儀器分析教程--高效液相色譜法(ppt63)-品質管理(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 的緩沖溶液等 。 它多用于分離多環芳烴等低極性化合物；若采用含一定比例的甲醇或乙睛的水溶液為流動相 ， 也可用于分離極性化合物；若采用水和無機鹽的緩沖液為流動相 ， 則可分離一些易離解的樣品 ， 如有機酸 、有機堿 、 酚類等 。 反相鍵合相色譜法具有柱效高 ， 能獲得無拖尾色譜峰的優點 。 關于反相鍵合相色譜的分離機理 ， 可用所謂疏溶劑作用理論來解釋 。 這種理論把非極性的烷基鍵合相看作一層鍵合在硅膠表面上的十八烷基的 “ 分子毛 ” ， 這種 “ 分子毛 ” 有較強的流水特性 。 當用極性溶劑為流動相來分離含有極性官能團的有機化合物時 ， 一方面 ， 分子中的非極性部分與固定相表面上的疏水烷基產生締合作用 ， 使它保留在固定相中；而另一方面 ，被分離物的極性部分受到極性流動相的作用 ， 促使它離開固定相 ， 并減小其保留作用 （ 見圖 204） 。 顯然 ， 兩種作用力之差 ，決定了分子在色譜中的保留行為 。 來自 中國最大的資料庫下載 來自 中國最大的資料庫下載 此法是以極性的有機基團 ， CN、 NH2雙羥基等鍵合在硅膠表面 ， 作為固定相；而以非極性或極性小的溶劑 （ 如烴類 ） 中加入適量的極性溶劑 （ 如氯仿 、 醇 、 乙臘等 ） 為流動相 ， 分離極性化合物 。 此時 ，組分的分配比 k值隨其極性的增加而增大 ，但隨流動相極性的增加而降低 。 這種色譜方法主要用于分離異構體 、極性不同的化合物 ， 特別適用于分離不同類型的化合物 。 來自 中國最大的資料庫下載 當以薄殼型或全多孔微粒型硅膠為基質 ， 化學鍵合各種離子交換基團 ， 如一 SO3H 一 CH2NH － C00H、 一CH2N（ CH3） 等時 ， 就形成了離子性鍵合相色譜的固定相；流動相一般采用緩沖溶液 。 其 分離原理與離子交換色譜類同 。 以上討論了各種類型化學鍵合相色譜法，歸納鍵合相色譜的最大優點是：通過改變流動相的組成和種類，可有效地分離各種類型化合物（非極性、極性和離子型）。此外，由于鍵合到載體上的基團不易流失，特別適用于梯度淋洗。據統計，在高效液相色譜法中，約有 8O％的分離問題是用鍵合相色譜法解決。 此法的最大缺點是不能用于酸、堿度過大或存在氧化劑的緩沖溶液作流動相的體系 。如何根據樣品極性種類來選擇化學鍵合的固定相，請參看表 203。 來自 中國最大的資料庫下載 來自 中國最大的資料庫下載 （三）液一固吸附色譜法 (LSAC) 液一固吸附色譜是以固體吸附劑作為固定相，吸附劑通常是些多孔的固體顆粒物質，在它們的表面存在吸附中心。 液固色譜實質是根據物質在固定相上的吸附作用不同來進行分離的。 1． 分離原理 當流動相通過固定相 （ 吸附劑 ） 時 ， 吸附劑表面的活性中心就要吸附流動相分子 。 同時 ， 當試樣分子 （ X） 被流動相帶入柱內 ， 只要它們在固定相有一定程度的保留就要取代數目相當的已被吸附的流動相溶劑分用 ） 于是 ， 在固定相表面發生競爭吸附 : X + nSad = Xad + nS 來自 中國最大的資料庫下載 達平衡時 ,有 nadnadad SXSXK]][[]][[?其中 Kad為吸附平衡常數 ，值大表示組分在吸附劑上保留強，難于洗脫。 Kad值小 ,則保留值弱，易于洗脫。試樣中各組分據此得以分離。 Kad值可通過吸附等溫線數據求出。 來自 中國最大的資料庫下載 2．