臨床技術操作規范病理學分冊_免費下載-資料下載頁

【導讀】業醫師法》精神，結合醫院病理科工作的特點，制定本規范。具有一定規模的病理科，應積極開展教學、培訓病理醫。該標本病理變化性質的判斷和具體疾病的診斷。病理學診斷為臨床醫師。當涉及醫、患間醫療爭議時，相關的病理學診斷報告書具有法。病理學診斷報告書應由具有執業資格的注冊主治醫師以上（含。各醫院可酌情準予條件適宜的高年資病理。科住院醫師試行簽署病理學診斷報告書。為，是有關臨床科室與病理科之間特殊形式的會診。師雙方皆應認真履行各自的義務和承擔相應的責任。六、病理學檢查申請單是臨床醫師向病理醫師發出的會診邀請單。病理學診斷提供重要的參考資料或依據。名、性別、年齡、病史和可能涉及診斷需要的隱私信息）。尊重和保護患者的隱私。患者或患者的授權人應保證其自送檢材的真實。性、完整性和可檢查性。提出的咨詢，必要時應復查有關的標本和切片，并予以答復。情況下，及時、規范地予以剖開，以便充分固定。

　　

【正文】 的通風和消防設施。 ㈢常規切片的手工操作（步驟次序和各步驟的持續時間） 1．水洗：用流水沖洗已經固定的組織塊 30min。 2．脫水（常溫下） （ 1）乙醇－甲醛（ AF）液固定 60~120min （ 2） 80%乙醇 60~120min （ 3） 95%乙醇 Ⅰ 60~120min （ 4） 95%乙醇 Ⅱ 60~120min （ 5）無水乙醇 Ⅰ 60~120min （ 6）無水乙醇 Ⅱ 60~120min （ 7）無水乙醇 Ⅲ 60min ［注意事項］ ① 未經充分固定的組織不得進入脫水程序。 ② 用于脫水的試劑容積應為組織塊總體積的 5～ 10 倍以上。 ③ 自低濃 度乙醇向高濃度乙醇逐級移進脫水。 ④ 脫水試劑應及時過濾、更換（ 500ml 乙醇可用于 500 個組織塊脫水；加入硫酸銅的無水乙醇變藍時，提示需要更換）。 ⑤ 較大組織塊的脫水時間長于較小者，應將兩者分開進行脫水。 ⑥ 組織置于無水乙醇內的時間不宜過長（以免硬化）。 ⑦ 丙酮脫水性能強，會使組織塊過縮、硬脆，不宜用以替代無水乙醇。 3．透明 （ 1）二甲苯 Ⅰ 20min （ 2）二甲苯 Ⅱ 20min （ 3）二甲苯 Ⅲ 20min ［注意事項］ ① 二甲苯的容積應為組織塊總體積的 5～ 10 倍以上。 ② 組織塊在二甲苯中透明的時間不宜過長（以防組織硬、脆），并依不同種類組織及其大小而異；組織呈現棕黃或暗紅色透明即可。 ③ 二甲苯應及時過濾、更換。 ④ 組織經二甲苯適度處理后不顯透明時，常提示該組織的固定或脫水不充分，應查找原因并妥善處理。 4．浸蠟 （ 1）石蠟 Ⅰ （ 45~50℃ ） 60min （ 2）石蠟 Ⅱ （ 56~58℃ ） 60min （ 3）石蠟 Ⅲ （ 56~58℃ ） 60min ［注意事項］ ① 熔化石蠟必須有專人負責，必須在熔蠟箱內或水浴中（ 70 ℃ ）進行，不得用明火加溫。 ② 熔蠟的容積應為組織塊總體積的 5～ 10 倍以上。 ③ 組織塊經二甲苯適度透明后方可轉入浸蠟過程，應盡可能減少將透明后組織塊表面的二甲苯帶入熔蠟中。 ④ 浸蠟時間適宜，過短時浸蠟不充分（組織過軟），過長時組織硬脆。 ⑤ 熔蠟應及時過濾、更換。 5．