無菌工藝驗證指導原則(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 全性好。針對具體的滅菌工藝和具體的產品，還應注意所用的生物指示劑的耐熱性應強于待滅菌產品中的污染菌。濕熱滅菌工藝常用的生物指示劑有以下幾種，嗜熱脂肪芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌，凝結芽孢桿菌，梭狀芽孢桿菌等。對于采用過度殺滅法的滅菌程序，生物指示劑系統主要是嗜熱脂肪芽孢桿菌的孢子。殘存概率法由于其熱輸入量比較低，因此在驗證中使用的生物指示劑的耐熱性可以小于嗜熱脂肪芽孢桿菌的孢子。實際驗證過程中可以直接采用市售的生物指示劑成品或將生物指示劑接種在待滅菌產品上。采用市售品時，只要供應商具有相應的質量體系認證資質，在測試中其提供的生物指示劑的D值就可以被接受。采用將生物指示劑接種到待滅菌產品的方法，由于生物指示劑在不同介質或環境中的耐熱性會有所不同，首先應考慮產品對生物指示劑耐熱性的影響。所以對于具體的品種而言，如果需要將生物指示劑接種至產品之中，應測定生物指示劑在該產品中的耐熱性，即D值。如果生物指示劑與產品不相容，可以用與產品相似的溶液來代替產品。生物指示劑的用量需要根據生物指示劑在待滅菌樣品中的耐熱性來確定，其用量應符合挑戰性試驗的要求。生物指示劑的用量可以采用陰性分數法或者殘存曲線法計算，可以根據實際情況（如污染菌的耐熱性，擬用的生物指示劑的D值等）選擇合適的計算方法，具體檢測方法見附件3。應結合產品特點和熱分布、熱穿透的實際結果來確定生物指示劑的放置位置。裝有生物指示劑的容器應緊挨于裝有測溫探頭的容器，在滅菌設備的冷點處必需放置生物指示劑。滅菌柜的其他部位應裝載產品或者類似物，以盡可能的模仿實際生產時的狀況。生物指示劑的驗證應該按照產品設定的滅菌工藝進行滅菌。可以根據生物指示劑的生長特性以及驗證時的包裝方式，采用適當的方法進行檢查和培養。將指示劑放入培養基中進行培養。需要注意不同的生物指示劑所需要的培養條件也各不相同，針對使用的生物指示劑確定培養條件，同時應放置陰性和陽性對照樣品。根據生物指示劑的D值和接種量推算產品在滅菌過程中實際達到的SAL值。驗證新的滅菌工藝時，每個產品的每個規格的每一滅菌程序，至少需要連續進行三次生物指示劑驗證試驗。如果試驗的重現性好，所有試驗的結果均提示SAL≤106，則驗證結果提示該滅菌工藝為驗證合格的滅菌工藝。如果各次驗證的結果不一致，需要分析原因，采取相應的改進措施后重新進行驗證工作。3制劑無菌生產工藝無菌藥品應首選采用終端滅菌工藝。如不能耐受終端滅菌工藝條件，應盡量優化處方工藝，以改善其耐熱性。如確實無法耐受終端滅菌工藝，則可采用無菌生產工藝。無菌生產工藝通常包括無菌分裝生產工藝和除菌過濾生產工藝。無菌分裝生產工藝是將采用經驗證的滅菌/除菌工藝過程處理后的原料藥或者原料藥和輔料，用無菌生產的方法分裝到采用經驗證的滅菌工藝處理的容器中，密封得到的。無菌分裝生產工藝的工藝研究和生產過程控制的重點是影響無菌保證水平的工藝步驟，主要包括物料（包括原料藥、輔料、內包裝材料等）的質量控制、原材料暴露于環境中可能再污染的操作步驟等。關于物料的質量控制，采用無菌分裝生產工藝的制劑所涉及的各種物料，都必須采用適當的滅菌/除菌工藝處理后方可使用。各種物料的滅菌/除菌工藝，都應是經過驗證的、控制良好的工藝。同時需要對各種物料的無菌性、細菌內毒素水平等進行嚴格控制，通過研究確定相應的質控標準。無菌分裝的生產工藝是將原料藥或者原料藥和輔料經分裝設備分裝至內包裝材料中后密封得到。分裝步驟是影響產品質量和無菌保證水平的關鍵生產步驟，應結合生產設備和產品特點進行工藝參數的研究，包括分裝速度和分裝時間等。無菌分裝生產工藝能否達到設定的無菌保證水平，與整個生產過程的控制密切相關，應按照GMP要求及產品具體生產工藝情況進行生產環境和生產過程的控制。在進行無菌生產工藝驗證時，應采用最差條件進行驗證，在實際生產過程中，對生產過程和工藝參數的控制均不能超過經驗證的最差條件的控制范圍。