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不同類型細胞的培養(yǎng)特點(完整版)

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【正文】次、計數(shù)、接種培養(yǎng)；第十六頁，共七十頁。 2. 其它如胚胎和幼體動物的大血管，亦可用于培養(yǎng)； (2) 先用三通注射器吸溫 PBS 液注入臍帶的臍靜脈中，洗除殘血；注入口處宜用線繩結(jié)扎，以防液體返流；第二十頁，共七十頁。 ?近年毛細血管培養(yǎng)已獲成功； ?利用人的小兒包皮、人脾臟、牛腎上腺、癌組織 (如卵巢癌 ) 等均可；第二十四頁，共七十頁。第二十八頁，共七十頁。第三十二頁，共七十頁。但屬不繁殖型細胞群，難以長期生存，好的條件下僅能生活 2 ~ 3周，因之多用作初代培養(yǎng) 。人的材料除來源不同外，培養(yǎng)方法大同小異。 (1) 取材：殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成 ~ 厘米小塊； (2)消化：用不含鈣鎂離子的 Hanks 液配的％胰蛋白酶消化，無菌紗網(wǎng)或紗布濾過，合成培養(yǎng)基加 10％小牛 (或馬 )血清培養(yǎng)，為促進分化可加 1％的胎汁；第四十一頁，共七十頁。 ?心肌是比較容易培養(yǎng)和生長的組織，可應(yīng)用多種方法進行培養(yǎng)，如懸滴培養(yǎng)、組織塊培養(yǎng)和消化培養(yǎng)法等，主要取心室肌培養(yǎng)，均能獲得良好的生長效果。四、神經(jīng)組織細胞培養(yǎng) 神經(jīng)組織主要由兩種神經(jīng)細胞 (神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞〕組成。第五十一頁，共七十頁。 2．生長特點： ?接種后初期，細胞可能出現(xiàn)飄浮不貼壁現(xiàn)象，貼壁后在短期內(nèi)也可能不見細胞分裂現(xiàn)象；細胞適應(yīng)環(huán)境過程較長，然而一旦生長后，即能進入較旺盛的增殖狀態(tài)。取材時盡量防止用退變組織，要挑選活力較好的部位。 3．成纖維細胞的排除： ?成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細胞。第六十一頁，共七十頁。 4．膠原酶消化法：本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進行選擇。第六十五頁，共七十頁。肝癌細胞第六十八頁，共七十頁。。內(nèi)容總結(jié) 第六章個別細胞和組織的培養(yǎng)。 2．生長因子： ? 應(yīng)用促細胞生長因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細胞生長因子。如成纖維細胞末被除凈，可再次重復。如操作成功，次日觀察可見 A 瓶主要為成纖維細胞， B 瓶兩類細胞相雜， C 瓶可能主要為癌細胞。因此排除成纖維細胞成為腫瘤細胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵。第五十七頁，共七十頁。第二節(jié) 腫瘤細胞培養(yǎng) ?腫瘤細胞在組織培養(yǎng)中占有核心的位置，首先癌細胞是比較容易培養(yǎng)的細胞，當前建立的細胞系中癌細胞系是最多的。 ? (二 ) 傳代培養(yǎng) ? 神經(jīng)膠質(zhì)細胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。第四十七頁，共七十頁。 ? [程序 ] ? (1) 選新鮮受精雞卵，置溫箱中孵育 (溫箱中放有水槽，以維持箱內(nèi)濕度 )；每日翻動一次 (180 度 )，孵育 9 ~ 12 天； ? (2) 取雞胎； ? (3) 用眼科剪剪開胸腔，剝出心臟，置入皿中用 Hanks 液漂洗1 ~ 2 次； ? (4) 小心剪除大的動靜脈，保存心室肌；用組織塊或消化培養(yǎng)法均可。明膠制備比較簡單，常用 Hanks 液配的％明膠。 (5) 用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側(cè)，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)； (6) 小心拔出針頭，把液體注入離心管中， (4℃ )離心 10 分鐘后，去上清，加 10 ml Eagle 培養(yǎng)基； (7) 計數(shù)細胞，每只小鼠可產(chǎn)生 20 ~ 30 106 細胞，其中90％為巨噬細胞； (8) 為獲取 3 105 個貼附細胞／平方厘米，需接種 106／ m1； (9) 為純化培養(yǎng)細胞，去除其它白細胞，接種數(shù)小時后，去除培養(yǎng)液，用 Eagle 液沖洗 1 ~ 2 次后，再加新Eagle 培養(yǎng)液置 37℃ CO2 溫箱中培養(yǎng)。第三十六頁，共七十頁。 ?在培養(yǎng) ES細胞時，應(yīng)選擇第 3~5代的小鼠成纖維細胞作為飼養(yǎng)層細胞。 (3) 用培養(yǎng)液漂洗兩次，以去除漂浮細胞； (4) 剩余內(nèi)皮細胞島如小 (5 ~ 20 個細胞 ) 而少時，生長增殖常變得緩慢或完全不生長，此時需參加 3T3等飼細胞；飼細胞接種量為 4000 細胞／ cm2； (5) 當內(nèi)皮細胞充滿所有飼細胞空間后，用胰蛋白酶消化、離心、參加腫瘤條件培養(yǎng)基； (6) 接種入明膠底物皿中繼續(xù)培養(yǎng) (飼細胞死亡被淘汰 )，細胞增殖生長集合后，按 1:5 傳代。 (3) 在細胞生長接近完全集合時，收集培養(yǎng)液制成條件培養(yǎng)基；再用含 10％小牛血清的新培養(yǎng)液后，也每隔兩天收集一次，可獲多量條件培養(yǎng)基； (4) 4000 轉(zhuǎn)／別離心后，再通過微孔濾膜濾過， 20℃ 凍存?zhèn)溆?(臨用前融解 )。第二十一頁，共七十頁。 (1) 無菌解剖動物，取出肝臟，先用 BSS 洗除血污； (2) 取 5ml 注射器一支，吸取消化液后，把注射器頭輕輕插入肝管中，用線繩結(jié)扎牢固，以防消化液漏出，輕輕把消化液注入膽管系統(tǒng)，并不時輕柔壓肝臟，以便消化液進入肝小葉中

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