elisa灰區的設置與質控方法-資料下載頁

　　

【正文】 6750150—3553860045—264607154155—4557866350—184787434160—6563875655—134917636165—3566880260—64977729170—7573891165—55027807175—4577897470—85107932180—11588914575—35137978185—10598930080—25158009190—7605940985—45198072195—6611950290—25218103200—5616958095—25238134205—96259720100—25258165210—106359876105—45298227215—36389992110—35328274220—56431000 表4 抗HCV陽性樣本稀釋Cov值 稀釋倍數 樣本編號12345678910111213均值1：107068195778638895486954353286364967808556641：206634733386605704564414251743932385387244721：405112791586094902793845840941912254787043841：603862221366043811413784840540901394225393061：803141330983462191113463380310920922084292121：1002191080763111540692472990210450371612391531：1201860880732011090691892270250360270711291121：1401260690612060940560941660110330210361110831：1601010640541850960550541560090210110310550691：1801040680331060650480391490080170170270490561：2000790490250850450300301120090110150250380431：2200680480270690500320231040080130090220240381：240056034021055045040024087009010012017030034 由表4結果，分別對各樣本不同稀釋倍數的檢測結果繪制抗HCV陽性樣本稀釋Cov曲線圖，并對相同稀釋倍數的不同樣本計算平均值繪制抗HCV陽性樣本稀釋Cov平均值曲線圖，結果見圖3。由結果可知，陽性樣本，經過稀釋，最終使篩查實驗無法檢出。但是，陽性樣本稀釋到一定程度，雖然Cov值持續下降，結果呈陰性反應，在陽性和陰性結果轉換期間，曲線總體趨勢逐漸由陡峭到平坦，進入1個相對穩定的平臺期。統計表4中Cov均值＜20的數據，Cov平均值=073s=04平均值+2s=1552。 圖3 抗HCV陽性樣本稀釋Cov平均值圖3 討論 綜合陰性、陽性樣本和陽性稀釋樣本統計數據，兩者灰區范圍結果吻合，均在070左右，該值遠高于多數陰性樣本Cov值（表2結果中9448%的陰性樣本Cov值＜070），足以區識陰陽性，可以作為分界線，彌補ELISA試劑盒單純以cut off值判斷陰陽性的缺陷，因此把篩查結果Cov值下浮30%范圍視為“灰區”較為合適。對該區樣本需要增補試驗聯合檢測，以防漏檢。 把“灰區范圍”設置為30%，處于該區域內的樣本占本項研究全部樣本的049%，“灰區范圍”內的這些樣本經文中方法鑒定后的真陽性率為100%。由此表明確實存在灰區樣本漏檢情況發生，故而有必要對這些樣本進行確認。而處于“灰區范圍”內的樣本僅占全部樣本的049%，即便增加試驗聯合檢測，也不會過多增加工作量，在實際工作中是現實可行的。另外，結果不一致的樣本，Cov平均值、s和Cov平均值+2s分別為2107367，從而表明結果不一致的樣本多為弱陽性樣本，一般情況下Cov值＜40。在常規檢測過程中，可能會有一些陽性樣本，由于抗體濃度較低而出現假陰性結果的現象。所以，設置1個適當的“灰區范圍”，對處于該范圍的樣本做進一步的檢測，采用多種試劑聯合檢測，只有當結果均為陰性時方可發出檢驗報告，必要時需再次取樣隨訪調查，以避免漏檢現象的發生。 一般而言，HCV能夠誘導機體產生幾乎針對所有結構蛋白和非結構蛋白的抗體應答反應，在出現臨床癥狀的HCV感染者中，約有50%—70%的患者可檢出抗HCV，且隨著感染的持續而逐步增強，慢性感染者抗HCV IgG的親和力通常較強并能持續存在［1］。在臨床上也會發現抗HCV陽性，但HCV RNA為陰性的背離現象。在初篩抗HCV為反應性的情況下，HCV RNA的PCR檢測結果如果為陰性，并不能證明該樣本為陰性，故無法排除文中抗HCV復檢為陰性是由于試劑或其他原因所致的漏檢。另外，初、復檢同時為反應性的樣本也不一定為真陽性，文中由于方法的局限性，無法對這些樣本進行確證，只能暫時依據HCV RNA檢測結果來區分這些樣本。 國產抗HCV檢測試劑存在一定的漏檢和誤檢現象，直接影響結果的準確判斷。用于HCV感染診斷的試驗結果必須盡可能準確，因為這牽涉到伴隨HCV感染而產生的醫學倫理、法律以及社會學等方面的問題，特別對于血站系統，該檢測結果直接決定該份血液是否能夠安全用于臨床。雖然第三代抗HCV檢測試劑是高靈敏，特異和可重現的，但是仍然沒有能夠排除假反應結果。一方面在低流行區或低危人群中，建立增補試驗或聯合檢測方法，對初篩試驗中呈反應性的樣本進行確證，以控制假陽性率；另一方面，在目前情況下，設置合適的“灰區范圍”，將處于“灰區范圍”的樣本作為可疑樣本（被技術認為陰性卻含有較高OD值讀數的樣本）進行復檢，能減少假陰性結果的產生。建議有條件的血站以核酸檢測方法作為增補試驗，再次進行聯合檢測，能增強發現早期感染（血清陽轉）的機會，把這些獻血者盡早識別出來，以便于通知其本人或對其血清轉化進程加以監測，對控制和預防HCV 的傳播具有重要的意義。歡迎您的光臨，！希望您提出您寶貴的意見，你的意見是我進步的動力。贈語； 如果我們做與不做都會有人笑，如果做不好與做得好還會有人笑，那么我們索性就做得更好，來給人笑吧！ 現在你不玩命的學，以后命玩你。我不知道年少輕狂，我只知道勝者為王。不要做金錢、權利的奴隸；應學會做“金錢、權利”的主人。什么時候離光明最近？那就是你覺得黑暗太黑的時候。最值得欣賞的風景，是自己奮斗的足跡。壓力不是有人比你努力，而是那些比你牛幾倍的人依然比你努力。學習資