hplc常見問題和對策-資料下載頁

　　

【正文】 品體積過大－－用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% ②在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展－－進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散 ③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢－－設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn) ④檢測器時(shí)間常數(shù)過大－－設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10% ⑤流動相粘度過高－－增加柱溫,采用低粘度流動相 ⑥檢測池體積過大－－用小體積池,卸下熱交換器 ⑦保留時(shí)間過長－－等度洗脫時(shí)增加強(qiáng)溶劑含量,也可用梯度洗脫 ⑧柱外體積過大－－將連接管徑和連接管長度降至最小 ⑨樣品過載－－進(jìn)小濃度小體積樣品，還有哪些因素能引起壓力改變？ 改變流動相組成和溫度；改變柱長、柱內(nèi)徑和填料粒度；柱突然阻塞壓力升高（正常情況下其它條件不變柱壓都是逐漸升高的）。、弱溶劑？ 改變流動相的組成或溶劑溶劑強(qiáng)度就可以改變峰容量因子和保留時(shí)間。在一定條件下，減少保留時(shí)間或縮短分析時(shí)間的溶劑為強(qiáng)溶劑，增加保留時(shí)間或延長分析時(shí)間的溶劑為弱溶劑。？ 在分析多組分樣品時(shí)，僅改變流動相的強(qiáng)度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時(shí)間，不會發(fā)生峰位的重排。 下列條件改變可能發(fā)生峰位重排：流動相中換了強(qiáng)溶劑；PH值的改變；柱填料的改變；柱溫的改變；流動相的組成改變（如加入離子對試劑三乙基胺等）。，常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些？ 加熱回流脫氣，脫氣效果最佳，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價(jià)格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗(yàn)室中最常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。？ 評介一根色譜柱的基本指標(biāo)是：塔板數(shù)、峰不對稱因子、柱壓降、適用范圍和鍵合相濃度以及峰容量。？ 時(shí)間常數(shù)實(shí)際上是響應(yīng)時(shí)間的設(shè)定，起著過濾噪音的作用。時(shí)間常數(shù)太小（太快）可能增加短噪音，時(shí)間常數(shù)太大（太慢）可能出寬峰、拖尾峰。？ 所用的流動相在檢測波長下有吸收，而進(jìn)在此波長下沒有吸收或吸收低于流動相的溶液，在流動相中會出現(xiàn)洞穴，通過柱后出現(xiàn)倒峰?！芭帧狈搴推筋^峰？怎樣避免？ 用比流動相強(qiáng)度大的大體積樣品進(jìn)樣，通常會損害色譜圖的質(zhì)量，而出現(xiàn)“胖”峰和平頭峰。應(yīng)遵循下列規(guī)則選用溶劑溶解樣品：A最好用流動相溶解樣品進(jìn)樣。B用大體積弱溶劑溶解樣品，如反相色譜中用水溶解樣品進(jìn)樣，主要缺點(diǎn)是每次進(jìn)樣后在色譜圖的開頭出現(xiàn)大的負(fù)峰，有時(shí)還波及到樣品峰。C需要時(shí)用強(qiáng)溶劑溶解進(jìn)樣。？ 在良好的色譜分離中，樣品分子是以單一的保留過程被保留。如在反相色譜中，溶質(zhì)與柱填料的非極性烷基鏈發(fā)生疏水性相互作用。但在以硅膠為基質(zhì)的填料中，有些樣品組分能與硅醇基團(tuán)相互作用，脫附的過程很慢，使峰嚴(yán)重拖尾，這就是次保留過程。對付次保留效應(yīng)最有效的方法就是選用封尾更好色譜柱或加入流動相改良劑（也叫掃尾劑）。？ 