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酵母雜交技術原理及應用(編輯修改稿)

2026-06-15 20:49 本頁面

　

【文章內容簡介】測的結果可以是基因表達產物的積累效應，因而可檢測存在于蛋白質之間的微弱的或暫時的相互作用。 ⑷ 酵母雙雜交系統可采用不同組織、器官、細胞類型和分化時期材料構建 cDNA文庫，能分析細胞漿、細胞核及膜結合蛋白等多種不同亞細胞部位及功能的蛋白。例如已報道成功分析了 RAP1與 RIF1ii、 P21cip1與CDK2iii、 p16與 CDK4iv等之間的相互作用。酵母雙雜交系統的應用利用酵母雙雜交發現新的蛋白質和蛋白質的新功能當我們將已知基因作為誘餌，在選定的 cDNA文庫中篩選與誘餌蛋白相互作用的蛋白，從篩選到的陽性酵母菌株中可以分離得到 ADLIBRARY載體，并從載體中進一步克隆得到隨機插入的 cDNA片段，并對該片段的編碼序列在GENEBANK中進行比較，研究與已知基因在生物學功能上的聯系。另外，也可作為研究已知基因的新功能或多個篩選到的已知基因之間功能相關的主要方法。酵母雙雜交系統的應用利用酵母雙雜交在細胞體內研究抗原和抗體的相互作用利用酶聯免疫（ ELISA）、免疫共沉淀（ COIP）技術都是利用抗原和抗體間的免疫反應，可以研究抗原和抗體之間的相互作用，但是，它們都是基于體外非細胞的環境中研究蛋白質與蛋白質的相互作用。而在細胞體內的抗原和抗體的聚積反應則可以通過酵母雙雜交進行檢測。利用酵母雙雜交篩選藥物的作用位點以及藥物對蛋白質之間相互作用的影響酵母雙雜交的報告基因能否表達在于誘餌蛋白與靶蛋白之間的相互作用。對于能夠引發疾病反應的蛋白互作可以采取藥物干擾的方法，阻止它們的相互作用以達到治療疾病的目的。例如： Dengue病毒能引起黃熱病、肝炎等疾病，研究發現它的病毒 RNA復制與依賴于 RNA的 RNA聚合酶（ NS5）與拓撲異構酶 NS3，以及細胞核轉運受體 BETAimportin的相互作用有關。研究人員通過酵母雙雜交技術找到了這些蛋白之間相互作用的氨基酸序列。如果能找到相應的基因藥物阻斷這些蛋白之間的相互作用，就可以阻止 RNA病毒的復制，從而達到治療這種疾病的目的。酵母雙雜交系統的應用利用酵母雙雜交建立基因組蛋白連鎖圖眾多的蛋白質之間在許多重要的生命活動中都是彼此協調和控制的。基因組中的編碼蛋白質的基因之間存在著功能上的聯系。通過基因組的測序和序列分析發現了很多新的基因和 EST序列， HUA等人利用酵母雙雜交技術，將所有已知基因和 EST序列為誘餌，在表達文庫中篩選與誘餌相互作用的蛋白，從而找到基因之間的聯系，建立基因組蛋白連鎖圖。對于認識一些重要的生命活動：如信號傳導、代謝途徑等有重要意義酵母雙雜交系統的應用酵母雙雜交系統局限性和存在的問題酵母雙雜交系統是分析蛋白蛋白間相互作用的有效和快速的方法，有多方面的應用，但仍存在一些局限性。 ⑴ 雙雜交系統分析蛋白間的相互作用定位于細胞核內，而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工如糖基化、二硫鍵形成等，這些反應在核內無法進行。另外有些蛋白的正確折疊和功能有賴于其他非酵母蛋白的輔助，這限制了某些細胞外蛋白和細胞膜受體蛋白等的研究。 ⑵ 酵母雙雜交系統的一個重要的問題是假陽性。由于某些蛋白本身具有激活轉錄功能或在酵母中表達時發揮轉錄激活作用，使 DNA結合結構域雜交蛋白在無特異激活結構域的情況下可激活轉錄。另外某些蛋白表面含有對多種蛋白質的低親和力區域，能與其他蛋白形成穩定的復合物，從而引起報告基因的表達，產生假陽性結果。在酵母雙雜交的基礎上，又發展出了酵母單雜交、酵母三雜交和酵母的反向雜交技術。它們被分別用于核酸和文庫蛋白之間的研究、三種不同蛋白之間的互作研究和兩種蛋白相互作用的結構和位點。酵母單雜交技術最早是從酵母雙雜交技術發展而來，酵母雙雜交技術通過對報告基因的表型進行檢測以實現對蛋白質間相互作用的研究，而酵母單雜交技術則通過對報告基因的表型檢測，分析 DNA、蛋白

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