食品科學與工程專業論文(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 蜜環菌多糖 （ Polysaccharide from the Rhizomorph of Armillaria mellea, AMP) 的組成及結構和一些降血糖多糖的有效成分有相似之處 ， 蜜環菌菌索可在較短時間內大量獲得 ， 多糖含量高 。 于敏 [16]等根據其純化時所用的洗脫液的不同 ， 得到了 2 種組分 AMP1和 AMP2。 證實 AMP1 能使正常小鼠的糖耐量增強 ， 能顯著降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖 ； AMP2 能使正常小鼠在腹腔注射葡萄糖后升高的血糖快速降至正常 ， 顯著降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖 ， 作用持久溫和 。 為了探討蜜環菌菌索多糖降血糖的作用機理 ， 陶文娟 [17]等選用了 α葡萄糖苷酶抑制劑分子模型 。 從酶活 性抑制試驗可看出 ， 蜜環菌菌索多糖具有抑制活性 ， 并且隨著水解濃度的加大抑制率增加 。 蜜環菌多糖的免疫增強作用 [1819] 蜜環菌菌索多糖能加快正常小鼠生長 ， 在正常范圍內增加正常小鼠外周血白細胞數 ， 對免疫抑制劑環磷酰胺 (CY)所致的生長緩慢甚至體重減輕 、 CY 作用前期白細胞數下降和 CY 作用后期白細胞數過分升 高均有抵抗作用 ， 表明 AMP 可增強機體的免疫功能 。 一定劑量的蜜環菌菌索多糖能顯著地降低肝臟重量 ， 表明 AMP 對免疫器官有一定程度的影響 。 蜜環菌菌索多糖能顯著增強 T 細胞介導 DTH 反應 (遲發型變態 反應 )， 說明蜜環菌菌索多糖可增強小鼠的體液免疫反應及細胞免疫反應能力 。 蜜環菌菌索多糖能在體外顯著增強小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅的作用 ， 并可誘導巨噬細胞產生 NO 且呈現一定的濃度相關性 ， 在高濃度時 ， 對巨噬細胞分泌 IL1 有一定的促進分泌作用 。 蜜環菌菌索多糖能增強機體的特異性和非特異性免疫功能 。 可作為免疫增強劑 ， 由于免疫反應過程十分復雜 ， 目前還有許多環節尚未完全清楚 ， 有待進一步研究 。 蜜環菌多糖的保護作用 蜜環菌多糖對環磷酰胺所致小鼠骨髓細胞損傷有較好的保護作用 。 環磷酰胺是一種氮芥類的抗腫瘤藥物 。 在體外無活性 。 進入體內后在肝臟或血液中進行活化 ， 變成具有烷基化的代謝產物 。 而發揮抗腫瘤的作用 ， 它的副作用是嚴重損傷骨髓細胞造血功能 。研究結果顯示 ， 保護組小鼠骨髓有核細胞數增 多 ， 尤其是早幼粒 、 分葉核細胞增多 ， 說明蜜環菌多糖刺激骨髓細胞產生幼稚細胞增多 ， 分化成成熟細胞 ， 致使分葉核細胞增多 ，拮抗環磷酰胺對骨髓細胞的損傷 ， 保護骨髓造血系 統 ， 其作用結果呈劑量依賴性關系 。實驗表明 ， 一定濃度的蜜環菌多糖可以提高受試果蠅蛹的孵出率 ， 降低當代及 F2 代果蠅突變率 ， 同時染色體水平上的檢測也證實了此結論 ， 這說明蜜環菌多糖對于低能離 子束誘變有一定程度的防護作用 。 蜜環菌多糖抗眩暈癥作用研究 5 眩暈是臨床常見癥狀之一 。 前庭 、 視覺和本體感覺系統 (平衡三聯系統 )中的任一系統有病變或受到刺激都會出現眩暈 ， 眩暈癥可以由多種病因以及外界條件刺激而產生 ， 但由于病癥的特殊性 ， 難以客觀定義和測量 。 