因柱溫問題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見前延峰，提高溫度后前延峰的現(xiàn)象消失。在離子對色譜中，前延峰的另一個(gè)原因是用非流動相作樣品溶劑。因此在離子對色譜中要求僅用流動相溶解樣品，而且進(jìn)樣量不要太大，否則會導(dǎo)致前延峰或其它問題。在RPHPLC中樣品溶液的強(qiáng)度大于流動相引起前延峰。增加流動相的強(qiáng)度，減少樣品溶液的強(qiáng)度，在離子對色譜中增加離子強(qiáng)度，可以克服前延峰的效應(yīng)。此外使用流動相溶解樣品是解決的最簡單實(shí)用的方法。？ A在使用過程中柱本身退化，逐漸降低柱效。B柱外峰寬效應(yīng)。一根很好的專用柱用于另一液相色譜系統(tǒng)引起塔板數(shù)降低，說明新系統(tǒng)有很大的柱外峰寬效應(yīng)。C化學(xué)效應(yīng)，多數(shù)是流動相和固定相相互作用所致，改變流動相可使寬峰有所改善。？ 柱平衡慢的常見原因是，組分在舊的或新的流動相中對柱吸附強(qiáng)，或者在新的流動相中濃度小甚至為零。A流動相含有胺改良劑；B流動相含有離子對試劑；硅膠柱；流動相中有四氫呋喃。可考慮采用專用柱用于特殊的方法，不用時(shí)將柱折下來，注滿適當(dāng)?shù)娜軇┗蛄鲃酉?，密封保管，不再作其它的分析。? A內(nèi)標(biāo)物的結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)應(yīng)與被分析組分相似或相近；B內(nèi)標(biāo)物的保留值應(yīng)稍大于或小于被分析物的保留，不能相差過大；C內(nèi)標(biāo)物的峰要與所有被分析物的峰有良好的分離度（），不能讓內(nèi)標(biāo)物成了干擾物；D無結(jié)構(gòu)相似的內(nèi)標(biāo)物，可用保留相近的內(nèi)標(biāo)物；E儀器對分析物的響應(yīng)與內(nèi)標(biāo)基本一致，出峰面積大小不能相差懸殊。 ？ A管子的斷面必須垂直，否則，將會產(chǎn)生死體積而引起色譜峰峰形擴(kuò)展。B確保管子內(nèi)表面不被損傷，如果損傷，可能會發(fā)生管路堵塞。C將管子完全插入開口端，直至其與開口端的末端相碰為止。否則，將會產(chǎn)生死體積而引起色譜峰峰形擴(kuò)展。D不要過分?jǐn)Q緊螺帽，以防損壞螺紋。33. 什么是HPLC的“無限直徑效應(yīng)”？ 在HPLC分析中由于使用了高效微粒固定相及高壓流動相，樣品以柱塞式注入色譜柱后，因柱的阻力大，樣品分子在柱中的分子擴(kuò)散很小，直至它從色譜柱流出也未與色譜柱內(nèi)壁接觸，因而引起的色譜峰形擴(kuò)展很小，能保持高柱效。？ A噪聲：通常噪聲是指由儀器的電氣元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動； B基線飄移：漂移是基線的一種向上或向下的緩慢移動，可在較長時(shí)間（~1h）內(nèi)觀察到。它可掩蔽噪聲和小峰。漂移與整個(gè)液相色譜系統(tǒng)有關(guān)，而不僅是由檢測器引起的； C靈敏度（最小檢出濃度或最小檢出量）：在一個(gè)特定分離工作中， 檢測器是否有足夠的靈敏度是十分重要的。當(dāng)比較檢測器時(shí)，常使用敏感度這一性能指標(biāo)。敏感度即指信號與噪聲的比值（信噪比）等于2時(shí)，在單位時(shí)間內(nèi)進(jìn)入檢測器的溶質(zhì)的濃度或質(zhì)量； D線性范圍：在進(jìn)行定量分析時(shí)，希望檢測器有寬的線性范圍，以便在一次分析中可同時(shí)對主要組分和痕量組分同時(shí)進(jìn)行檢測； E檢測器的池體積：它應(yīng)小于最早流出的死時(shí)間色譜峰的洗脫體積的1/10，否則會產(chǎn)生嚴(yán)重的柱外譜帶擴(kuò)展。？ 設(shè)定泵使用一個(gè)單獨(dú)通路（A），打開Purge閥，流速5ml/min，提起其他溶劑瓶內(nèi)的溶劑過濾頭直至離開液面，觀察這些通路（B、C、D）內(nèi)的溶劑是否隨著流動，正常時(shí)均不應(yīng)流動。文章鏈接：中國化工儀器網(wǎng)