基因工程原理(留存版)

　　

【正文】 因治療；人工器官農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)39自主免疫系統(tǒng)疾病 19糖尿病及并發(fā)癥 技術(shù)平臺 ：色譜及色譜 質(zhì)譜，色譜 波譜，波譜 波譜聯(lián)用等分析技術(shù)與層析、臨界萃取等分離技術(shù)specificity（二）、限制性內(nèi)切酶的定義、命名GG(A/T)CCN５）限制酶切后產(chǎn)生兩個末端，末端結(jié)構(gòu)是５ ’Ｐ和３ ’ＯＨACGTC5’均為單體，分子量為 47—108mCGG如： M.1.1)用途 3)HO339。OH339。24bbRNaseDNA，但無核苷酸序列特異型，產(chǎn)生 5’P低聚核苷酸 。1)HOpol參與 DNA復(fù)制 ,2） 用途：Pol5’3’5’AAGCTT3’T環(huán)形雙鏈的質(zhì)粒 DNA分子具有三種不同的構(gòu)型：共價閉合環(huán)狀DNA（ cccDNA），開環(huán) DNA（ ocDNA），線性 DNA（ cDNA），具有不同的電泳遷移率，可在瓊脂糖凝膠電泳中分開 。(1977,具有較小的分子量和較高的拷貝數(shù)。**有的遺傳標(biāo)記基因可以完成上述兩項作用。1)可結(jié)合在核糖體 30s亞基中的一種蛋白質(zhì)分子上，抑制核糖體的轉(zhuǎn)位過程。α肽基因的結(jié)構(gòu)，細(xì)菌內(nèi)不能產(chǎn)生 β— 半乳糖苷酶活性，菌落呈白色。次克隆 (subcloning)或限制酶譜分析；外源 DNA擴(kuò)增。3)翻譯起始區(qū)（核糖體結(jié)合序列和起始密碼子） +Tcr為原載體 影印到 Ap平板上 DH5α 和 DH5αF’ 都具有一個可供遺傳標(biāo)記 lacZα 檢測的遺傳背景3） March 2023/3/11March 2023/3/11March 2023/3/11idutconsectetur218:438:43:42218:438:43:42218:438:43:42（ 2）受體：各種中間宿主與終宿主的遺傳背景，如遺傳物質(zhì)的傳遞方式 (包括人為的方法 )， DNA限制修飾系統(tǒng)， DNA重組基因特點，基因產(chǎn)物修飾系統(tǒng)，即轉(zhuǎn)錄與翻譯后修飾系統(tǒng)。涂布 Ap平板 pBR322PstI(Apr)片段 用途 :+Ⅱ 型 :b.轉(zhuǎn)錄 翻譯 AAs)。4)其表達(dá)產(chǎn)物可催化某些易檢測的生化反應(yīng)，如 lacZ常用的遺傳標(biāo)記基因及其作用機(jī)制 第一階段（ 1977年前）： 天然質(zhì)粒和重組質(zhì)粒的利用，如 pSC101,編碼抗菌素抗性基因的質(zhì)粒叫 R質(zhì)粒 。3’TTCGAAT3’TTCGAP5’3’DNA模板變性 (95℃) →分子因而可被擴(kuò)增 4106倍。外切酶活性 特點：4） 2） 的 DNA聚合酶系統(tǒng)3)（四）、 （三）、 RNaseExoIII用于DNA標(biāo)記（二）、 Rnase（三）、 RNaseH（二）、 RNasecb42bP539。HO 339。使用注意事項2)在建立基因文庫時，可先使 DNA分子部分甲基化，然后再用限制酶切 CH3CH3CH3RE RE RE RE RERE RERERE RERECH3 CH3CH3與載體相連甲基化酶人工接頭 RE用于基因組文庫的建立用于 cDNA的連接RE RE RE三、核酸酶（ 一）、外切酶 III（ ExoIII）a.M． HpaI20nt。特點： 1）識別相同順序CTCGAGA識別順序和酶切位點EcoRI— Escherichia coli核酸末端修飾酶 — 用 于 DNA和 RNA的末端修飾 采用的基因正在從抗除草劑、抗菌素、抗病蟲害基因到抗逆境、高品質(zhì)方向發(fā)展。骨質(zhì)疏松 231元 /ug紅細(xì)胞生成素 新型食品；營養(yǎng)食品；保健食品；輕工用酶 將目的基因克隆到表達(dá)載體上，導(dǎo)入寄主細(xì)胞，使之在新的遺傳背景下實現(xiàn)功能表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的物質(zhì)。