5省科技攻關計劃項目可行性研究報告(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 國每年約有 600 萬腫瘤患者，假如有百分之一的患者使用 “ 重組人白細胞介素 24腺病毒注射液 ” ，治療一個療程，用藥 20支，其用量為 120 萬支，按每支 2024 元人民幣計算，國內市場為 24億元人民幣，國內外市場的百 分之一為 44億元人民幣。 該項目產業化后，可年產 100 萬支，實現產值 20 億元人民幣，年銷售收入可達 12 億元人民幣，年利稅 6 億元人民幣，年創匯 2024萬美元。 所以，基因治療腫瘤是關系到廣大患者生命安全和生活質量 第 9 頁 共 20 頁 的高科技項目。同時，對包裝、印刷、玻璃制品等行業起到帶動作用。 五、研究內容與預期目標 研究內容： 人白細胞介素 24基因的克隆 重組人白細胞介素 24腺病毒的建立 重組人白細胞介素 24 腺病毒注射液的質量控制和檢測方法 的建立 重組人白細胞介素 24腺病毒注射液的抗腫瘤實驗 總體目標 本項目預計投入 800 萬元人民幣。可完成基礎性研究，獲得重組人白細胞介素 24腺病毒注射液樣品，整理出科研文獻。 本單位現有資產 億元人民幣，員工 116人。 經濟目標 項目完成時，預計年新增產品銷售額 3000 萬元、年新增交稅總額 200 萬元、年新增凈利潤 1000 萬元、年新增創（節）匯200萬美元、年新增產值 4000萬元。 技術、質量指標： 參照國家 laquo。人基因治療研究和制劑質量控制技術指導原則 raquo。、 laquo。中國生物制品規程 raquo。、 laquo。中國藥典 raquo。（ 2024 年版）等要求建立重組人白細胞介素 24 腺病 第 10 頁 共 20 頁 毒注射液的質量控制和檢測方法。著重對重組人白細胞介素 24腺病毒制品的病毒純度、病毒滴度的測定和復制型病毒（ rca）、腺相關病毒檢測的方法學進行研究。 比活性。病毒比滴度 =病毒感染滴度 /病毒顆粒數測定， %。 復制型病毒（ rca）的檢測： a549 細胞檢測法，每1010vp 中應 不 高于 1rca（即 ≤1rca/1010vp ）。 腺相關病毒的檢測。采用 pcr 法，應無腺相關病毒（ aav）的污染。 病毒純度檢測。采用高效液相色譜法或 a260/a280 法純度大于 95%。 本項目屬科技攻關項目，主要是完成技術性研究，取得該技術領域的科研成果。產業化達產后，預計可實現產值 10 億元人民幣，年銷售收入 6 億元人民幣，年利稅 3億元人民幣，年創匯1000 萬美元。用腺病毒攜帶 il24 基因治療腫瘤的方法可形成專利。 六、研究方案、技術路線、組織方式與課題 分解 重組人白細胞介素 24腺病毒注射液的技術方案 24腺病毒的建立 （ 1）人白介素 24基因的克隆 第 11 頁 共 20 頁 從人外周血單個核細胞中提取 mrna，設計并合成特異引物，應用 pcr 的方法擴增得到人白細胞介素 24的基因片段。 （ 2）人白介素－ 24基因序列的確證 將用 pcr 擴增出的人白介素 24 基因，進行測序，并與genebank 報道的結果比較，以確定擴增的白介素－ 24 基因序列的正確性。 （ 3）攜帶人白細胞介素－ 24基因腺病 毒穿梭質粒載體的構建與鑒定 采用基因工程的方法，將人白細胞介素－ 24 基因克隆至腺病毒穿梭質粒載體中，通過限制性內切酶圖譜法鑒定人白細胞介素－ 24基因是否重組到腺病毒穿梭質粒載體中。 （ 4）重組人白細胞介素－ 24腺病毒的構建 通過脂質體轉染技術，將攜帶人白細胞介素－ 24 基因腺病毒穿梭質粒載體轉染 293 細胞（人胚腎細胞），提取重組腺病毒dna進行 pcr鑒定。 （ 5）擴增前重組人白細胞介素－ 24腺病毒的空斑篩選 利用噬斑純化方法，將感染重組腺病毒的 293細胞進行培 養，挑選出單個重組腺病毒，以保證擴增的純度和穩定性。 （ 6）重組人白細胞介素－ 24腺病毒的擴增、純化 將經噬斑純化獲得重組腺病毒大量感染 293細胞，以大量生產重組腺病毒。待感染病毒的 293 細胞成熟后收獲細胞，經反復 第 12 頁 共 20 頁 凍融及離心等方法，除去細胞碎片，收集上清，獲得重組腺病毒。并通過超濾和離子交換的方法來純化和濃縮重組腺病毒，從而獲得大量、高滴度、高純度的重組人白細胞介素 24 腺病毒樣品。 、重組人白細胞介素 24 腺病毒注射液的質量控制和檢測方法的建立 參照國家 laquo。人基因治療研究和制劑質量控制技術指導原則 raquo。、 laquo。中國生物制品規程 raquo。、 laquo。中國藥典 raquo。（ 2024 年版）等要求建立重組人白細胞介素 24 腺病毒注射液的質量控制和檢測方法。著重對重組人白細胞介素 24腺病毒制品的病毒的純度、病毒滴度的測定和復制型病毒（ rca）、腺相關病毒檢測的方法學研究。 （ 1）比活性：病毒比滴度 =病毒感染滴度 /病毒顆粒數測定 （ 2）復制型病毒（ rca）的檢測： a549 細胞檢測法，每1010vp 中應不高于 1r