實驗室病原微生物危害評估報告-資料下載頁

　　

【正文】 滅活病毒。在酸性條件下不穩定，～。　　二、致病性與免疫性　　(一)致病性　　我國乙腦病毒的傳播媒介主要為三帶喙庫蚊。蚊感染病毒后，中腸細胞為最初復制部位，經病毒血癥侵犯唾液腺和神經組織，并再次復制，終身帶毒并可經卵傳代，成為傳播媒介和貯存宿主。在熱帶和亞熱帶，蚊終年存在，蚊和動物宿主之間構成病毒持久循環。在溫帶，鳥類是自然界中的重要貯存宿主。病毒每年或通過候鳥的遷棲而傳入，或病毒在流行區存活過冬。有關病毒越冬的方式可為：①越冬蚊再感染鳥類，建立新的鳥—蚊—鳥循環；②病毒可在鳥、哺乳動物、節肢動物體潛伏越冬。實驗表明，自然界中蚊與蝙蝠息息相關，蚊將乙腦病毒傳給蝙蝠，受染蝙蝠在10℃，不產生病毒血癥，可持續存在達3個月之外，當蝙蝠返回室溫環境3天后，出現病毒血癥，構成蚊—蝙蝠—蚊的循環；③冷血脊椎動物為冬季貯存宿主(如蛇、蛙、蜥蜴等)，可分離出病毒?！　〖倚蠛图仪菰诹餍屑竟澑腥疽夷X病毒，一般為隱性感染，但病毒在其體內可增殖，侵入血流，引起短暫的病毒血癥，成為乙腦病毒的暫時貯存宿主，經蚊叮咬反復傳播，成為人類的傳染源。特別是當年生仔豬最為重要，對乙腦病毒易感，構成豬—蚊—豬的傳播環節，故在人群流行前檢查豬的病毒血癥和蚊帶毒率，可預測當年人群的流行程度，并通過豬的免疫預防，可控制本病在豬及人群中的流行?！　‘攷Ф敬莆枚Ｒ藭r，病毒隨蚊蟲唾液傳入人體皮下。先在毛細血管內皮細胞及局部淋巴結等處的細胞中增殖，隨后有少量病毒進入血流成為短暫的第一次病毒血癥，此時病毒隨血循環散布到肝、脾等處的細胞中繼續增殖，一般不出現明顯癥狀或只發生輕微的前驅癥狀。約經4～7日潛伏期后，在體內增殖的大量病毒，再侵入血流成為第二次病毒血癥，引起發熱、寒戰及全身不適等癥狀，若不再繼續發展者，即成為頓挫感染，數日后可自愈；但少數患者(%)體內的病毒可通過血腦屏障進入腦內增殖,引起腦膜及腦組織發炎,造成神經元細胞變性壞死、毛細血管栓塞、淋巴細胞浸潤，甚至出現局灶性壞死和腦組織軟化。臨床上表現為高燒、意識障礙、抽搐、顱內壓升高以及腦膜刺激癥。重癥患者可能死于檢驗科質量管理體系文件呼吸循環衰竭，部分患者病后遺留失語、強直性痙攣、精神失常等后遺癥?！　?二)免疫性　　人受乙腦病毒感染后，大多數為隱性感染及部分頓挫感染，僅少數發生腦炎(%)，這與病毒的毒力，侵入機體內數量及感染者的免疫力有關。流行區成人大多數都有一定免疫力，多為隱性感染，10歲以下兒童及非流行區成人缺乏免疫力，感染后容易發病?！　”静〔『?～5天可出現血凝抑制抗體，2～4周達高峰，可維持一年左右。補體給合抗體在發病2～3周后方可檢出，約存在半年。中和抗體約在病后1周出現，于5年內維持高水平，甚至維持終生。流行區人群每年不斷受到帶病毒的蚊叮咬，逐漸增強免疫力，抗體陽性率常隨年齡而增高，例如北京市20歲以上成年人90%血清中含有中和抗體。因此本病多見于10歲以下的兒童，但近些年來乙腦發病年齡有增高趨勢，值得重視?！　∪⑽⑸飳W診斷　　乙腦早期快速診斷通常采集性期患者血清或腦脊液特異性lgM ，也可做RT—PCR檢測標本中的病毒核酸片段，一般6個小時內可初步報告結果。常規血清學試驗，(HCF、NT)需取雙份血清，同時做對比試驗，當恢復期血清抗體滴度比急性期≥ 4倍時，有輔助診斷意義，可用于臨床回顧性診斷。由于乙腦患者病毒血癥期短，直接檢出病毒抗原或分離病毒陽性率低，較少用于診斷試驗。 　　(一)特異性lgM檢測　　乙腦病毒感染發病早期即產生特異性lgM ，病后2～3周達到高峰，故單份血清可做出早期診斷?？