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【正文】 將裝好樣的紙筒放入抽提管 ， 倒入乙醚 ， 乙醚的量從提取管加入 ， 加入的量為提取瓶體積的 2/3 接上冷凝裝置 ， 在恒溫水浴中抽提 ， 水浴溫度大約為55℃ 左右 ， 抽提速度為 150滴 /min或每小時乙醚虹吸 58次 ， 理論抽提 68小時 ， 但也根據樣品性質來決定 。 ⑤ 稱重 抽提結束后立即取下提取管 ， 將其下口放到乙醚回收瓶內 ， 然后將提取瓶放到 100150℃ 烘箱烘至恒重 。 2022/2/11 78 4. 注意事項 （ 1） 所用乙醚必需是無水乙醚，如含有水分則可能 將樣品中的糖以及無機物抽出，造成誤差。 （ 2） 使用揮發乙醚或石油醚時，切忌直接用火源加 熱，應用電熱套、電水浴、電燈泡等。 （ 3） 在干燥器中的冷卻時間一般要一致 。 ⑥ 計算 脂肪 %= (W2W1)/W x 100% W2— 瓶和樣品重 （ g ） ,W1— 瓶子重量 （ g ）， W—— 樣品重量 （ g） 2022/2/11 79 實驗四 測定乳粉中的脂肪含量 (酸水解法 ) 一 、 實驗原理 試樣經鹽酸水解，使包藏或結合在組織里的脂肪游離出來，再用乙醚和石油醚，提取脂肪，干燥衡重后稱量。 二 、 儀器 、 試劑 95%乙醇，乙醚，石油醚（ 30－ 60℃ 沸程），脂 肪瓶（洗滌干燥，先稱量）。 100ml帶塞刻度量筒，水浴鍋，吸管，吸耳球， 冷凝裝置。 2022/2/11 80 三 、 測定 樣品處理 ① 固體樣品： 精密稱取 ，置于 100mL具塞 試管中，加 8mL水混勻后，再加 10mL鹽酸。 ② 液體樣品： 稱取 50ml大試管中，加 10m1鹽酸 水解 將試管放入 7080℃ 水浴中，每 510min用玻璃棒攪拌一次，至樣品脂肪游離水解完全為止，約 4050min。 2022/2/11 81 提取 取出試管，冷卻，加入 10m1乙醇，混合，冷卻后將混合物移入 100mL具塞量筒中，用 25m1乙醚分次洗試管，一并倒入量筒中，待乙醚全部倒入量筒后，加塞搖動 1分鐘，搖動中間小心開塞放出氣體，再塞好，靜置 12分鐘，小心開塞，用石油醚一乙醚等量混合液沖洗塞及筒口附著的脂肪，再靜置 1020分鐘，待上部液體清晰，吸出上清液于己恒重的脂肪瓶內，進行二次提取，再向量筒中加入 10ml乙醚，搖動一分鐘，重復上述過程。 2022/2/11 82 回收溶劑、烘干、稱重 待脂肪瓶于水浴上蒸干后，置 100105℃ 烘箱中干燥 24小時。取出放入干燥器內冷卻 30分鐘后稱量，并重復以上操作至恒重。 四 、 結果計算 脂肪 (%)= 100% 式中： m2— 脂肪瓶和脂類質量， g m1— 空脂肪瓶的質量， g m— 試樣的質量， g m2m1 m 2022/2/11 83 五、討論 1．測定的樣品須充分磨細，液體樣品需充分混合均 勻，以便水解完全至無塊狀碳粒，否則結合性脂 肪不能完全游離，致使結果偏低。同時用有機溶 劑提取時也往往易乳化。 2．水解時應防止大量水分損失，使酸濃度升高。 3．水解后加入乙醇可使蛋白質沉淀，降低表面張力， 促進脂肪球聚合，同時溶解一些碳水化合物、有 機酸等。后面用乙醚提取脂肪時，因乙醇可溶于 乙醚，故需加入石油醚．降低乙醇在醚中的溶解 度，使乙醇溶解物殘留在水層，并使分層清晰。 2022/2/11 84 4．蒸干溶劑后，殘留物中若有黑色焦油狀雜質，是 分解物與水一同混入所致，會使測定值增大，造 成誤差，可用等量的乙醚及石油醚溶解后過濾， 再次進行蒸干溶劑的操作。 5．乙醇作用：使蛋白質沉淀，同時溶解一些碳水化 合物 (糖 )、有機酸等，使其不進入醚相，乙醇、 丁醇等為破乳劑，降低表面張力，促進脂肪球聚 合 (表面活性劑等 )促進分層 6．石油醚作用：降低乙醇在乙醚中的溶劑度，促進 分層。 特別注意：萃取分離的影響因素和解決辦法 2022/2/11 85 167。 