克東腐乳發酵生產中優勢菌株細胞融合方法初探畢業論文(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 % 培養基的配制 牛肉膏蛋白胨培養基（培養細菌用）牛肉膏 蛋白胨 1g氯化鈉 瓊脂 2g水 100mLpH ～121℃ 100 Pa 滅菌 30 min 豆粉培養基豆粉 3%氯化鈉 3%磷酸二氫鉀 %硫酸鎂 %硫酸銨 % 瓊脂 2%PH ～121℃ 100 Pa 滅菌 30 min . 液體培養基牛肉膏 蛋白胨 1g氯化鈉 水 100mLpH ～121℃ 100 Pa 滅菌 30 min 完全培養基（CM）蛋白胨 1g葡萄糖 1g酵母粉 牛肉膏 氯化鈉 蒸餾水 100mL瓊脂 2%121℃ 100 Pa 滅菌 30 min 再生固體培養基（CMR）蛋白胨 1g葡萄糖 酵母粉 牛肉膏 氯化鈉 蔗糖 氯化鎂 20mmol/L純化瓊脂 2gpH 瓊脂 2%121℃ 100 Pa 滅菌 30 min 再生半固體培養基蛋白胨 1g葡萄糖 酵母粉 牛肉膏 氯化鈉 蔗糖 氯化鎂 20mmol/L純化瓊脂 2gpH 瓊脂 %121℃ 100 Pa 滅菌 30 min 酪蛋白培養基（測蛋白酶活性）磷酸氫二鈉 磷酸二氫鉀 硫酸鋅 氯化鈣 酪素 酪素水解氨基酸 瓊脂 ～2g蒸餾水 100mLpH 121℃ 100 Pa 滅菌 30 min 　　方法 生長曲線測定取活化菌液 2mL 接于 50mL 液體培養基中，震蕩培養 24h，搖床轉速為 200r/min，培養溫度為 37℃，每隔 2h 取菌液用無菌水稀釋 10 倍，用 721 型分光光度計在 600nm波長處測得菌液 OD 值，以培養時間為橫坐標，OD 值為縱坐標，繪制菌體的生長曲線。 抗藥性標記 配制培養基配制牛肉膏蛋白胨培養基(培養細菌用)，將青霉素、鏈霉素、紅霉素、白霉素、卡那霉素、氯霉素、慶大霉素、利福平、螺旋霉素和土霉素 10 種抗生素分別按20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL 、120μg/mL 、140μg/mL、180μg/mL、220μg/mL 、240μg/mL、260μg/mL 的終濃度加入到牛肉膏蛋白胨培養基中； 滅菌將所配培養基與所需的平板在 121℃下滅菌 30 min； 倒平板當培養基的溫度達到不燙手（40～50℃）時，將培養基倒平板，等待平板逐漸冷卻凝固，待用； 接菌將 QSG 和 QSY 的菌懸液接入培養基中，涂布均勻； 培養將細菌平板放置 37℃的培養箱中培養 24～48h，平板要倒置培養。 檢測其抗藥性觀察在抗性平板上，QSG 和 QSY 是否可以生長。 原生質體制備條件優化 配制培養基配制完全培養基、再生固體培養基和再生半固體培養基； 滅菌將培養基、平板、離心管、涂棒、針管、移液管及所需緩沖液在 121℃下滅菌 30 min； 倒平板當培養基的溫度達到不燙手（40～50℃）時，將培養基倒平板，等待平板逐漸冷卻凝固，待用； 原生質體的形成及再生過程對數末期菌懸液10mL取 10mL，4000r/min，室溫，離心10min，棄上清沉淀沉淀菌懸液Ⅰ取 用生理鹽水稀釋到 107并將 105，10 6，10 7 涂布于完全平板上接菌量為 ，記為平板 A取 5mL 菌懸液Ⅰ溶菌酶用 5mLSMM 緩沖液溶解，加入無菌試管中，與 5mL 菌懸液Ⅰ混合水浴若干分鐘加 10mLSMM 緩沖液洗滌菌懸液 Ⅱ4000r/min，室溫，離心 10min，棄上清加 10mL SMM 緩沖液洗滌加 10mL SMM 緩沖液洗滌4000r/min，室溫，離心 10min，棄上清4000r/min，室溫，離心 10min，棄上清5mLSMM 緩沖液取 菌懸液Ⅱ，用無菌水稀釋到 104，并將 102，10 3，10 4 涂布于完全平板上，記作完全平板 B取 菌懸液Ⅱ，用 SMM 緩沖液稀釋到 105，并將 10，10，10 接于再生培養基中，雙層培養記作平板C（1）溶菌酶濃度的優化 相同條件下，溶菌酶終濃度分別為 1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL 時，計算原生質體的形成率和再生率；（2）酶解時間的優化相同條件下，酶解時間分別為 30min、60min、90min、120min 時，計算原生質體的形成率和再生率；（3）酶解溫度的優化相同條件下，酶解溫度分別為 34℃、37℃、40℃時，計算原生質體的形成率和再生率；（4）酶解 pH 的優化相同條件下，酶解 pH 值分別為 、 時，計算原生質體的形成率和再生率。 原生質體形成率與再生率的計算公式 %1010??????AB球 菌 數原 生 質 體 數原 生 質 體 數原 生 質 體 形 成 率 ??%10 10??? ???BAC形 成 率總 菌 數 形 成 率總 菌 數菌 數從 再 生 平 皿 上 算 得 的 總原 生 質 體 再 生 率第 3 章　結果與討論用處于不同時期的菌體來制備原生質體，非