墒褂茫孩?lgM 捕捉ELISA法(見23章)； ②2ME—NI法，血凝抑制抗體存在于lgM及lgG中，將早期單份血清分成二份，一份用2巰基乙醇(2ME)處理，以破壞lgM ，另一份不處理，然后同時做HI試驗，若處理血清抗體滴度比未處理的下降≥4倍，則為lgM 陽性； ③微量間接免疫熒光法，用熒光素標記的抗u鏈血清，檢測已與細胞抗原片結合的lgM，根據特異性熒光顆粒，判斷血清標本中的lgM存在。　　(二)常規血清學試驗　　 對乙腦診斷而言，本法特異性較低，但敏感性高，簡便易行。常用于病毒的初步鑒定，確定有無乙腦病毒存在。檢測血清標本中的HI抗體，多采用2ME—HI法?！　?補體結合抗體僅存在于lgG 中，病后出現遲，消失快，適用于診斷近期感染。　　 抗體存在于lgG、 lgM中，出現早，維持久。中和試驗特異性和敏感性都高，但操作繁雜，需用大量動物或組織培養管，需時較久，不適于臨床診斷常規使用，而在血清學流行病學調查和病毒鑒定上有價值?！　?三)病毒分離與鑒定　　取病尸腦組織研磨成10%懸液，接種13日齡乳鼠腦內，待發病頻死時，取腦懸液，用單克隆抗體做中和試驗鑒定病毒。也可接種敏感細胞(如C6/36細胞系)分離病毒?！　∷?、特異防治檢驗科質量管理體系文件　　(一)特異預防　　現用的乙腦滅活疫苗是用地鼠腎細胞培養增殖，甲醛滅活制成，初次免疫時，皮下注射2～3次，間隔710天，以后每年加強注射一次，免疫力維持半年左右，保護率達6690%。我國已篩選出乙腦病毒減毒株，用地鼠腎細胞培養制成減毒活疫苗，只需皮下注射一次，安全有效，目前正作現場觀察。疫苗接種對象是10歲以下兒童和來自非疫區的軍民。流行區當年飼養的仔豬接種乙腦疫苗，以杜絕傳染來源，也可使豬健康成長?！　》牢脺缥檬穷A防本病的有效措施?！　?二)特異治療　　目前乙腦治療仍采用對癥處理及支持療法，有報道用病毒唑、干擾素、恢復期血清等治療，可能減輕病勢，但已出現腦炎癥狀者，則無治療效果。我國采用淋巴細胞雜交瘤技術，制備出高中和活性乙腦單克隆抗體，經系統動物實驗治療證明安全有效，95年經衛生部批準進入 Ⅰ、Ⅱ 期臨床試驗，是一種特異免疫治療制劑。第二節 森林腦炎病毒　　森林腦炎病毒（簡稱森腦病毒）由蜱傳播，在春夏季節流行于俄羅斯及我國東北森林地帶，故稱蘇聯春夏腦炎病毒（Russian springsummer encephalitis virus）。本病主要侵犯中樞神經系統，臨床上以發熱，神經癥狀為特征，有時出現癱瘓后遺癥?！　∩帜X炎病毒呈球形,直徑為30~40nm，衣殼二十面體對稱外有包膜，含血凝素糖蛋白，可能為同一病毒的兩個亞型。森腦病毒形態結構、培養特性及抵抗力似乙腦病毒，但嗜神經性較強，接種成年小白鼠腹腔、地鼠或豚鼠腦內，易發生腦炎致死。接種猴腦內，可致四肢麻痹。也能凝集鵝和雛雞的紅細胞?！　”静《緝Υ嫠拗黩?，及哺乳動物（刺猬、松鼠、野兔等），這些野生動物受染后為輕癥感染或隱性感染，但病毒血癥期限有長有短，如刺猬約23天。蜱是森腦病毒傳播媒介，又是長期宿主，其中森林硬蜱的帶病毒率最高，成為主要的媒介。當蜱叮咬感染的野生動物，吸血后病毒侵入蜱體內增殖，在其生活周期的各階段，包括幼蟲、稚蟲、成蟲及卵都能攜帶本病毒，并可經卵傳代。牛、馬、狗、羊等家畜在自然疫源地受蜱叮咬而傳染，并可把蜱帶到居民點，成為人的傳染源?！　”静《镜闹虏⌒耘c乙腦病毒相同，非疫區易感人被帶有病毒的蜱叮咬后，易感染發病，另外因喝生羊奶（羊感染時奶中有病毒或被蜱類污染）而被傳染，約經8～14天潛伏期后發生腦炎，出現肌肉麻痹、萎縮、昏迷致死，少數痊愈者也常遺留肌肉麻痹。居住在森林疫區的發生腦炎，出現肌肉麻痹、萎縮、昏迷致死，少數痊愈者也常遺留肌肉麻痹。