不同類型細胞的培養特點(專業版)

　　

【正文】 人乳腺癌細胞株 MCF7 第六十九頁，共七十頁。 (1) 可用 0． 5mg／ ml 的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當發現成纖維細胞被除掉后，即終止消化； (2) 用 Hanks 洗滌處理一次后，更換新培養液，繼續培養，可獲純潔腫瘤細胞。而且成纖維細胞常比腫瘤細胞生長得快，最終能壓制腫瘤細胞的生長。 ?生長開始常雜有巨噬細胞、成纖維細胞和上皮細胞等，傳二、三代后，這些成分即消失，逐漸形成均一的星形膠質細胞，一般形成連接不甚緊密的單層細胞 第五十五頁，共七十頁。 神經元為高度分化的細胞，在組織發生晚期已失掉增殖能力，對生存條件要求高，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或在參加神經生長因子 (NGF) 和膠質細胞因子時，才能生存，并可能出現一定程度的分化現象，如長出突起等，但卻難使之增殖；即使培養胚胎組織情況也是如此。 (3)接種：細胞接種量為 2 106/皿；接種在膠原或明膠的底物上能促進細胞分化。 ? 巨噬細胞也能建成無限細胞系；大多來自小鼠，如P388D J774A． RAW30 Cr. 1 等。 3．毛細血管內皮細胞別離培養： (1) 初代培養 2 ~ 3 天后，鏡下確認幾個毛細血管內皮細胞島，在培養皿反面，用不脫色筆劃圈圈起； (2) 鏡下檢查，如圈內殘有非內皮細胞時，可用顯微細針在倒置顯微鏡下挑除；用細胞解剖器也可，宜在凈化臺無菌氣流中、翻開培養皿蓋進行，但時間不宜過長 (15 ~ 20 分鐘 )；圈外非內皮細胞可用無菌膠刮刮除； 第二十九頁，共七十頁。 (3) 用血管鉗夾緊臍帶一端，從另端向臍靜脈中徐徐注入最終濃度為 ％的膠原酶，待末端出現液體后結扎之，令充滿血管，注入口亦應結扎，以防液體返流，消化 3 ~10 分鐘； (4) 吸出含有內皮細胞的消化液，注入離心管中；為獲取更多細胞，可再注入溫 PBS 沖洗 2 ~ 3 次徹底去除干凈剩余細胞，一并注入離心管中離心； (5) 吸除上清，加 1640 培養液，制成細胞懸液，接種入瓶皿中培養，順利時 2 ~ 3 天內細胞即可長成單層。初代培養可維持 2 ~ 3 周，第一周末達頂峰，最后逐漸衰退剝落。 ?飼細胞作用： ?有同化營養液的能力。第六章 個別細胞和組織的培養 第一頁，共七十頁。 ?飼細胞能促克隆細胞的生長，利于克隆的形成。 第十四頁，共七十頁。 第二十一頁，共七十頁。 (3) 用培養液漂洗兩次，以去除漂浮細胞； (4) 剩余內皮細胞島如小 (5 ~ 20 個細胞 ) 而少時，生長增殖常變得緩慢或完全不生長，此時需參加 3T3等飼細胞；飼細胞接種量為 4000 細胞／ cm2； (5) 當內皮細胞充滿所有飼細胞空間后，用胰蛋白酶消化、離心、參加腫瘤條件培養基； (6) 接種入明膠底物皿中繼續培養 (飼細胞死亡被淘汰 )，細胞增殖生長集合后，按 1:5 傳代。 第三十六頁，共七十頁。 明膠制備比較簡單，常用 Hanks 液配的 ％明膠。 第四十七頁，共七十頁。 第二節 腫瘤細胞培養 ?腫瘤細胞在組織培養中占有核心的位置，首先癌細胞是比較容易培養的細胞，當前建立的細胞系中癌細胞系是最多的。因此排除成纖維細胞成為腫瘤細胞培養中的關鍵。如成纖維細胞末被除凈，可再次重復。 內容總結 第六章 個別細胞和組織的培養。 肝癌細胞 第六十八頁，共七十頁。 4．膠原酶消化法： 本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進行選擇。 3．成纖維細胞的排除： ?成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細胞。 2．生長特點： ?接種后初期，細胞可能出現飄浮不貼壁現象，貼壁后在短期內也可能不見細胞分裂現象；細胞適應環境過程較長，然而一旦生長后，即能進入較旺盛的增殖狀態。 四、神經組織細胞培養 神經組織主要由兩種神經細胞 (神經元和神經膠質細胞〕組成。 (1) 取材 ： 殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成 ~ 厘米小塊； (2)消化 ： 用不含鈣鎂離子的 Hanks 液配的 ％胰蛋白酶消化，無菌紗網或紗布濾過，合成培養基加 10％小牛 (或馬 )血清培養， 為促進分化可加 1％ 的胎汁； 第四十一頁，共七十頁。但屬不繁殖型細胞群，難以長期生存，好的條件下僅能生活 2 ~ 3周，因之多用作初代培養 。 第二十八頁，共七十頁。 2. 其它如胚胎和幼體動物的大血管，亦可用于培養； (2) 先用三通注射器吸 溫 PBS 液注入臍帶的臍靜脈中，洗除殘血 ；注入口處宜用線繩結扎，以防液體返流； 第二十頁，共七十頁。 細胞接種后一般在 16 小時內貼壁，細胞呈多角形，成島狀或片狀生長，以后逐漸聯接成片。 ?【飼細胞】飼細胞 (Feeder Cells)也稱滋養細胞，是一層經過射線照射或絲裂霉素傷害處理的、用作克隆細胞附著底物