engineering)。目的基因的分離第五節(jié) technique)克隆 (clone): 酶工程的主要內(nèi)容酶的分離純化酶與細(xì)胞的固定化技術(shù)及反應(yīng)器酶制劑的發(fā)酵生產(chǎn)酶分子化學(xué)修飾、遺傳突變及結(jié)構(gòu)改造酶抑制劑與激活劑開發(fā)與研究人工設(shè)計與合成模擬酶及酶分子發(fā)酵工程概念發(fā)酵工程技術(shù)發(fā)酵對象：疾病種類 26神經(jīng)系統(tǒng)疾病 19皮膚病 中藥藥靶 （基因）或作用位點基因的尋找中藥新劑型第二節(jié) 基因工程中的工具酶限制性內(nèi)切酶 — 主 要用于 DNA分子的特異切割 modification狹義指 II型限制酶。ⅢSacIGGATCC： PpuMICCGGN’N’N’N’N’CCGGA5’CCCCCCGGG。GGTACGGCGG改變某些限制酶識別順序的特異性，以便重組體的形成1)2)缺口 ,切口 (nick)P539。OH339。4PP539。用于除去 DNA樣品中的 RNA分子2+當(dāng)酶濃度很低時， ds的切口移位 PolI除去 3’端突起的單鏈 DNA（在無 dNTP時）合成第二條 cDNAT4為 pol3’5’ 五、連接酶（一）、 T4TCGAPOHA5’AHOPAGCTT3’在細(xì)胞的增殖構(gòu)成中，其中必然有一種會被逐漸地排斥（稀釋）掉。2.2)氯霉素抗性基因 （ β— 半乳糖苷酶基因有 1021P 質(zhì)粒型載體 — 環(huán)狀 dsDNA分子，自主復(fù)制 （ 2） .個用于轉(zhuǎn)化體選擇，另一個用于重組子檢測。pBR322和 pUC載體。基因的啟動子序列和終止子序列；表達(dá)載體的類型也就確定了。外源 DNABamHI片段重組分子 IApr轉(zhuǎn)化子 分別轉(zhuǎn)化 (ApS （ 2）、含易于檢測是否有外源 DNA插入的標(biāo)記基因 LacZα ，可利用 ?互補(bǔ)原理進(jìn)行藍(lán)白篩選。 載體容量 M13mp載體 4 kb 細(xì)菌質(zhì)粒載體 10kb λ 載體 23kb cos質(zhì)粒載體 48kb P1載體 95 kb pYAC載體 ∽1000 kb5.20231他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。下午 8:4320231意志堅強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。下午 8:4311,下午 8:43ac,purus.POWERPOINTLorem 11 三月 21三月 21Thursday,三月 三月 21三月 21Thursday,三月 三月 21三月 21Thursday,每一種限制性內(nèi)切酶會產(chǎn)生不同的粘性末端，可選用兩種內(nèi)切酶組合在質(zhì)粒載體和外源 DNA上產(chǎn)生相同的末端，進(jìn)行雙粘端連接，既提高克隆的效率，又可以定向克隆。Tcr轉(zhuǎn)化子影印到 Tc平板上 重組分子 Ⅱ 四、常用質(zhì)粒載體舉例 pBR322載體 pUC載體 pBR322載體優(yōu)點：分子量較小，為 4363bp，不僅利于自身 DNA的純化，可容納的外源 DNA也較大。表達(dá)外源基因以產(chǎn)生大量外源基因產(chǎn)物轉(zhuǎn)錄起始區(qū) 終止子vector）LacZαa.該蛋白質(zhì)可分為兩部分： α鏈和 β鏈。 Cmr） Ampr Tetr第二階段： 增大載體容量（降低載體長度），建立多克隆位點區(qū)和新的遺傳標(biāo)記基因。二、質(zhì)粒 DNA的分離與純化（放在實驗中講）三、質(zhì)粒載體的構(gòu)建及類型（一）質(zhì)粒載體的發(fā)展概況；（二）質(zhì)粒載體的特點（基本條件）；（三）遺傳標(biāo)記基因（四）質(zhì)粒載體的類型（一）發(fā)展概況T引物 5’DNA擴(kuò)增技術(shù)又稱為 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ，它包括以下三個步驟：DNA聚合酶1.制備 RNA樣品時除去 DNA分子2+存在時，兩條鏈上的切口獨(dú)立無關(guān)， Mn2+存在時，兩條鏈上的切口幾乎在同一位置