居住在森林疫區的人，因受少量病毒的隱性感染，血中有中和抗體，對病毒有免疫力。病愈后皆產生持久的牢固免疫力。　　分離病毒及血清學檢驗方法與乙腦相同。在疫區內調查森腦病毒時，可將小白鼠、小雞、地鼠或猴關在籠內，置于森林中地上，引誘蜱來叮咬而傳染，動物感染后雖可能不發病，但可根據測定血中有無產生特異性抗體而加以驗證。　　預防此病，可給去森林疫區的人接種滅活疫苗，效果良好。在感染早期注射大量丙種球蛋白或免疫血清可能防止發病或減輕癥狀。此外，應穿著防護衣襪，皮膚涂擦鄰苯二甲酸酯（Orthophenyldimethylphthalate）,以防被蜱叮咬。檢驗科質量管理體系文件第九章 淋病奈瑟氏菌的生物危害評估報告　淋病的病原體即奈瑟菌，是1879年由Neisseria首次分離出的淋病雙球菌，因此淋病雙球菌又稱為奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeas)。淋病雙球菌呈腎形，兩個凹面相對，大小一致。它是嗜二氧化碳的需氧菌，革蘭染色陰性，最適宜在潮濕，溫度為35℃，%二氧化碳的環境中生長。常存在多核白細胞內，橢圓或球形，常成雙排列，無鞭毛、無莢膜、不形成芽孢，對外界理化條件的抵抗力差，最怕干燥，在干燥環境中12 小時即可死亡。在高溫或低溫條件下都易致死。對各種化學消毒劑的抵抗力也很弱。一、分類　　男性淋病 急性前尿道炎的最早癥狀為尿道口紅腫、發癢及輕微刺痛，繼有稀薄粘液流出，引起排尿不適。24小時以后癥狀加劇，紅腫發展到整個YJ頭及部分尿道，分泌物由稀薄轉變為深黃色的膿液，出現尿頻、尿痛、排尿困難、行動不便，入晚YJ常有痛性勃起。少數病例有微熱及疲乏癥狀。兩側腹股溝淋巴結亦可受到感染而引起紅腫疼痛，甚至化膿?！　∨粤懿　∨粤懿“虻懒懿〖吧车懒懿蓚€方面，女性患者由于尿道短，故泌尿道癥狀往往不明顯，而常以白帶增多，下腹痛等生殖道癥狀為主。最常見的感染部位為宮頸、尿道、尿道旁腺、子宮內膜及輸卵管。因此臨床診斷時除尿道分泌物涂片外，更主要的應做陰道子宮頸涂片，否則容易漏診。1020%婦女伴有盆腔炎、繼發不育或宮外孕等婦科疾病。　　附性腺炎 男性淋病患者的炎癥擴散到后尿道時，可出現急性前列腺炎、精囊炎和附睪炎，除排尿刺激癥狀加重以外，還可出現急性尿潴留及會陰部疼痛，部分患者出現高熱、寒戰等全身癥狀。　　婦女陰道炎 由于小孩陰道是由柱狀上皮所包圍，極易被淋病雙球菌感染，會陰部紅腫，陰道及尿道有綠色分泌物，排尿疼痛，有時累及肛門。新生兒眼炎（淋病性結膜炎，gonococcal ophthalmia）新生兒自孕婦陰道感染，出生后2~3天出現癥狀，眼瞼水腫、發紅，有膿性分泌物，一旦延誤治療，則角膜呈蒸汽狀，可能穿透角膜，導臻失明。因此淋病孕婦的新生兒應該用硝酸銀滴眼預防。二、傳染方式　　通過性接觸傳染：主要是通過性交或其他性行為傳染。男性淋病少部分是由性交接觸引起的，女性淋病也可由性交直接感染，也可由其他方式感染。淋病患者是傳染源，性接觸是淋病主要傳播方式，傳播速度快，而且感染率很高，感染后35天即可發病。也可通過被患者分泌物污染的衣服、被褥、便盆、醫療器械而間接傳染，特別是幼女常通過間接途徑而被感染；新生兒可通過患淋病孕婦的產道而被感染，引起淋菌性結膜炎。非淋是指除了淋球菌以外的細菌感染，感染人群中以青壯年為主。檢驗科質量管理體系文件　　2．非性接觸傳染（間接傳染）：此種情況也較多，主要是接觸病人含淋病雙球菌的分泌物或被污染的用具，如沾有分泌物的毛巾、腳布腳盆、衣被，甚至于廁所的馬桶圈等均可傳染，特別是女性（包括幼女），因其尿道和生殖道短，很易感染。新生兒經過患淋病母親的產道時，眼部也可引起新生兒淋菌性眼炎，妊娠期婦女淋病患者可引起羊膜腔內感染，包括胎兒感染。　　