生物炭對施用有機肥土壤重要酶活性的影響本科畢業論文(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 性質不會發生較大變化，但不宜長期儲存。實驗全過程要采用蒸餾水每次實驗試劑為現配現用 生物炭對土壤脲酶活性影響測定 實驗設置實驗使用一種土壤（磚紅壤），設置三個實驗組（低生物炭組：培養一定量的土壤，含有一定量的有機肥和少量的生物炭；中生物炭組：培養等量的土壤，含有等量的有機肥和中量（2%)的生物炭；高生物炭組：培養等量的土壤，含有等量的有機肥和高量（5%)的生物炭），一個純土壤組（添加等量土壤但不添加任何有機肥和生物炭），一個無生物炭組（添加等量土壤和有機肥但不添加任何生物炭），每組實驗重復3次，共35n個樣。實驗共采集生物炭樣本1種，所以本實驗共351=15個樣。實驗需要重復3次。 土壤預培養實驗將所需土壤的含水量調整到約田間持水量的60%（一般加水量為土壤量的15%到20%之間，以不粘結但很濕潤為準），將土壤容器用塑料薄膜封蓋以免水分過快損失，將塑料薄膜用針扎一些小孔，以保持氣體流通，保證土壤重要酶的活性。每隔3天，補水一次。按照各要求處理，將一定量土壤、所需有機肥及生物炭混勻，做好補水（即補充所加入的干燥有機肥和生物炭所需的水量），放入培養瓶中進行培養。在培養開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測定土壤脲酶活性。 溶液配制10%尿素：準確稱量10g尿素溶解并定容為100ml1mol/L氫氧化鈉：準確稱取4g氫氧化鈉溶解并定容為100ml檸檬酸鈉緩沖液：；；將兩溶液混勻，用1mol/，定容為200ml。 處理設置及檢測在實驗開始前，測定預培養土壤的過氧化氫酶活性，代表土壤酶活性的初始值。在培養開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測定土壤過氧化氫酶活性。純土壤組處理：培養一定量的純土壤，不加任何有機肥和生物炭。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養。無生物炭組處理：培養等量的土壤，含有2%的有機肥培養，不加生物炭。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養。低生物炭組處理：培養等量的土壤，含有2%%的生物炭。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養。中生物炭組處理：培養等量的土壤，含有2%的有機肥和2%的生物炭。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養。高生物炭組處理：培養等量的土壤，含有2%的有機肥和5%的生物炭。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。將三角瓶密封，置于38℃恒溫下培養。上述處理在38℃恒溫下培養5h后，做如下處理：培養結束后，向溶液中加入20ml 2mol/L KCl，振蕩10min，過濾。用NH3N標準溶液做標準曲線，取濾液加入顯色劑待其顯色后，測定各處理NH3N生成量脲酶活性采用單位時間（h），單位質量土壤（1g）所催化生成的NH3N的量（mg）表示，即mg/（gh） 注意事項用甲苯處理時要保證土樣都有被覆蓋，以免存活脲酶對實驗造成影響。實驗過程中，密封培養時，為保證反應正常進行，需將塑料薄膜用針扎一些小孔，以保持氣體流通。 生物炭對土壤蔗糖酶活性影響測定 實驗設置實驗使用一種土壤（磚紅壤），設置三個實驗組（低生物炭組：培養一定量的土壤，含有一定量的有機肥和少量的生物炭；中生物炭組：培養等量的土壤，含有等量的有機肥和中量（2%)的生物炭；高生物炭組：培養等量的土壤，含有等量的有機肥和高量（5%)的生物炭），一個純土壤組（添加等量土壤但不添加任何有機肥和生物炭），一個無生物炭組（添加等量土壤和有機肥但不添加任何生物炭），每組實驗重復3次，共35n？個樣。實驗共采集生物炭樣本1種，所以本實驗共351=15？個樣。實驗需要重復3次。 土壤預培養實驗將所需土壤的含水量調整到約田間持水量的60%（一般加水量為土壤量的15%到20%之間，以不粘結但很濕潤為準），將土壤容器用塑料薄膜封蓋以免水分過快損失，將塑料薄膜用針扎一些小孔，以保持氣體流通，保證土壤重要酶的活性。每隔3天，補水一次。按照各要求處理，將一定量土壤、所需有機肥及生物炭混勻，做好補水（即補充所加入的干燥有機肥和生物炭所需的水量），放入培養瓶中進行培養。在培養開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測定土壤蔗糖酶活性。 溶液配制： Na2HPO4?2H2O溶于100ml蒸餾水中得到1/15M磷酸氫二鈉溶液， KH2PO4溶于100ml蒸餾水中得到1/15M磷酸二氫鉀溶液。取5ml1/15M磷酸氫二鈉溶液和95ml1/15M磷酸二氫鉀溶液均勻混合，即得100ml 。8%蔗糖溶液：準確稱取8g蔗糖溶于蒸餾水中，定溶到100ml。 處理設置及檢測在實驗開始前，測定預培養土壤的過氧化氫酶活性，代表土壤酶活性的初始值。在培養開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測定土壤過氧化氫酶活性。純土壤組處理：培養一定量的純土壤，不加任何有機肥和生物炭。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養。無生物炭組處理：培養等量的土壤，含有2%的有機肥培養，不加生物炭。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養。低生物炭組處理：培養等量的土壤，含有2%%的生物炭。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養。中生物炭組處理：培養等量的土壤，含有2%的有機肥和2%的生物炭。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養。高生物炭組處理：培養等量的土壤，含有2%的有機肥和5%的生物炭。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養。上述處理在37℃恒溫下培養24h后，做如下處理：培養結束后，取出并迅速過濾。用葡萄糖標準溶液做標準曲線，取濾液加入顯色劑加熱，待其顯色后，用蒸餾水稀釋，并在分光光度計上于波長508nm處進行比色。蔗糖酶活性以單位時間（1h）、單位土壤（1g）生成的葡萄糖的質量（mg）表示，即mg/(gh)。 檢測方法 溶液中H2O2含量的測定方法定量滴定酶促反應后剩余的過氧化氫量 適用范圍定量滴定酶促反應后剩余的過氧化氫量 實驗原理過氧化氫酶，又稱接觸酶，能酶促過氧化氫對各種化合物的氧化。幾乎在所有生物體內都有過氧化氫酶，在某些細菌里，其數量約為細胞干重的1%。土壤的過氧化氫酶活性，與土壤呼吸強度和土壤微生物活性相關，在一定程度上反應了土壤微生物學過程的強度。 試劑配制：。：。 操作步驟標準含量測定：取對照組濾液20ml。H2O2的提取：稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。破碎大顆粒后，密封處理，室溫下振蕩培養。培養結束后，立即向各三角瓶中注入5ml mol/L的硫酸終止反應，過濾。計算所得各處理過氧化氫酶活性。 溶液中尿素含量的測定方法實驗用銨氮生成法測定溶液中尿素含量 適用范圍？ 實驗原理脲酶是一種酰胺酶，能酶促有機質分子中肽鍵的水解。土壤的脲酶活性與土壤的微生物數量、有機質含量、全氮和速效氮含量呈正相關。脲酶是一種高度專性的酶，能酶促尿素的水解，生成二氧化碳和氨。通常可以通過測定生成的氨的數目以表示土壤脲酶的活性。 試劑配制苯酚鈉溶液：，；。將兩溶液均勻混合并用蒸餾水定容為100ml。該溶液需要現用現配。次氯酸鈉