過濾除菌生產工藝的研究過濾除菌的無菌生產工藝是通過除菌過濾器，將藥液中的微生物除去得到無菌濾液。采用過濾除菌工藝時，同樣需要對影響無菌保證水平的工藝步驟及工藝參數進行詳細的研究，主要包括物料的質量控制、除菌過濾器的選擇及除菌過濾工藝參數的研究、除菌過濾生產過程的控制等。對于采用過濾除菌生產工藝的制劑，需注意對配制藥液使用的原料藥、輔料（包括注射用水）等原材料的微生物種類及數量進行檢查，掌握潛在的污染微生物的總體特性情況，通過研究確定相應的質控標準。采用過濾除菌生產工藝的制劑所使用的內包裝材料，必須采用適當的經驗證的滅菌工藝處理后方可使用。除菌過濾生產工藝所使用的除菌過濾器。除菌過濾器的過濾效能是評價除菌過濾工藝的重要參數，需要對除菌過濾器的過濾效能進行驗證。通常，影響除菌過濾器的除菌過濾效能的因素包括：①藥液的性質，如藥液的粘度、表面張力、pH值、滲透壓等；②過濾步驟的工藝參數，如過濾的壓力、流速、時間、溫度等；③除菌過濾器的相關參數，如除菌過濾器與藥液的相容性、除菌過濾器的過濾總量和使用周期等。除菌過濾器的過濾效能可因產品和操作條件不同而顯著不同。除菌過濾器的選擇及工藝參數的研究可結合上述影響除菌過濾器的過濾效能的因素進行。在實際生產過程中，在過濾除菌前后均需要進行濾器完整性測試。由于微生物通過過濾器的概率隨著待過濾溶液中微生物數量的增加而增加，除菌過濾工藝中需對待過濾溶液的微生物負荷情況進行研究和控制，通常情況下，最終除菌過濾前，料液的微生物負荷應不超過10cfu/100ml。應通過研究確定無菌生產各操作環節的時間控制范圍，如料液配制后待過濾的存放時間、藥液過濾操作的時間、過濾后至灌裝前放置的時間、灌封操作的時間、滅菌后的內包裝材料及密封件允許的放置時間等。各生產環節操作時間的確定需提供相應的試驗數據。無菌生產工藝的驗證無菌生產工藝的驗證主要包括培養基模擬灌裝試驗，應當盡可能模擬常規的無菌生產工藝，包括所有對無菌結果有影響的關鍵操作，及生產中可能出現的各種干預和最差條件。新建的無菌生產工藝的生產線在正式投產前必須進行連續三批無菌培養基模擬灌裝試驗。在生產用的設備、設施、人員結構及工藝方法有重大變更時都應進行培養基模擬灌裝試驗。實際生產中每半年應至少進行一次培養基模擬灌裝試驗。對于除菌過濾無菌生產工藝的驗證，還包括對除菌過濾系統的驗證，如過濾器的微生物截留驗證、過濾器與待過濾藥液的相容性驗證、過濾器的完整性驗證等。培養基模擬灌裝試驗需要選擇合適的培養基，并對培養基的質量進行控制。應當根據產品的劑型、培養基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養基。一般選用胰胨大豆肉湯培養基（TSB），按每30g加1L過濾純化水的比例，配制足夠量。某些特殊情況下也可以選用厭氧生長培養基，如硫乙醇酸鹽培養基（FTM）。培養基的質量控制主要包括培養基的微生物生長性能和無菌性。培養基的微生物生長性能：在按照標準操作規程制備培養基并滅菌后，可按照中國藥典附錄進行培養基微生物生長性能試驗，確認所制備的培養基應出現明顯的所接種的微生物的生長。培養基的無菌性：可按照中國藥典附錄進行培養基無菌性檢查，結果應符合規定。在培養基模擬灌裝試驗中，需進行陽性對照試驗，即取低濃度的菌種接種于進行陽性試驗用的對照容器中，與培養基模擬灌裝試驗在同一條件下進行培養。除了中國藥典附錄中規定的陽性菌，建議使用生產環境中常見的微生物，如枯草芽孢桿菌、白色念珠球菌，或者在同一生產環境中曾被檢出過的菌種。接種量一般每個容器102以下，每個菌種接種2瓶，通常需均證實有菌生長，該培養基模擬灌裝試驗方有效。如果試驗中需要使用模擬分裝用粉末，同樣需要對模擬分裝用粉末進行選擇和質量控制。模擬分裝用粉末的選擇一般遵循以下原則：①可以在干粉狀態下滅菌，滅菌后的無菌性達到藥典規定的標準；②流動性較好，可以用分裝機分裝；③可溶于液體培養基；④在模擬試驗應用的濃度下無抑菌性。常用的模擬分裝材料有乳糖、甘露醇、PEG6000、PEG8000等，也可以采用培養基干粉作為模擬分裝用無菌粉末。培養基模擬灌裝試驗中使用的內包裝材料的清洗、滅菌，分裝設備的清洗、消毒及與產品接觸的分裝設備