成人特別是男性淋病20%30%屬于性交傳染。目前，我國以暗娼為主要傳染源。調查資料表明，在淋病患者中男女一次性交感染率為22%35%；男女雙方感染率是男性易于傳染給女性。一次性交男性傳染給女性的感染率為50%90%，女性傳染給男性的為25%50%，感染率與性交次數成正比。男性與女性病人性交感染率平均為19%25%，2次為35%，3次為49%，4次為57%。人類是淋球菌的唯一天然宿主，主要侵犯粘膜，尤其對單層柱狀上皮和移行上皮所形成的粘膜有親和力。感染后淋菌侵入男性前尿道、女性尿道及宮頸等處，由于其表面的菌毛含有粘附因子，因而粘附到柱狀上皮細胞的表面進行繁殖，并沿生殖道上行，通過柱狀上皮細胞的吞噬作用而進入細胞內繁殖，導致細胞溶解破裂，淋球菌遂被排至細胞外的粘膜下層。淋球菌內毒素及淋菌表面外膜產生的脂多糖與補體結合產生一種化學毒素，能誘導中性粒細胞聚集和吞噬引起局部急性炎癥，出現充血、水腫、化膿和疼痛。當細菌進入尿道腺體和隱窩后，腺管開口及隱窩被阻塞，潛藏的細菌成為慢性淋病的主要病灶?！　∪?、實驗室檢查　　?。ㄒ唬┩科瑱z查：　　取患者尿道分泌物或宮頸分泌物，作革蘭氏染色，在多形核白細胞內找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽性率在90%左右，可以初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽性率僅為5060%，且有假陽性，因此世界衛生組織推薦用培養法檢查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少，陽性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高檢出率?！　⊙什客科l現革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病，因為其他奈瑟菌屬在咽部是正常的菌群。另外對癥狀不典型的涂片陽性應作進一步檢查?！　。ǘ┡囵B檢查：　　淋球菌培養是診斷的重要佐證，培養法對癥狀很輕或無癥狀的男性、女性病人都是較敏感的方法，只要培養陽性就可確診，在基因診斷問世以前，培養是世界衛生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。目前國外推薦選擇培養基有改良的ThayerMartin（TM）培養基和New York City（NYC）培養基。國內采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養基，均含有抗生素，可選擇地抑制許多其他細菌生長。在36℃，70%濕度，含5%10%CO2（燭缸）環境中培養，2448小時觀察結果。培養后還需進行菌落形態，革蘭氏染色，氧化酶試驗和糖發酵試驗等鑒定。培養陽性率男性80%95%，女性8090%。檢驗科質量管理體系文件　 （三）抗原檢測　　1．固相酶免疫試驗（EIA）：可用來檢測臨床標本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地區而又不能作培養或標本需長時間遠送時使用，可以在婦女人群中用來診斷淋球菌感染?！　?．直接免疫熒光試驗：通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗。但目前在男女二性標本的敏感不高，特異性差，加之實驗人員的判斷水平，故該實驗尚不能推薦用來診斷淋球菌感染。　　（四）基因診斷　　1．淋球菌的基因探針診斷 淋球菌的基因