固定相 吸附色譜所用固定相多是一些吸附活性強弱不等的吸附劑 ， 如硅膠 、 氧化鋁 、 聚酸膠等 。 由于硅膠的優點較多 ， 如線性容量較高 ， 機械性能好 ， 不溶脹 ， 與大多數試樣不發生化學反應等 ， 因此 ， 以硅膠用得最多 。 在高效液相色譜法中 ， 表面多孔型和全多孔型都可作吸附色譜中的固定相 ， 它們具有填料均勻 、 粒度小 。 孔穴淺的優點 ， 能極大地提高柱效 。 但表面多孔型由于試樣容量較小 ， 目前最廣泛使用的還是 全多孔型微粒填料 。 來自 中國最大的資料庫下載 3流動相 一般把吸附色譜中 流動相稱 作 洗脫劑。在吸附色譜中對極性大的試樣往往采用極性強的洗脫劑；對極性弱的試樣宜用極性弱的洗脫劑。洗脫劑的極性強弱可用溶劑強度參數（ ε0）來衡量。 ε0越大，表示洗脫劑的極性越強。表 204列出一些常用溶劑在氧化鋁吸附劑中的 ε0值。在硅膠吸附劑中 ε0值的順序相同，數值可換算（ ε0硅膠=077 ε0氧化鋁）。 來自 中國最大的資料庫下載 來自 中國最大的資料庫下載 (四）離子交換色譜法（ IEC） 此法是利用 離子交換原理和液相色譜技術的結合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法 。凡在溶液中能夠電離的物質，通常都可用離子交換色譜法進行分離。它不僅適用無機離子混合物的分離，亦可用于有機物的分離，例如氨基酸、核酸、蛋白質等生物大分子。因此，應用范圍較廣。 來自 中國最大的資料庫下載 1． 離子交換原理 離子交換色譜法是利用不同待測離子對固定相親和力的差別來實現分離的 。 其固定相采用離子交換樹脂 ， 樹脂上分布有固定的帶電荷基團和可游離的平衡離子 。 當待分析物質電離后產生的離子可與樹脂上可游離的平衡離子進行可逆交換 ， 其交換反應通式如下： 陽離子交換： R S O 3 H + + M + R S O 3 M + + H +陰離子交換： R N R 3 + C l + X R N R 3 + X + C l 一般形式： R一 A＋ B ＝ R－ B＋ A 來自 中國最大的資料庫下載 達平衡時，以濃度表示的平衡常數（離子交換反應的選擇系數）： 式中 [A]r， [B]r 分別代表樹脂相中洗脫劑離子（ A）和試樣離子（ B）的濃度， [A]、 [B]則代表它們在溶液中的濃度。離子交換反應的選擇性系數見從表示試樣離子 B對于 A型樹脂親和力的大小： KB/A越大，說明 B離子交換能力越大，越易保留而難于洗脫。一般說來， B離子電荷越大，水合離子半徑越小， KB/A值就越大。 rrAB ABABK]][[][][/ ?來自 中國最大的資料庫下載 對于典型的磺酸型陽離子交換樹脂 ， 一價離子的 KB/A值按以下順序： Cs+＞ Rb+＞ K+＞ NH4+＞ Na+＞ H+＞ Li+ 二價離子的順序為： Ba2+＞ Pb2+＞ Sr2+＞ Ca2+＞ Cd2+＞ Cu2+， Zn2+＞ Mg2+ 對于季鋁型強堿陰離子交換樹指 ， 各陰離子的選擇性順序為： ClO4＞ I＞ HS04＞ SCN＞ NO2＞ Br＞ CN＞ Cl＞ BrO3＞ OH ＞ HCO3＞ H2P04＞ IO3＞ CH3COO－ ＞ F－ 2．固定相 作為固定相的離子交換劑，其基質大致有三大類：合成樹脂（聚苯乙烯）、纖維素和硅膠。而離子交換劑又有陽離子和陰離子之分。再根據官能基的離解度大小還有強弱之分（見表 205） 來自 中國最大的資料庫下載 來自 中國最大的資料庫下載 常用的離子交換劑固定相大致可分