包埋 （ 1）先將熔化的石蠟傾入包埋模具中，再用加熱的彎曲鈍頭鑷子輕輕夾取已經過浸蠟的組織塊，使組織塊的最大面或被特別指定處的組織面向下埋入熔蠟中；應將組織塊平正地置放 于包埋模具底面的中央處；包埋于同一蠟塊內的多塊細小組織應彼此靠近并位于同一平面上；腔壁、皮膚和黏膜組織必須垂直包埋（立埋）。 （ 2）將與組織塊相關的病理號小條置入包埋模具內熔蠟的一側。 （ 3）待包埋模具內的熔蠟表面凝固后，即將模具移入冷水中加速凝固。 （ 4）從包埋模具中取出凝固的包埋蠟塊（簡稱蠟快），用刀片去除組織塊周圍的過多石蠟（組織塊周圍保留 1~2mm 石蠟為宜）。將包埋蠟塊修整成為規則的正方形或長方形。 （ 5）將病理號小條牢固地烙貼在蠟塊一側（編號應清晰可見）。 （ 6）把修整好的蠟塊烙貼在支持器上，以備 切片。 （ 7）使用包埋機的方法按有關廠商的說明書操作。 （ 8）注意事項 ① 應將組織塊嚴格分件包埋。包埋時一定要首先認真核對組織塊的病理號（包括亞號）、塊數和取材醫師對包埋面的要求，準確地包入相應的病理號小條。發生包埋差錯時，必須立即與取材醫師和病理科當班負責人取得聯系，及時處置。 ② 必須嚴防各種異物污染，勿將無關組織（包括縫線、紙屑或其他異物（尤其是硬質異物）埋入蠟塊內。 ③ 包埋過程要操作迅速，以免組織塊尚未埋妥前熔蠟凝固。 ④ 包埋用的熔蠟應純凈，熔點適宜。浸蠟 Ⅰ 用軟蠟（熔點為 45~50℃ ），浸蠟Ⅱ 、 Ⅲ 和包埋用蠟均用硬蠟（熔點為 56~58℃ ）。 ⑤ 包埋用熔蠟使用前應將先靜置沉淀、過濾。 ⑥ 熔蠟時不得使用明火，以防燃燒。包埋用熔蠟的溫度應 65℃ ；包埋用的鑷子不可加溫過高，以免燙傷組織。 6．切片 （ 1）切片刀或一次性切片刀片必須鋒利。使用切片刀時，必須精心磨備（在低倍顯微鏡下確認刀刃無缺口）；使用一次性切片刀片時，應及時更新。 （ 2）載玻片必須潔凈、光亮。 （ 3）將切片刀或刀片安裝在持刀座上（以 15176。 為宜）。 （ 4）將蠟塊固定于持支持器上，并調整蠟塊和刀刃至適當位置（刀刃與蠟塊表面呈 5176。 夾角） 。 （ 5）細心移動刀座或蠟塊支持器，使蠟塊與刀刃接觸，旋緊刀座和蠟塊支持器。 （ 6）修塊（粗切）：用右手勻速旋轉切片機輪，修切蠟塊表面至包埋其中的組織塊完整地全部切到。修塊粗切片的厚度為 15～ 20μm 。［注意：對于醫囑再次深切片（特別是在原切片中發現了有意義病變而進行的深切片），應盡量少修塊，以盡量好地獲得有關病變的連續性。］ （ 7）調節切片厚度調節器（一般為 4~6μm ），進行切片，切出的蠟片應連續成帶，完整無缺，厚度適宜（ 3～ 5μm ）、均勻，無刀痕、顫痕、皺折、開裂、缺損、松解等。 （ 8）以專用小鑷子輕輕 夾取完整、無刀痕、厚薄均勻的蠟片，放入伸展器的溫水中（ 45℃ 左右），使切片全面展開。［注意：必須水溫適宜、潔凈（尤其是水面）；每切完一個蠟塊后，必須認真清理水面，不得遺留其它病例的組織碎片，以免污染。］ （ 9）將蠟片附貼于涂有蛋白甘油或經 3－氨丙基－三乙氧基硅烷 (3aminopropyltriethoxy silane， APES)處理過的載玻片上（ HE 染色時酌情使用，可省略，必要時）。蠟片應置放在載玻片右（或左） 2/3 處的中央，留出載玻片左（或右） 1/3 的 位置用于貼附標簽。蠟片與載玻片之間無氣泡。 （ 10）必須立即在置放了蠟片的載玻片一端（待貼標簽的一端），用優質記號筆或刻號筆準確、清楚標記其相應的病理號（包括亞號）。［注意：必須確保載玻片上的病理號與相關組織石蠟包埋塊的病理號完全一致，不得錯寫或漏寫病理號。］ （ 11）將置放了蠟片的載玻片呈 45℃ 角斜置片刻；待載玻片上的水分流下 后，將其置于烤箱中烘烤（ 60～ 62℃ ， 30～ 60min），然后即可進行染色。 （ 12）注意事項 ① 組織塊固定、脫水、透明和浸蠟的質量直接影響切片制備。切片過程中遇到的困難首先應注意 從切片前的上述各環節中尋找原因。 ② 切片機的質量是制備優質切片的重要前提。要使用質量好的切片機，規范地切片，精心維護切片機。 ③ 經由內窺鏡、穿刺等獲取的細小組織，應間斷性連續切片多面（一般至少制備 6 張蠟片，必要時制備更多張）。需作特殊染色、免疫組化染色等的病例，可預制蠟片備用。 ④ 切片人員應細心操作，防范被切片刀具割傷。 ㈣常規切片的自動組織處理機操作（步驟次序和各步驟的持續時間，總計需要14 小時） 1．乙醇－甲醛（ AF）固定液 260min 2． 95%乙醇 Ⅰ 260min 3． 95%乙醇 Ⅱ 260min 4．無水乙醇 Ⅰ 60min 5．無水乙醇 Ⅱ 60min 6．二甲苯 Ⅰ 30min 7．二甲苯 Ⅱ 30min 8．石蠟 Ⅰ 30min 9．石蠟 Ⅱ 60min 10．石蠟 Ⅲ 90min 11．包埋 （ 1）手工常規包埋：參見上述的 “ ㈠手工操作 ” 項。 （ 2）用組織包埋機時，按有關廠商說明書的規定操作。 13．切片：參見上述的 “ ㈠手工操作 ” 項。 14．注意事項 （ 1）必須按有關說明書的規定，使用和維護自動組織處理機、包埋機、磨刀機、封蓋玻片機等儀器等。 （ 2）要嚴防因停電、機械故障等造成的組織塊損壞。一旦發生此類事故，必須及時向科主任報告，盡快采取應急措施妥善處置。 （ 3）使用自動組織處理機時： ① 合理設定的運行時間（充分利用夜間）。 ② 固定、脫水的環境溫度不得 30℃ 。 ③ 乙醇、二 甲苯和熔蠟的容積，要大于組織塊總體積的 5～ 10 倍以上，并應經常過濾，保持清潔；應經常檢查試劑的濃度，及時更新。 ④ 對于多量組織塊，可按其大小分批進行處理；小塊組織可適當縮短處理時間。 三、快速石蠟包埋組織切片的制備 ㈠煮沸固定切片法 1．固定：切取大小適宜（厚度 2mm）的組織塊，盡快置入裝有 5~8ml 10%中性4％甲醛的試管中煮沸 1min，然后已入冷水中。 2．脫水 （ 1）將已經煮沸固定的組織塊取出，用刀片將其厚度修切至 ，隨 即置入盛有 5~8 ml 丙酮的試管中，煮沸 2 min，然后將丙酮傾棄。 （ 2）再向該試管中重新加入 5~8 ml 丙酮并煮沸 2min。如此重復 3~4 次。 3．浸蠟：將已經丙酮脫水的組織塊由試管中取出，用吸水紙去除其表面液體，隨即置入 75~80℃ 熔化的石蠟中，待組織塊下沉、不再出現氣泡時（約需30s），即可包埋。 4．包埋、切片和染色。 （ 1）用熱鑷子將預制的蠟塊表面熔化，埋入已經浸蠟的組織塊。 （ 2）待埋入組織塊的蠟塊表面凝固后，即用載玻片輕壓蠟塊表面片刻，使 蠟塊表面平整。 （ 3）將蠟塊置入冰水中，使其變硬。 （ 4）迅速切片，裱片后用吸水紙去除載玻片上的水分。 （ 5）將載玻片用 火焰烘干（勿距火焰太近）。 （ 6）迅速進行 HE 染色。 5．注意事項 （ 1）為了盡量縮短制片時間，必須預先作好有關準備工作，備齊取材用具、試管、固定液、丙酮、酒精燈、火柴（或其他引火器）、包埋用蠟塊、載玻片和染色試劑等，放在固定部位待用。 （ 2）全部制片過程一般在 20~25min 內完成。 （ 3）制片后剩余組織塊應作常規石蠟包埋切片染色，進一步診斷。 （ 4）含脂肪較多的組織，須經多次丙酮處理。 （ 5）用于組織固定、脫水、透明的試劑和浸蠟用的石蠟應及時過濾、更換。 （ 6）丙酮、乙醇、二甲苯等為易燃物，進行上述各 項流程時， 2m 距離內不得存在明火。加溫脫水和浸蠟過程必須應用隔水溫箱，不得使用干烤箱操作。 ㈡超聲波快速處理儀石蠟切片法（參照有關廠商的說明書操作）。 四、冷凍組織切片的制備 ㈠應用恒冷箱切片機制備切片：是目前最適用方法。恒冷箱切片機種類較多，應嚴格按有關廠商的說明書操作。用于切片的標本必須未曾固定。 ㈡應用開放式冷凍切片機制備切片 1．二氧化碳制冷切片 （ 1）將組織塊放在冷凍臺上，滴加 OCT 或羥甲基纖維素液于組織塊周圍（將組織塊包埋），使固定在切片機上的切片刀接近組織塊表面。 （ 2）間斷開放液態二 氧化碳桶的開關，噴凍組織塊和切片刀，使組織塊凍結和切片刀制冷。 （ 3）迅速移動切片刀進行切片：先將組織塊修平，然后調節厚度至 8~12μm 處進行切片。 （ 4）用毛筆將切片展開，貼附于載玻片上，稍干后，置于冷凍切片固定液中固定 1min，隨即進行 HE 染色。也可用毛筆將切片托入水中，再用玻璃彎針將切片移至染色皿中進行染色。 （ 5）組織塊也可先在 4%中性甲醛中煮沸固定 1min，水洗后再行冷凍切片。 2．半導體致冷切片 （ 1）切片刀與持刀器之間要間隔一層云母片或硬紙片。將冷刀致冷器粘在刀面上。 （ 2）將組織冷凍臺安裝在 半導體切片機上。 （ 3）將冷凍臺和切片刀致冷器上的導線連接在控制臺直流電源上（注意：正負電極不可接反）。 （ 4）連接致冷器的冷卻水管并開始放水，然后開啟電源；冷卻水管中的水流量不宜過大，在使用過程不得斷水。 （ 5）調整冷凍溫度調節器，至切片刀和冷凍臺呈現霜凍。 （ 6）將新鮮組織塊或已固定的組織放在冷凍臺中央，滴加水或 OCT，或用水調成糊狀的甲基纖維素于組織塊周圍（將組織塊包埋）。 （ 7）待組織塊冷凍適當后，進行切片。 （ 8）對于未經固定的新鮮組織，用毛筆將制作滿意的切片展平，立即裱貼于蓋玻片或載玻片上，待冷 凍的切片剛要融化時，立即將其置于冷凍切片固定液中固定 1min。對于已經固定的組織塊，可用毛筆將制作滿意的切片托入水中，再用玻璃彎針將切片移至染色皿中進行染色。 （ 9）切片完畢后，先關閉電源，再關閉冷卻水，待冰霜融化后擦干機器，加罩。 3．甲醇致冷切片（按有關廠商的儀器說明書操作）。 4．氯乙烷致冷切片 （ 1）將新鮮的或已經固定的組織塊置于支持器中央，加少許水或 OCT。 （ 2）連續噴射氯乙烷于組織塊上，待組織塊凍結后，改為間歇噴射，使凍結適度，立即切片。使用氯乙烷時應注意防火、防爆。 （ 3）進行組織切片的裱貼 、固定和染色（與上述方法相同）。 ㈢注意事項 1．制作冷凍切片所需的試劑