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離心分離技術ppt課件(編輯修改稿)

2026-05-28 22:13 本頁面

　

【文章內容簡介】包含體產物分離工藝（牛生長激素分離提取）超濾器濾液透析器緩沖液凝膠過濾柱超濾器濾液水E D T A細胞壁溶解酶緩沖液攪拌混合罐水高壓勻漿器鹽酸胍上相攪拌混合罐緩沖液離心機下相發酵罐粗包含體攪拌混合罐空氣167。離心機在生物工業中的應用（ P67） 167。超離心法超離心法：根據物質的沉降系數、質量和形狀不同，應用強大的離心力，將混合物中各組分分離、濃縮、提純的方法。一、超離心技術的原理在某種介質中，使一種球形粒子從液體的彎月面沉降到離心管某部 (如底部 )所需的時間：當粒子直徑和密度不同 , 移動同樣距離所需的時間不同 , 在同樣的沉降時間 , 其沉降位置也不同 . 式中 t為沉降時間， μ為懸浮介質的粘度， d為粒子直徑， ρs為粒子密度， ρ為介質密度； r1為旋轉軸中心到液體彎月面的距離， r2為從旋轉軸中心到離心管底部的距離。利用它可以從組織勻漿中分離細胞器，其主要細胞成分的沉降順序，一般先是整細胞和細胞碎片，然后是核、葉綠體、線粒體、溶酶體、微粒體和核蛋白體。二、超離心技術的分類差速離心（一）制備性超離心（二）分析性超離心等密度離心一般密度梯度離心法密度梯度離心采用不同的離心速度和離心時間，使沉降速度不同的顆粒在不同的離心速度及不同離心時間下分批分離的方法。主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。（一）制備性超離心差速離心 (Differential centrifugation) 優點：操作簡單，離心后用傾倒法即可將上清夜與沉淀分開，并可使用容量較大的角式轉子。缺點： ①分離效果差； ②壁效應嚴重； ③顆粒被擠壓。密度梯度區帶離心法密度區帶離心法是樣品在一定惰性梯度介質中進行離心沉淀或沉降平衡，在一定離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區帶的分離方法。密度梯度系統：梯度介質有足夠大的溶解度，不與分離組分反應，不會引起分離組分的凝集、變性或失活。樣品鋪在密度梯度溶液表面，離心后形成若干條界面清楚的不連續區帶。優點： ①分離效果好，可一次獲得較純顆粒； ②適應范圍廣，既能分離具有沉淀系數差的顆粒，又能分離有一定浮力密度的顆粒； ③顆粒不會積壓變形，能保持顆粒活性，并防止已形成的區帶由于對流而引起混合。缺點： ①離心時間較長； ②需要制備梯度； ③操作嚴格，不宜掌握。（ 1）一般密度梯度離心法差速區帶離心法（動態法或沉降速度法）（ Diensity gradient centrifugation）根據分離的粒子在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內分成一系列區帶，達到彼此分離的目的。離心過程中區帶的位置、形狀隨離心時間而改變用于分離有一定沉降系數差的顆粒，與密度無關把樣品鋪放在一個連續的液體密度梯度上，然后進行離心，并控制離心分離的時間，使得粒子完全沉降之前，在液體梯度中移動而形成不連續分離區帶。該法僅用于分離有一定沉降系數差的粒子，與粒子密度無關。因此大小相同，密度不同的粒子 (如線粒體、溶酶體和過氧物酶體 )不能用此法分離。這種方法已用于 RNA— DNA混合物、核蛋白體亞單位和其他細胞成分的分離。（ 2）等密度離心（ Isopyic centrifugation）指當不同顆粒存在浮力密度差時，在離心力作用下，顆粒或向下沉降或向上浮起，一直沿梯度移動到與其密度恰好相等的位置上（即等密度點），形成區帶而分離的方法。處于等密度點的顆粒沒有重量，區帶的位置、形狀均不受離心時間的影響，體系處于動態平衡。差速區帶離心法和等密度離心法的區別差速區帶離心法等密度離心法原理依據粒子的沉降速率差異被分離依據粒子本身的密度差異被分離梯度范圍介質的密度小于樣品中各種粒子的密度介質的密度大于待分離樣品中各種粒子的密度時間效應長時間離心，所有待分離粒子都沉降在管底長時間離心，各粒子停留在等密度位置形成區帶等密度離心差速區帶離心（二）分析性超離心分析性超速離心主要是為了研究生物大分子的沉降特性和結

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