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2026-04-22 18:10本頁面

　　

【正文】，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。 TMB經(jīng) HRP作用后，約 40分鐘顯色達(dá)頂峰，隨即逐漸減弱，至 2小時后即可完全消退至無色。比色拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀中。以蒸餾水校零點，測讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔），以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進(jìn)行計算。結(jié)果以光密度（ oplical density， OD），現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（ absorbence， A），兩者含義相同。通常的表示方法是，將吸收波長寫于 A字母的右下角，如 OPD的吸收波長為 492nm，表示方法為 A492nm或 OD492nm。酶標(biāo)比色儀酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，通常指測讀 ELISA光度計。針對固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到，準(zhǔn)確性為177。 1%，重復(fù)性達(dá) %。操作時室溫宜在 1530℃ ，使用前先預(yù)熱儀器 1530分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。測讀 A值時，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如 OPD用 492nm波長。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀。各種酶標(biāo)儀性能有所不同，使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書。 6 結(jié)果判斷定性測定定性測定的結(jié)果判斷作出 “ 有 ” 或 “ 無 ” 的回答，分別用 “ 陽性 ” 、 “ 陰性 ” 表示。在這種半定量測定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗，呈陽性反應(yīng)的最高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。在間接法和夾心法 ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法 ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同，分述于下。：（ cutoff value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù) ()，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。 /陰性對照比值：在實驗條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本（ S）和陰性對照（ N）的 A值后，計算 S/N值。間接法和夾心法（ 2）競爭法因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出 S、 P和 N的吸光值。 a. 陽性判定值法陰性判定值 = NCX+ PCX 陽性 A≤ 陽性判定值陰性 A＞陽性判定值 b. 抑制率法抑制率（ %） = （陰性對照 A值標(biāo)本 A值） 100%/陰性對照陽性抑制率 ≥ 50%為陰性＜ 50% 定量測定 ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法 ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線的值逐點連接，所得曲線一般呈 S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測區(qū)域。 4. ELISA的操作要點嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑O(shè)計，優(yōu)質(zhì)的試劑，正確的操作和良好的儀器是保證 ELISA必要條件。嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。 ELISA應(yīng)用實例飼料中鹽酸克倫特羅的測定飼料中毒素的測定（主要包括黃曲霉毒素，簡曲霉毒素）飼料中有害微生物的快速篩檢（如沙門氏菌）甲胺磷殘留分析甲基對硫磷殘留分析呋喃丹殘留分析 ELISA在飼料安全檢測中的應(yīng)用 ELISA用于農(nóng)藥殘留的檢測河豚毒素植物毒素如罌粟堿、嗎啡、藻類毒素苯并芘主要有除草劑與殺蟲劑兩大類例如殺暝松（ FN ）、甲氟磷酸異已酶（ SOMAN ）、草不綠（ Alachor ）、西維因（ Carbaryl ）、多菌靈及克菌丹（ Captan ）等。農(nóng)藥的檢測： ELISA檢測 “ 非典型肺炎 ” 冠狀病毒 ELISA在結(jié)締組織病早期診斷中的應(yīng)用檢測抗異質(zhì)性胞核核糖蛋白 A2（ hnRNPA2） /類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（ PtA） 33抗體 ELISA在疾病診斷中的作用 ELISA法檢測幽門螺桿菌抗體 ELISA試劑盒商業(yè)資訊 ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫

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