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細胞； (5) 注入培養液繼續培養，如發現仍有成纖維細胞殘留，可重復刮除至完全除掉為止。第六十頁，共七十頁。 2．反復貼壁法：根據腫瘤細胞比成纖維細胞貼壁速度慢的特點，并結合使用不加血清的營養液， (1) 細胞生長達一定數量后，倒出舊培養液，用胰酶消化后， Hanks 沖洗 2 次，參加不含血清的培養液，吹打制成細胞懸液； (2) 編號為 A、 B、 C 三個培養瓶；首先把懸液接種入 A 培養瓶中，置溫箱中靜止培養 5— 20 分鐘后，輕輕傾斜培養瓶，讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養液，再接種入 B 培養瓶中后；向 A 瓶中補充少許完全培養液置溫箱中繼續培養； (3) B瓶中細胞 5~20 分鐘后，按處理 A 的方法，把培養液注入 C 培養瓶中；再向 B 瓶中補加完全培養基。第六十一頁，共七十頁。 ?當三個瓶內都含有培養液后，均在溫箱中繼續培養。如操作成功，次日觀察可見 A 瓶主要為成纖維細胞， B 瓶兩類細胞相雜， C 瓶可能主要為癌細胞。必要時可反復處理屢次，直至癌細胞純化為止。第六十二頁，共七十頁。 3．消化排除法： (1) 先是用％胰蛋白酶和％ EDTA (1:1) 混合液漂洗培養細胞一次，然后再換成新的混合液繼續消化，并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養瓶，到半數細胞脫落下來后，便立即停止消化； (2) 把消化液吸入離心管中，離心去上清，吸入另瓶中，加培養液置溫箱中培養；向原瓶內也補加新的培養液繼續培養。用此法處理后，成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落，經過幾次反復處理，可能把成纖維細胞除凈。第六十三頁，共七十頁。 4．膠原酶消化法：本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進行選擇。 (1) 可用 0． 5mg／ ml 的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當發現成纖維細胞被除掉后，即終止消化； (2) 用 Hanks 洗滌處理一次后，更換新培養液，繼續培養，可獲純潔腫瘤細胞。如成纖維細胞末被除凈，可再次重復。第六十四頁，共七十頁。 5．其它方法：有人發現聚丙烯酰胺有抑制成纖維細胞生長的作用；也有人用聚蔗糖制備成比重 ~ 的密度梯度離心液，參加細胞懸液后，在 23℃ 中 800g 離心 10 分鐘。在比重 ~ 層為成纖維細胞，在比重 ~ 層為上皮細胞，再經過別離進行培養。最近也有人應用特殊化學物如 SOD 抑制成纖維細胞生長的方法。選用上述任何一種方法，都需進行試驗，取得必要經驗，找出適合的條件，才能獲得好的效果。第六十五頁，共七十頁。二、提高腫瘤細胞培養存活率和生長率措施 1．適宜底物： ? 如：把經過純化的細胞接種在不同的底物上，如鼠尾膠原底層、飼細胞層等。 2．生長因子： ? 應用促細胞生長因子，向培養液中增加一種或幾種促細胞生長因子。根據細胞種類不同選用不同的促生長物，常用有胰島素、氫化可的松、雌激素以及其它生長因子。 3．動物體媒介培養： ? 為提高腫瘤細胞對體外培養環境的適應力和增加有活力癌細胞 (干細胞 ) 的數量，可采用動物體轉嫁接種成瘤后，再從動物體內取出進行培養，能提高體外培養的成功率。受體動物以裸鼠最好。第六十六頁，共七十頁。 Hela細胞第六十七頁，共七十頁。肝癌細胞第六十八頁，共七十頁。人乳腺癌細胞株 MCF7 第六十九頁，共七十頁。內容總結第六章個別細胞和組織的培養。正常細胞，在體外培養時都不易生長，建立細胞系更難。取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝剪成 1mm3 左右的小塊，采用貼壁培養法。毛細血管細小，結構簡單，內皮細胞外有較多的結締組織，進行別離培養有很大困難。動物可用小鼠或雞胚，去頭和內臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養。神經元能發生一定分化現象，如生長突起，但因無增殖能力，最后衰退死亡第七十頁，共七十頁。

點擊復制文檔內容

環評公示相關推薦

鄂ICP備17016276號-1

^{<blockquote id="wsnp4"></blockquote>}

不同類型細胞的培養特點-資料下載頁

怎樣應對不同類型的客戶-資料下載頁

不同類型物業管理培訓課件-資料下載頁

[精選]銷售員接待不同類型的顧客-資料下載頁

不同類型客戶應對技巧-資料下載頁

不同類型肺水腫的ct表現-資料下載頁

不同類型物業的物業管理-資料下載頁

如何應對不同類型客戶-資料下載頁

不同類型葡萄的根ppt課件-資料下載頁

與不同類型的家長溝通方法-資料下載頁

各種不同類型員工的管理-資料下載頁

不同類型員工的溝通管理技巧-資料下載頁

與不同類型人溝通的技巧-資料下載頁

不同類型的受賄犯ppt課件-資料下載頁

[精選]不同類型物業管理的公共關系-資料下載頁

不同類型微信公眾號不同的推廣策略-資料下載頁

不同類型細胞的培養特點-預覽頁

不同類型細胞的培養特點-免費閱讀

不同類型細胞的培養特點(存儲版)

不同類型細胞的培養特點-文庫吧在線文庫

不同類型細胞的培養特點(完整版)