目前抗眩暈藥物的篩選主要采用行為實驗方法 ， 虞磊等采用了 2 種實驗方法綜合驗證蜜環菌多糖藥物對抗由機械旋轉所致眩暈癥的效果 。 小鼠眩暈模型在蜜環菌胞內多糖及鹽酸地芬尼多片給藥后均顯示出明確 、肯定的藥效作用 。 市場上銷售的蜜環菌片己被用于治療暈眩 ， 但對其作 用機理和臨床療效還有待進一步研究 。 蜜環菌多糖的其它作用 蜜環菌菌索多糖還具有其它藥理活性 。 在小鼠腹腔中注射蜜環菌發酵液可以延長小鼠的睡眠時間 。 小鼠尾靜脈注射試驗證明 ， 蜜環菌發酵液能保護戊四氮引起的驚厥 ， 能降低尼古丁引起的小鼠死亡數 ， 能增加狗的腦血流量與冠狀動脈血流量 ， 小鼠口服蜜環菌發酵液試驗證明無毒害作用 。 應用蜜環菌片還 可以治療高脂血癥 。 大量試驗都證明 ，蜜環菌菌絲和發酵液都具有鎮靜 、 抗驚厥 、 治療心腦血管疾病等功效 ， 并無毒副作用 。經常食用蜜環菌子實體 ， 可以預防視力失常 、 眼炎 、 夜盲 、 皮膚干燥 、 粘 膜失去分泌能力 ， 并可抵抗某些呼吸道和消化道感染的疾病蜜環菌多糖還具消炎和抗腫瘤的活性 。 前景展望 隨著對蜜環菌研究的深入 ， 其多糖的生理作用也逐漸被人們所了解 ， 特別是其抗衰老 、 調節免疫和抗腫瘤作用 ， 為以后蜜環菌的運用提供了理論基礎 。 因此 有必要對天麻共生蜜環菌及同屬真菌進行分類鑒定及系譜學分析 。 目前市場上銷售的蜜環菌商業種來源不明 ， 分類混亂 ， 對于天麻的人工栽培非常不利 。 雖然秦國夫等 [20]人從分子生物學的角度對中國的蜜環菌生物種做了較詳細的研究 ， 郭順星等人從應用的角度對與天麻共生的蜜環菌進行相關研究 ， 但是對與天麻共生的蜜環菌的分類及分子鑒定尚未見相關報道[21]。 蜜環菌是一種藥用真菌 ， 要工業化生產就首先要解決菌種確切來源及菌種鑒定的問題 ， 加強對蜜環菌深層發酵的研究與利用 ， 有望開發出一系列的保健產品 ， 如飲料 、 濃縮口服液 、 片劑 、 膠囊等 。 為了 進一步促進蜜環菌產業的發展 ， 提高產品開發水平 ， 需要做到以下幾點 ： (1) 蜜環菌生產一定要走規?；腿晟a化的道路 。 生產工藝上應該向液體菌種 、 固體栽培的方向發展 。 (2) 繼續開展蜜環菌有效成分檢測 、 分離和純化技術的研究 ， 為開發新的保健品和藥品奠定基礎 。 6 (3) 加強 細胞水平和分子水平上作用機制的研究 。 (4) 開展對蜜環菌有效成分的化學修飾研究 ， 以求大幅度提高其療效 。 (5) 蜜環菌的產品開發應由簡單的直接粗加工向提取 、 精制和深加工方向轉化 ， 擴大其藥用范圍 ， 提高其產品質量 。 2 引言 隨著現代生活節奏的加快 、 工作壓力的加大以及工業生產對環境的破壞 ， 人類免疫系統功能降低 ， 各種疾病的發病率呈上升趨勢 。 真菌多糖 ， 在國際上被稱為生物反應調節劑 (BiologicalResponseModifier， BRM)， 是目前公認的具有較高效應的免疫增強劑 [22]。 而且與大多數 藥品不同的是 ， 由真菌多糖制成的藥物 ， 人類即使高劑量攝入 ， 毒副作用也很小 ， 是一類重要的保健食品 ， 是當今醫藥和食品工業共同關注的焦點 。 蜜環菌多糖就是一種著名的真菌多糖 ， 具有較高的研究價值 。 近年來 ， 國內外學者分離得到了蜜環菌多糖 、 倍半菇類化合物和嚓吟類化合物等多種活性成分 ， 對其各方面進行了研究 。