正文內容

[自然科學]免疫學試驗技術(編輯修改稿)

2026-03-19 05:20 本頁面

　

【文章內容簡介】常組織切片或觸片應無熒光； ? （ 2）將待檢材料先用未標記的抗血清處理，再用熒光抗體染色應不出現熒光。 ? 間接法 ? 制片：同直接法 ? 染色：染色時，標本先滴加抗血清，在37℃ 處理 30～ 60min； ? 用 PBS充分洗滌后，再用熒光標記的抗抗體染色， 37℃ 30～ 60min，洗滌，封固。 ? 鏡檢： ? 抗抗體必須與抗血清是相應的，如該抗血清是豬源的，則用兔抗豬熒光抗體。 ? 對照： ? 需用正常血清處理作為對照，此對照片應無熒光。肝臟胸腺肺臟法氏囊腸道脾臟食道 ●熒光抗體技術酶標抗體 ? 酶標抗體是指與底物結合后能顯色的酶與抗體連接后所制備的結合物。 ? １、原理：能與被檢抗原形成酶標記的免疫復合物，免疫復合物上的酶在遇到相應的底物時，催化無色的底物，生成可溶性或不溶性的有色產物。根據有色產物的有無及濃度，可對抗原及抗體做定性、定位和定量測定。 ? ２、酶標抗體的制備 ? 用于標記的抗體要求高純高、高效價、與抗原的結合力強，以提取的 IgG最為理想。 ? （１）免疫球蛋白 IgG的提取： ? （２）酶標抗體的標記：辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、 β 半乳糖苷酶和葡萄糖氧化酶。辣根過氧化物酶（ HRP）常用的底物：鄰苯二胺（ OPD）：反應顯橙黃色，應避光，致癌性四甲基聯苯胺（ TMB）：反應后呈藍色，無需避光，無致癌性，但水溶性差。標記的方法以雙功能交聯劑為 “ 橋 ” ，分別與酶和抗體（抗原）連接形成結合物。如戊二醛交聯法。用過碘酸鈉活化酶蛋白分子后，再與抗體（抗原）結合。僅適用于含糖蛋白分子的酶（如 HRP）標記物制備。 NaIO４法標記步驟 : (1) 稱取 5mgHRP溶解于 1ml蒸餾水中。 (2) 于上液中加入 NaIO４溶液，室溫下避光攪拌 20分鐘。 (3) 將上述溶液裝入透析袋中，對 1mM 液透析， 4℃ 過夜。 (4) 加 20μl 碳酸鹽緩沖液，使以上醛化的 RP的 PH升高到～，然后立即加入 10mg IgG(抗體 )在 1ml ，室溫避光輕輕攪拌 2小時。 (5) 加 4mg／ ml NaBH４液，混勻，再置 4℃2 小時。 (6) 將上述液裝入透析袋中，對 PBS透析，4℃ 過夜。（ 7）應用鹽析、透析法、凝膠過濾法除去未結合的 HRP。 ? 免疫組化法：應用酶標抗體對生物組織中的抗原進行鑒定和定位，稱為免疫組化法。 ? 酶聯免疫吸附測定 (enzyme linked immunosorbent assay)簡稱 ELISA：用于可溶性抗原或抗體的定量，是一種既特異又敏感的方法。酶標抗體的應用 —— 免疫酶技術 ? 其基本過程是將抗原或抗體吸附于固相載體，在載體上進行免疫酶試驗，底物顯色后，用肉眼或分光光度計判定結果，其過程如下。酶聯免疫吸附測定 (ELISA) ? 包被抗原（抗體）洗滌 ? 底物顯色洗滌抗體（抗原）間接 ELISA：檢測抗體已知 Ag 包被加入待檢 Ab1 AgAb1 加入 Ab2E AgAb1Ab2E 底物，顯色 AgAb1 AgAb1Ab2E 已知 Ag 底物，顯色 ? 夾心法：先用抗體 (IgG)被覆，加待檢抗原，作用洗滌后，加酶標記抗體。 ? 競爭法：用抗體被覆，加一定量的標記抗原和待檢抗原混合物，二者競爭與板上的抗體結合，顯色后與加標記抗原的對照組比較，試驗孔顏色顯著低于對照孔者為陽性孔，待檢抗原含量越高，顏色越淺，此法適于小分子抗原或半抗原的檢測。二抗？ ? 抗抗體：抗異種動物的抗體，如兔抗豬二抗、兔抗雞二抗。 ? 用途 : 酶標二抗熒光標記二抗 ? 兔抗豬高免血清的制備免疫原：豬血清豬 IgG 制備程序：采取豬血、分離血清提取IgG 取豬 Ig

點擊復制文檔內容

教學課件相關推薦

[自然科學]免疫學試驗技術(編輯修改稿)

[自然科學]流變學基礎及應用-資料下載頁

自然科學-復習-資料下載頁

[自然科學]擺錘式沖擊試驗機的檢定-資料下載頁

自然科學]in-fusion克隆技術介紹-資料下載頁

[自然科學]彎曲應力-資料下載頁

[自然科學]氣象小知識-資料下載頁

[自然科學]7糖代謝-資料下載頁

[自然科學]固熔體-資料下載頁

自然科學類文章閱讀-資料下載頁

[自然科學]單晶結構解析-資料下載頁

[自然科學]歲差章動極移-資料下載頁

初中自然科學中考復習-資料下載頁

高一歷史自然科學-資料下載頁

[自然科學]微機原理教程-資料下載頁

[自然科學]montecarlo-資料下載頁

[自然科學]免疫學試驗技術(存儲版)

[自然科學]免疫學試驗技術-文庫吧在線文庫

[自然科學]免疫學試驗技術(完整版)

[自然科學]免疫學試驗技術(更新版)

[自然科學]免疫學試驗技術(專業版)