7 灰分的測定 灰分 是指有機物經完全燃燒后殘留的物質 ， 其中含有微生物發酵過程中所需要的微量無機鹽等 。 雖然灰分中含有微生物發酵過程中所需要的微量無機鹽 ， 但是如果原料中灰分過高 ， 則會影響某些微生物發酵產品的積累 ， 從而妨礙發酵的正常進行 。 因此 ， 灰分測定是原料檢測中的一個重要項目 。 灰分的定義 2022/2/11 86 灰分的測定方法 灰分的測定方法有兩種：碳酸灰法和硫酸灰法 1. 碳酸灰法 也叫直接燒灰法 ， 先在較低溫度下將樣品完全碳化 ， 然后移入高溫爐高溫灼燒 。 因為用這種方法得到的灰分的主要成分是碳酸鹽 ， 因此稱為碳酸灰法 。 2022/2/11 87 （ 1） 原理 把一定量的樣品經炭化后放入高溫爐內灼燒 ， 使有機物質被氧化分解以二氧化碳 、 氮的氧化物及水等形式逸出 ， 而無機物質以硫酸鹽 、 磷酸鹽 、 碳酸鹽 、氯化物等無機鹽和金屬氧化物的形式殘留下來 ， 這些殘留物即為灰分 ， 稱量殘留物的重量即可計算出樣品中總灰分的含量 。 （ 2） 儀器 ①高溫爐 ②坩堝 ③坩堝鉗 ④干燥器 ⑤分析天平 2022/2/11 88 （ 3） 試劑 （ 4） 測定步驟 瓷坩堝的準備 → 樣品預處理 → 炭化 → 灰化 ① 1： 4鹽酸溶液 ② %三氯化鐵溶液和等量藍墨水的混合液 ③ 6mol/L硝酸 ④ 36%過氧化氫 ⑤辛醇或純植物油 2022/2/11 89 a. 瓷坩堝的準備 將坩堝用鹽酸 （ 1： 4） 煮 1~2小時 ， 洗凈晾干后， 用三氯化鐵與藍墨水的混合液在坩堝外壁及蓋上寫上編號 ， 置于規規定溫度 （ 500~550℃ ） 的高溫爐中灼燒 1小時 ， 移至爐口冷卻到 200℃ 左右后 ， 再移入干燥器中 ， 冷卻至室溫后 ， 準確稱重 ， 再放入高溫爐內灼燒 30分鐘 ， 取出冷卻稱重 ， 直至恒重 （ 兩次稱量之差不超過 ） 。 2022/2/11 90 b. 炭化操作 一般在電爐或煤氣燈上進行 ， 把坩堝置于電爐或煤氣燈上 ， 小心加熱使試樣在通氣情況下逐漸炭化 ， 直至無黑煙產生 。 對特別容易膨脹的試樣 ， 可先于試樣上加數滴辛醇或純植物油 ， 再進行炭化 。 c. 稱重 炭化后 ， 把坩堝移入已達規定溫度 （ 500~550 ℃ ） 的高溫爐爐口處 ， 稍停留片刻 ， 再慢慢移入爐膛內 ， 坩堝蓋斜倚在坩堝口 ， 關閉爐門 ， 灼燒一定時間（ 視樣品種類 、 性狀而異 ） 至灰中無碳粒存在 。 打開爐門 ， 將坩堝移至爐口處冷卻至 200℃ 左右 ， 移入干燥器中冷卻至室溫 ， 準確稱重 ， 再灼燒 、 冷卻 、 稱重， 直至達到恒重 。 2022/2/11 91 （ 5） 結果計算 灰分 （ %） = m3m1 m2m1 100% 式中： m1—— 空坩堝質量， g m2—— 樣品加空坩堝質量， g m3—— 殘灰加空坩堝質量， g 2022/2/11 92 （ 6） 討論 ① 樣品炭化時要注意熱源強度，防止產生大量泡沫 ② 把坩堝放入高溫爐或從爐中取出時，要放在爐口 停留片刻，使坩堝預熱或冷卻，防止因溫度劇變 而使坩堝破裂。 ③ 灼燒后的坩堝應冷卻到 100℃ 以下再移入干燥器 中，否則因熱的對流作用，易造成殘灰飛散，且 冷卻速度慢，冷卻后干燥器內形成較大真空，蓋 子不易打開。 ④ 從干燥器內取出坩堝時，因內部成真空，開蓋時 應注意使空氣緩緩流入，以防殘灰飛散。 2022/2/11 93 在灼燒前 ， 先加入濃硫酸 ， 使有機物易于除去 ，然后再高溫灼燒 ， 用這種方法得到的殘留灰分是硫酸鹽 ， 因此稱為硫酸灰 。 硫酸灰比碳酸灰重 ， 它們兩個之間可以換算 。 碳酸灰 （ %） = 硫酸灰 (%) 2. 硫酸灰法 2022/2/11 94 本章作業 1 分解試樣的方法、特點 2 測定水分的主要方法，條件、應用 3 斐林試劑法特點 4 凱氏定氮法原理及主要反應式 5 測定酸的方法 6 測定脂肪的主要方法 (例舉二種主要方法 ) 7 硫酸灰、碳酸灰的區別與聯系