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蛋白質(zhì)組研究技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)

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【正文】 2. 一維 IEF電泳－質(zhì)譜分離鑒定蛋白質(zhì) ? 與質(zhì)譜方法相比， SDSPAGE測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量誤差大，分辨率差，更重要的是，很難獲得翻譯后修飾蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量變化的準(zhǔn)確信息 ? 精確測(cè)定全細(xì)胞蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量 ? 一維 IEF電泳－質(zhì)譜：采用 IPG膠條進(jìn)行等電聚焦電泳， MALDITOFMS對(duì)膠條進(jìn)行表面直接分析。將一向 IEF電泳與準(zhǔn)確、靈敏、高分辨率的相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定技術(shù)相結(jié)合，誤差％％第三節(jié) 高通量蛋白質(zhì)鑒定技術(shù) 一、生物質(zhì)譜技術(shù) 1. 質(zhì)譜技術(shù)：一百多年的歷程，早期的質(zhì)譜技術(shù)分析對(duì)象主要是小分子化合物，質(zhì)量范圍在幾千以下 2. 20世紀(jì) 80年代末期，產(chǎn)生了兩項(xiàng)軟電離質(zhì)譜技術(shù)－ ESI和 MALDITOF，具有高靈敏度（ pmol）和高質(zhì)量檢測(cè)范圍（幾萬(wàn)到幾十萬(wàn) Da） 3. ESI ：采用四級(jí)桿質(zhì)量飛行器，所構(gòu)成的儀器成為電噴霧（四級(jí)桿）質(zhì)譜儀；其特點(diǎn)之一是可以和液相色譜、毛細(xì)管電泳等高效分離手段聯(lián)用，因而可以實(shí)現(xiàn) 復(fù)雜化合物分離與鑒定的聯(lián)機(jī)操作 4. MALDITOF ：常用飛行時(shí)間質(zhì)量分析器，所構(gòu)成的儀器成為基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀；特點(diǎn)是對(duì)鹽和填加物的耐受能力強(qiáng)，且操作簡(jiǎn)單，測(cè)定速度快，易于實(shí)現(xiàn)高通量，譜峰與樣品成分的質(zhì)量有一一對(duì)應(yīng)關(guān)系，圖譜容易解析 5. 離子阱（ ion trap）質(zhì)譜儀和傅立葉變換離子回旋共振（ fourier transform ion cyclotron resonance, FTICR）質(zhì)譜 6. 電噴霧－四極桿－飛行時(shí)間質(zhì)譜儀：大大提高了儀器的分辨率和靈敏度 7. 帶有串連質(zhì)譜功能的 MALDITOF質(zhì)譜儀：引進(jìn)了源后裂解或碰撞誘導(dǎo)解離裝置，可進(jìn)行肽序列測(cè)定二、 2DE膠上蛋白質(zhì)識(shí)別與鑒定技術(shù) 2DE電泳已知蛋白蛋白質(zhì)膠上原位酶切 MALDITOFMS分析肽質(zhì)量指紋譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索蛋白質(zhì)鑒定 ESIMSMS分析蛋白質(zhì)鑒定肽序列標(biāo)簽數(shù)據(jù)庫(kù)檢索蛋白質(zhì)從頭測(cè)序新蛋白已知蛋白易于實(shí)現(xiàn)高通量特異性高，可實(shí)現(xiàn)分離、鑒定一體化操作 2DE膠上蛋白質(zhì)鑒定流程圖 50－ 60％ 20－ 30％ ? MALDITOFMS：優(yōu)點(diǎn)是易于實(shí)現(xiàn)高通量，適合于膠上蛋白質(zhì)的高通量、大規(guī)模識(shí)別與鑒定；但不適合分析蛋白質(zhì)混合樣品或新蛋白，且準(zhǔn)確度要求較高 ?ESIMSMS：優(yōu)點(diǎn)是特異性高，且適合混合樣品的蛋白識(shí)別與鑒定；與液相色譜相連可實(shí)現(xiàn)分離、鑒定一體化操作；但分析速度慢且操作復(fù)雜三、生物質(zhì)譜新技術(shù) 1. 帶 MALDI源的四極桿－飛行時(shí)間質(zhì)譜儀 (MALDI QqTOF) ? 將 MALDI離子源與四極桿－飛行時(shí)間－串連質(zhì)譜儀連接，從而實(shí)現(xiàn)了樣品靶上的同一個(gè)樣品在同一臺(tái)質(zhì)譜儀上的肽質(zhì)量指紋譜分析與肽序列標(biāo)簽分析同時(shí)進(jìn)行。 ? 已經(jīng)成功用于 2DE膠上蛋白質(zhì)的鑒定 2. MALDITOFTOF質(zhì)譜儀 ? 該儀器將 MALDITOF肽質(zhì)量指紋譜分析的高通量與碰撞誘導(dǎo)解離（ collisioninduced dissociation, CID）獲得的豐富碎片信息相結(jié)合，對(duì)同一樣品相進(jìn)行肽質(zhì)量指紋譜分析，接著進(jìn)行串連質(zhì)譜分析，使得在微量樣品水平上對(duì)蛋白質(zhì)的鑒定在數(shù)秒內(nèi)完成四、結(jié)語(yǔ) 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究開(kāi)辟了功能基因組學(xué)研究的新領(lǐng)域。一方面，蛋白質(zhì)組研究為探索生生命的奧妙提供了嶄新的思路和手段；另一方面，蛋白質(zhì)組研究期待著新的技術(shù)方法的突破。隨著基因組學(xué)與生物信息學(xué)技術(shù)的發(fā)展，政府投資與商業(yè)投入的加大，蛋白質(zhì)組學(xué)研究必將在 21世紀(jì)取得突破性的進(jìn)展。

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