dna多態性分型技術四川大學講義-資料下載頁

2026-04-28 18:05本頁面

　　

【正文】析技術 (AFLP) ? 隨機擴增多態性 DNA分析技術 (RAPD) ? 細菌基因組重復序列 PCR技術 (repPCR) ? 脈沖場凝膠電泳 (PFGE) 。細菌基因組重復序列 PCR技術repetitiveelement PCR, repPCR —— 一種基于 PCR的 DNA標記技術 repPCR原理 repPCR技術是利用基因組中廣泛分布的短重復序列（ repetitive sequences)為引物進行 PCR擴增，通過對 PCR產物的電泳結果進行比較，來分析菌株間基因組存在的差異。 repPCR短重復序列目前研究最多、最常用的細菌基因組短重復序列有：基因外重復回文序列（ Repetitive Intergenic Palindrome, REP) 腸細菌基因間共有重復序列（ Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus, ERIC) repPCR短重復序列兩者的共同特征是它們在細菌基因組中存在著菌株、種、屬水平上的分布和拷貝數量的差異，而序列本身在進化過程中又具有較強的保守性。基于這兩種短重復序列的 PCR就成為repPCR的 2個重要的技術 ? REPPCR ? ERICPCR 兩種短重復序列的特點及功能 REP序列基因外重復回文序列（ REP）又稱回文單位，其結構特點是回文性質，其轉錄的 mRNA有形成莖環（ stemloop）結構的潛能。 REP家族序列由 38bp構成，含有 6個非常保守的位點及 5bp構成的位于非常保守的回文臂之間的保守環。 REP家族序列廣泛分布在大腸埃希菌和沙門菌基因組內。 REP序列可以單獨出現或增加為 4個串聯的重復單位。在，存在 500到 1000個的 REP串聯重復單位，在沙門菌上 REP串聯重復單位約占基因組的 1%。 REP序列的功能：轉錄終止作用；穩定 mRNA；在體內染色體區段的組織作用 repPCRREPPCR技術根據 REP這段高度保守的重復序列設計引物，擴增兩段 REP之間的片段，擴增產物的數量和片段長短的不同就直接反映了基因組 DNA的差異，從而可對菌株進行分型和同源性分析，這就是 repPCR技術中的 REPPCR技術。 ERIC序列腸細菌基因間共有重復序列（ ERIC）長約 126bp，其中包含幾個反向重復序列，具有非常保守的中央倒置重復區，轉錄后的 mRNA形成莖環結構。當莖環結構中位于莖部位的一個堿基發生改變時，與其相對應的堿基也要發生相應的改變，從而保證二級結構的穩定。 ERIC序列的功能目前還不太清楚，在一些研究中， ERIC被認為： ? 可能有助于相鄰基因的表達 ? 也可能與細菌基因組局部區域的組織有關 ? 或認為位于基因 3’末端的 ERIC可防止外切核酸酶對基因 3’末端的降解 ERIC序列的功能依據 ERIC重復序列設計引物，對細菌基因組DNA進行擴增，可產生 DNA指紋圖譜。在一定范圍內，DNA遷延帶的大小和多少代表著此重復序列間的距離和重復次數，因此，基因組 DNA的差異可清晰地顯示在指紋圖譜上。這就叫 repPCR技術的 ERICPCR技術。 repPCRERICPCR技術 DNA模板提取設計引物 PCR擴增瓊脂糖凝膠電泳結果分析 repPCR操作流程 repPCR應用在李斯特菌種、株鑒定中的應用在腸桿菌科細菌鑒定、分類中的應用在其他菌株分類和鑒定中的應用討論 1. 每種分析方法的優缺點 2. 請列出下段基因在 AFLP技術中所使用的接頭和引物 ,并詳細列出連接示意圖 5’GGGCCCGAATTC3’ 3’CCCGGGCTTAAG5’ Thanks ！

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