腫瘤細胞與分化、凋亡一-資料下載頁

　　

【正文】 2 4 8 12 (hr) PChk2 Chk2 βactin 010h 1h 2h 4h 8h 12hRatio of gray valueCHK2PCHK2DADS對 BGC823細胞磷酸化 Chk2表達的影響 DADS誘導 MGC803和 BGC823細胞 ATR和 PATR的表達 0 15 30 60 90 120 (min) PATR（ Ser428） ATR βactin 0123456780m 15m 30m 60m 90m 120mRatio of gray valueATRPATRDADS對 MGC803細胞磷酸化 ATR表達的影響 0 15 30 60 90 120 (min) PATR（ Ser428） ATR βactin 01231 2 3 4 5 6Ratio of gray valueATRPATR圖 27 DADS對 BGC823細胞磷酸化 ATR表達的影響 DADS誘導 BGC823細胞 Chk下游分子 CDC25C、 Cyclin B1的表達 0 12 24 36 48 (hr) CDC25C βactin 01230h 12h 24h 36h 48hRatio of gray valueDADS對 BGC823細胞 Cdc25C磷酸酶表達的影響 0 12 24 36 48 (hr) Cyclin B1 β－ actin 012341 2 3 4 5Ratio of gray value圖 25 DADS對 BGC803細胞 CyclinB1表達的影響 免疫共沉淀檢測 Chk1激酶活性 Chk1 Cdc25C MGC803細胞 BGC823細胞 圖 29 免疫共沉淀 Westernblot分析 MGC803和 BGC823細胞中的 Chk1表達 免疫共沉淀檢測 Chk2激酶活性 Chk2 Cdc25C MGC803細胞 BGC823細胞 免疫共沉淀 Westernblot分析 MGC803和 BGC823細胞中 Chk2的表達 Chk1和 Chk2 基因沉默對 DADS G2/M期阻滯作用 及檢查點激酶通路的影響 1. 實時熒光定量 PCR檢測 RNAi后 Chk1和 Chk2 mRNA表達的改變 2. Chk1和 Chk2 RNAi后 Chk1和 Chk2蛋白表達的改變 3. Chk1 、 Chk2基因沉默后 MTT比色實驗結果 4. 干擾后細胞周期的改變 5. Chk1和 Chk2 RNAi后下游蛋白表達的改變 定量 RTPCR檢測 MGC803細胞 Chk1 mRNA表達的改變 樣品 GAPDH chk1 chk1/GAPDH MGC803 MGC803+vector MGC803+DADS MGC803+DADS+vector 定量 RTPCR檢測 BGC823細胞 Chk1 mRNA表達的改變 樣品 GAPDH chk1 chk1/GAPDH BGC823 BGC823+vector BGC823+DADS BGC823+DADS+vector 定量 RTPCR檢測 MGC803細胞Chk2 mRNA表達的改變 樣品 GAPDH chk2 chk2/GAPDH MGC803 MGC803+vector MGC803+DADS MGC803+DADS+vector 定量 RTPCR檢測 BGC823細胞Chk2 mRNA表達的改變 樣品 GAPDH chk2 chk2/GAPDH BGC823 BGC823+vector BGC823+DADS BGC823+DADS+vector 0102030405060708090Inhibition ratio(%)1 2 3 4chk1 、 chk2 RNAi轉染 MGC803 和 BGC823細胞后其 mRNA表達 2： chk1 RNAi后 MGC803 、 BGC823細胞 chk1表達抑制率 4： chk2 RNAi后 MGC803 、 BGC823細胞 chk2表達抑制率 DADS － ＋ － ＋ － ＋ SiRNA: C Chk1 Chk2 Chk1 Chk2 β－ actin 011 2 3 4 5 6Ratio of gray valueChk1 Chk2* *RNAi MGC803細胞 Chk1和 Chk2 后蛋白表達的改變 DADS － ＋ － ＋ － ＋ SiRNA: C Chk1 Chk2 Chk1 Chk2 β－ actin 0121 2 3 4 5 6Ratio of gray valueChk1 Chk2* *RNAi BGC823細胞 Chk1和 Chk2 后蛋白表達的改變 Chk1 、 Chk2基因沉默后 MTT比色實驗結果 Chk1干擾后 MGC803細胞 96小時的 OD570值 n=12 untransfected empty vectortransfected DADS Chk1 SiRNA Chk1 SiRNA +DADS S Inhibition rate（ %） 38 Chk2干擾后 MGC803細胞 96小時的 OD570值 n=12 untransfected empty vectortransfected DADS Chk2 SiRNA Chk2 SiRNA +DADS Chk1+ Chk2 SiRNA S Inhibition rate（ %） Chk1干擾后 BGC823細胞 96小時的 OD570值 n=12 untransfected empty vectortransfected DADS Chk1 SiRNA Chk1 SiRNA +DADS 0. 41 S Inhibition rate（ %）