hplc法在國內外藥典中的應用與比較(完整版)

　　

【正文】 藥品檢驗所 色譜條件的調整 Adjustment of Chromatographic Conditions 3/1/2023 46 山東省藥品檢驗所 CHP(2023) ? 明確規定： ? 不可變的有 ：固定相的種類、流動相的組分、檢測器類型 ? 可變的有 ：色譜柱內徑、長度、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進樣量、檢測器的靈敏度。10% provided the permitted pH variation is met apply to minor ponents can be adjusted by 177。 10% absolute in either ponent. Therefore, the mobile phase ratio may be adjusted only within the range of 40:60 to 60:40. ? SPECIFIED RATIO OF 2:98 —Thirty percent of 2 is % absolute. Therefore the maximum allowed adjustment is within the range of : to :. 3/1/2023 51 山東省藥品檢驗所 USP(32) ? Ternary Mixtures — ? SPECIFIED RATIO OF 60:35:5 —For the second ponent, 30% of 35 is % absolute, which exceeds the maximum permitted change of 177。25% maximum reduction of 50% no increase permitted 177。70% 177。 3/1/2023 69 山東省藥品檢驗所 ? 不同的色譜柱公司都有不同的柱子供選擇。 3/1/2023 65 山東省藥品檢驗所 色譜柱的選擇 鍵合相 應用 硅膠 小分子有機物，天然產物，脂溶性維生素，維生素 E C18 藥物，天然產物，農用化學品，維生素，堿性化合物，一般的反相應用 大極性化合物，藥物，維生素，抗生素 親水性蛋白質，寡聚核苷酸 堿性化合物，在高 pH條件下增加保留和載樣量 C12 藥物，天然產物，農用化學品，維生素，氨基酸，堿性化合物，一般的反相應用 C8 藥物，雌性激素，堿性化合物，一般反相應用 C5 極性化合物及疏水性蛋白質 C4 疏水性蛋白質 苯基 極性和芳香化合物，抗生素，油脂，酚類，甜味劑 氰基 藥物，脂類，類固醇，鄰苯二甲酸鹽，含有羧基、羰基、伯、仲、叔胺基的化合物 氨基 糖類，糖醇，陰離子化合物，類固醇，維生素，核苷酸，寡聚核苷酸 SCX 胺類和聚胺類化合物，核苷酸，多肽 3/1/2023 66 山東省藥品檢驗所 色譜柱的選擇 ? 特殊的： ? 含光學異構體（對映體） ——特殊的手性柱 ? 含其他異構體（立體、位置） ——一般正相柱最佳，尤其用原硅膠柱 ? 無機鹽混合物 ——離子色譜法 ...... 3/1/2023 67 山東省藥品檢驗所 耐用性 ? 耐用性試驗經常會提到用不同類型的色譜柱進行試驗。 for a minor ponent at 10 % of the mobile phase, a 30 % relative adjustment allows a range of 713% wherea 2% absolute adjustment allows a range of 812%, the relative value being therefore the larger。10% Minor ponent 30% relative or 177。25% can be reduced by as much as 50% 177。 10％為限，如 30％相對改變量的數值超過總量的 10％時，則改變量以總量的177。 ? 內標法：配制相當于 80%、 100%、 120%的對照品溶液，加入內標溶液，分別至少進樣 2次，計算平均校正因子的 RSD不得過 % 。 3/1/2023 23 山東省藥品檢驗所 USP and EP USP(32) EP() ?Fixed, variable and multiwavelength detectors are widely available. ?UV、 RID、 FLD、 ECD...... ?New detectors continue to be developed in attempts to overe the deficiencies of those being used. ?UV/Vis spectrophotometers, including diode array detectors, are the most monly employed detectors. 3/1/2023 24 山東省藥品檢驗所 流動相 CHP(2023) ?反相系統首選甲醇 水系統 （ 采用紫外末端波長檢測 ，首選乙腈 水系統 ） ?緩沖鹽：少用 ， 盡可能低 ?反相色譜系統 ， C18柱 ， 有機相比例應不低于 5%。 ?缺點：干擾比較多，對溫度和流速的變化比較敏感。 ?優點：通用型檢測器，對各種物質有幾乎相同的響應。 ? GeminiNX C18柱： 色譜柱 ?乙烷交聯，抵抗高 pH侵蝕 ?多點配體鍵合，抵抗低 pH下配體水解 ?pH1~12穩定！ ?Kiex C18柱：通過核 殼顆粒技術，使顆粒減小到，而無需高壓即可達到提高速度、分離度和靈敏度的效果。HPLC法在國內外藥典中的 應用與比較 山東省藥品檢驗所化學藥品科 王小兵 3/1/2023 1 山東省藥品檢驗所 匯報的主要內容 ? 一、簡述 ? 二、高效液相色譜儀 ? 三、系統適用性 ? 四、色譜條件的調整 ? 五、 HPLC的應用及方法開發 3/1/2023 2 山東省藥品檢驗所 一、簡述 ? 《 中國藥典 》 2023年版二部共收載 2271個品種 ，新增品種 330個 ， 修訂品種 1500個 ， 涉及 HPLC檢測項目的品種有 1291個 ， 占總品種的 57%， 其中新增 /修訂 926個 。 3/1/2023 13 山東省藥品檢驗所 色譜柱 ? Zorbax StableBond柱： ? 采用了較大的二異丁基 (SBC18)或二異丙基 (SBC SBC SBPhenyl、 SBCN、 SBAq)側鏈基團和空間位阻 ， 避免了在低 pH條件下的水解破壞 ，其 ~， 溫度上限也可達到 80~90℃ ， 甚至在 100%水相中也有出色的表現 。 ?缺點：靈敏度相對較低，流動相必須是揮發性的，不能用非揮發性的緩沖鹽及表面活性劑。 ?適用范圍：應用范圍廣，凡具氧化還原活性的或經衍生化后具氧化還原活性的物質。 USP(32) ?Highpurity reagents and “HPLC grade”anic solvents ?water: low condutivity and low UV absorption EP() ?For nomalphase chromatography, less polar solvents are employed. Water is to be strictly controlled! ? ?degassed by sparing with helium,sonication or using online membrane/vacuum ?Adjustment of the pH,is effected using only the aqueous ponent of the mobile phase and not the mixture. 3/1/2023 25 山東省藥品檢驗所 系統適用性 System Suitability 3/1/2023 26 山東省藥品檢驗所 定義 ? CHP(2023):色譜系統的適用性試驗通常包括 理論板數 、分離度 、 重復性 和 拖尾因子 四個參數 ， 其中 ， 分離度和重復性 尤為重要 。 3/1/2023 35 山東省藥品檢驗所 重復性 USP(32): ? Unless otherwise specified in the individual monograph , data from five replicate injections of the analyte are used to calculate the relative standard deviation, SR, if the requirment is % or less。 10％為限。50% 177。2% absolute whichever is larger. No ponent can