其中蜜環菌多糖是衡量蜜環菌保健功能的一個主要指標 。 應用現代發酵技術生產蜜環菌規模大 ， 周期短 ， 不受季節和環境限制 ， 而且發酵實驗研究發現液體發酵蜜環菌不僅能在短期內獲得大量菌體 ， 其菌體多糖的得率和糖含量也遠遠高于人工栽培菌索 [23]， 可以大幅度降低其作為保健品和藥物開發的成本 。 本 實驗 對蜜環菌培養的條件進行了研究 ，得出蜜環菌多糖產率最高的最佳條件 ， 使后續的實驗有了可靠的依據，為深入 研究蜜環菌菌絲體多糖奠定了基礎 ， 也為開發蜜環菌保健食品 提供了理論依據。 3 材料與方法 實驗材料 菌種 ： 蜜環菌 購自 華中農業大學食用菌研究所 (M M M M A9)。 菌種保存斜面培養基 ： PDA 斜面 。 多糖生產培養基 : 碳源 2%、 氮源 1%、 鮮土豆打漿 15%、 KH2PO4 %、 MgSO4 %、 VB1 %。 主要 試劑 試劑名稱 規格 生產廠家 苯酚 分析純 重慶川東化工有限公司 濃硫酸 分析純 重慶川東化工有限公司 葡萄糖 分析純 重慶川東化工有限公司 蔗糖 分析純 成都市科龍華工有限公司 7 MgSO4 分析純 成都市科龍華工有限公司 KH2PO4 分析純 成都市科龍華工有限公司 無水乙醇 分析純 重慶川東化工有限公司 磷酸二氫鈉 分析純 成都市科龍華工有限公司 糊精 、 紅薯粉 、 蠶蛹粉 、 花生粉 、 豆餅粉 、 玉米 漿干粉 均購自 北碚 農貿市場 。 主要儀器 儀器名稱 型號 生產廠家 可見分光光度計 722P 上?，F科儀器有限公司 電子天 平 FA2020N 上海精密科學儀器有限公司 粉碎機 YF103 瑞安市永歷制藥有限公司 離心機 Centrifuge5810 德國 eppendorf公司 電熱恒溫箱 HHBII6005 型 上海躍進醫療器械廠 振蕩培養箱 BS4G 金壇市富華儀器有限公司 高壓滅菌鍋 SWCJ1F 型 日本 Tomy Digital Biology 公司 醫用型潔凈工作臺 SWCJ1F 中日合資蘇州安泰空氣技術有限公司 電子天平 CH8606 型 瑞士天平儀器有限公司 紫外分光光度 UV2450 型 日本島津公司 實驗方法 蜜環菌 的接種和 培養 用 250ml 的 三角瓶 ， 裝 量 培養基 100ml/瓶 ， 接種 3 塊 1cm2等量菌塊 ， 在 旋轉式搖床 中 ， 設置 轉速 150/min， 溫度 25℃ 培養 7 天 。 母種的保藏 利用低溫對微生物生命活力有抑制作用的原理 ， 采用電冰箱低溫條件保藏母種 ， 是常用且簡便的保藏方弦 。 其具體方法是 ： 將已長好的試管菌種管口用玻璃紙或牛皮紙包扎后移 入 46℃的冰箱持藏室內也可用橡皮塞代替棉塞封試管 口 ， 然后放置冰箱中 ， 每隔一定時間轉管移植一次 。 用此法保藏可維持 35 個 月 [24]。 蜜環菌菌索預處理 用純水將培養所得 蜜環菌菌索洗凈 ， 然后 冷凍干燥 ， 研磨成 成菌粉 備用 。 8 菌種的選取 在相同 蜜環菌培養 條件下 ， 分別同時培養 五種 蜜環菌 M M M M A9， 根據其分別的 菌絲干重和多糖得率 ， 選出 合成 胞內 多糖最多的 最佳 培養 菌種 。 最適培養天數的確定 培養最佳菌種 ， 從培養 3 天后開始 ， 每天測定菌絲的干重和多糖得率 ， 確定最適培養天數 。 具體操作為取 15 個 250ml 三角瓶 ， 做 15 個最佳菌種培養平行試驗 ， 從第四天開始每天取 3 個 平行組 進行測定 ， 一直到第八天 。 每天記錄其菌絲