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細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)ppt課件(編輯修改稿)

2026-03-20 15:45 本頁面

　

【文章內(nèi)容簡介】重點(diǎn)）貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)過程 ? 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：細(xì)胞培養(yǎng)用的器材滅菌、超凈工作臺(tái)準(zhǔn)備、實(shí)際預(yù)溫、操作人員準(zhǔn)備。 ? 倒去瓶中的舊培養(yǎng)液，加入 2～ 3ml的 DHanks液，輕輕振蕩漂洗細(xì)胞，以除去懸浮在細(xì)胞表面的碎片。 ? 加入 2滴管％胰蛋白酶消化液，消化 2～3min，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞單層收縮突起出現(xiàn)空隙時(shí)，倒去酶液。剛加入合適過頭 ? 加入 1～ 2滴管含有血清的培養(yǎng)液，反復(fù) 吹打細(xì)胞，使其成細(xì)胞懸液。 ? 以 1： 2或 1： 3進(jìn)行分裝，補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)瓶上做好標(biāo)記，注明代號(hào)、日期，輕輕搖勻， 37 ℃ CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 ? 觀察：細(xì)胞培養(yǎng) 24h后，即可觀察培養(yǎng)液的顏色及細(xì)胞的生長情況。注意事項(xiàng) ? 1．傳代培養(yǎng)時(shí)要注意無菌操作并防止細(xì)胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次最好只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每一種細(xì)胞使用一套器材。培養(yǎng)用液應(yīng)嚴(yán)格分開。 ? 2．傳代時(shí)間的掌握：每天觀察細(xì)胞形態(tài)，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn)：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時(shí)即可傳代。 ? 消化時(shí)間的掌握哺乳動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存 ? 冷凍保存要點(diǎn) ?凍存細(xì)胞必須處在對(duì)數(shù)生長期，活力大于 90％，無微生物污染。細(xì)胞濃度控制在： 1 107－5 107/ml。 ?冷凍過程要緩慢。 4℃ 30 － 60 分鐘 → 20℃ 30 分鐘 → 80℃ 16 － 18 小時(shí)（或過夜） →液氮長期保存 ? 常用細(xì)胞冷凍保存液 ?10％ DMSO ＋完全細(xì)胞生長培養(yǎng)液（ 20％血清＋基礎(chǔ)培養(yǎng)液） ?10％甘油＋完全細(xì)胞生長培養(yǎng)液（ 20％血清＋基礎(chǔ)培養(yǎng)液）冷凍保存細(xì)胞的解凍與復(fù)蘇要點(diǎn) ? 快速解凍 ? 凍存細(xì)胞從液氮中取出后，立即放入 37℃ 水浴中，輕輕搖動(dòng)冷凍管，使其在 1 分鐘內(nèi)全部融化（不要超過 3 分鐘） ? 解凍后的細(xì)胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)， 24小時(shí)后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO ? 如果細(xì)胞對(duì)冷凍保護(hù)劑特別敏感 ? 解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑，然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培

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