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重組dna技術(shù)ppt課件-資料下載頁

2026-04-26 06:36本頁面

　　

【正文】 ation）：是指將重組質(zhì)粒 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。轉(zhuǎn)染（ transfection）：將重組噬菌體 DNA直接引入受體細(xì)胞的過程。轉(zhuǎn)導(dǎo)（ transduction）：重組噬菌體 DNA分子，在體外經(jīng)過包裝成具有感染能力的噬菌體顆粒，再以此噬菌體為載體，將重組 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)的過程，也稱為感染（ infection）。 41 重組體的篩選與鑒定篩選是指通過某些特定方法，從被轉(zhuǎn)化的細(xì)胞群體或基因文庫中，鑒別出真正的陽性重組子的過程。 42 （一）根據(jù)遺傳表型進(jìn)行篩選的方法（ 1）抗生素抗性篩選（ 2） β 半乳糖苷酶系統(tǒng)篩選（二）根據(jù)重組子結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行篩選的方法方法：43（ 1）抗生素抗性篩選 : 大多數(shù)載體均帶有抗生素抗性基因（一）根據(jù)遺傳表型進(jìn)行篩選的方法 :外源基因插入到一個(gè)抗性基因位點(diǎn)，使此種抗生素抗性消失，重組體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌不能在含有這種抗生素的培養(yǎng)基中生長。，保留了抗性基因活性，所轉(zhuǎn)化的細(xì)胞就能在含此種抗生素的培養(yǎng)基中生長 ,未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞則不能生長。44(插入失活法)抗生素抗性篩選45（ 2） β 半乳糖苷酶系統(tǒng)篩選4647（二）根據(jù)重組子結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行篩選的方法（ 1）快速裂解菌落并鑒定分子大小（ 2）內(nèi)切酶酶切圖譜鑒定（ 3）分子雜交（ 4） PCR（ 5）核酸序列測定48原位雜交49外源基因的表達(dá)與分離純化（一）原核表達(dá)體系（）利用原核細(xì)胞（大腸桿菌為主）作受體細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達(dá)外源目的基因。 50（二）真核表達(dá)體系（酵母、昆蟲、哺乳類動物細(xì)胞）利用真核細(xì)胞作為受體細(xì)胞，誘導(dǎo)表達(dá)外源基因51（ 1）分離：提取和獲得目的基因和載體（ 2）切割：分別對目的基因和載體 DNA 酶切；（ 3）連接：目的基因與載體連接，形成新的重組 DNA分子；（ 4）轉(zhuǎn) 化：用重組 DNA分子轉(zhuǎn)化受體細(xì) 胞；（ 5）篩選：篩選轉(zhuǎn)化成功的細(xì)胞克隆（ 6）表達(dá)：培養(yǎng)獲得外源基因的細(xì)胞或生物體，獲得所需的遺傳性狀或表達(dá)出所需要的產(chǎn)物。小結(jié)：52第六節(jié) 重組 DNA技術(shù)的在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用（自學(xué)）53謝謝！

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