脂質體制備技術ppt課件-資料下載頁

　　

【正文】 鏈，與脂質體連接最牢，保護作用最強，與 GMI相比， PEGDSPE除用量較少外，其優點還表現在：易于合成，無毒， 無免疫原性，能使粒徑范圍較寬的脂質體循環延長，同時， DSPE PEG適用于與高或低溫相轉變的磷脂配伍，而 GMI只適用于高溫相 轉變磷脂。 4） PEG鏈長和濃度 隨 PEG磷脂酰乙醇胺濃度增加， PEG鏈加長，其抑制脂質體凝 集程度也增大。在 10mol%時， PEG750磷脂酰乙醇胺， PEG2022 磷脂酰乙醇胺， PEG5000磷脂酰乙醇胺對脂質體凝集抑制程度分 別為 14%、 55%和 100%。當濃度處于 010mol%時， PEG750磷脂酰 乙醇胺抑制 RES攝取的作用呈線性增加，半衰期呈線性延長；而對 PEG2022磷脂酰乙醇胺和 PEG5000磷脂酰乙醇胺而言，當濃度增 加到 5mol%時，這種抑制作用達到坪期。脂質體凝聚結構從層狀轉 變到膠束狀會經歷一個雙層平盤中間態，一旦轉變為開放結構，其 藥物包裹能力喪失。因此摻入到脂質體中的 PEG脂質復合物的上 限取決于形成雙層平盤的濃度，而不是混合膠束形成的濃度。該 濃度受 PEG鏈長和磷脂鏈長影響，而磷脂飽和度和膽固醇的存在 與否并不影響。 所以目前為止最常用的衍生化脂材料是 PEG衍生化的二硬脂 酰磷脂酰乙醇胺（ PEGDSPE）， 常用量 510%mol， 大于 20%雙 分子層不穩定。 三、制備方法 對于第一類長循環脂質體，制備與普通脂質體相同；而第二 類 空間穩定脂質體則有： 常規法 將衍生化脂材料與普通脂材料混合或共溶于溶劑中，按脂質體 制備方法，如逆相蒸發法等進行，最為常用。 摻入法 將制成的脂質體與衍生化脂材料混合，溫育而成。 優點：衍生脂分子主要定位于脂雙分子層外層，避免了對內部 空間的占用，實際包封體積大。 缺點： 1）增加操作步驟 2）衍生脂負載量無保證 偶聯法 將制成的脂質體與親水性高分子化學偶聯而成。 優點：同上，同時可通過控制反應來控制負載量 缺點： 1）操作復雜 2）適用范圍窄，若藥物可參與反應，使用不便 四、現狀與進展 （一）長循環脂質體的靶向給藥 靶向給藥的概念是本世紀初由 Ehrlich提出的，主要是為了提 高藥物在體內的選擇性并降低毒副作用。研究對象主要是抗癌藥 等細胞毒性藥物。至今，圍繞這一目標所取得的進展不大，主要 集中于長循環藥物傳輸系統方面。長循環脂質體適于靶向治療應 用，特別是它能選擇性地趨向腫瘤組織并保持較高的藥物濃度 （大于注射劑量的 10%），使得這種類型脂質體在治療癌癥方面應 用前景廣闊。它在循環中的半衰期可達幾十小時，腫瘤組織生長 時，其內部會生長出新的血管，并且可以通過血管壁上固有的孔 隙為腫瘤組織提供其生長所需的氧和氮。長循環脂質體被吸收進 入腫瘤組織機制與以下兩個因素有關： 1）在腫瘤血管生成過程中其滲透性的增加使長循環脂質體能從毛 細血管末端滲漏出來，并集中于腫瘤組織的內部間隙。 2）長循環脂質體與普通脂質體相比具有血管滲透系數增加的特性， 使得它能更容易透過毛細血管，然后可能通過細胞間的途徑，到達 腫瘤細胞間隙。長循環脂質體能集中于感染部位的能力可能是在疾 病過程中感染組織生長時，毛細血管滲透性增加的結果。在人體內 的藥動學試驗表明，長循環脂質體與游離藥物或普通脂質體相比具 有更小的血漿清除率、表觀分布容積以及更大的藥 時曲線下面積， 而且所包封的藥物在人體內的半衰期達 45小時。 當前進展集中于結合其它脂質體類型的研究，主要有： 1）長循環免疫脂質體 長循環脂質體終究屬于被動靶向制劑， 在某些情況下，它并不會特別有效，例如，根除循環系統中的 白血病細胞或轉移到血液或淋巴系統中的癌細胞；因此需要主 動靶向的免疫脂質體（ immunoliposome)。 但和其他抗體介導 的常規靶向給藥制劑一樣，普通免疫脂質體在體內無效，這主 要是因為普通脂質體在體內能很快被單核吞噬細胞系統吞噬，表 面結合抗體的普通免疫脂質體因其免疫激活作用進一步增強吞噬 而導致其失效。所以要實現脂質體的體內特異性靶向，開發長循 環的空間穩定脂質體是必要的。空間穩定的免疫脂質體（ sterically Stabilized immunoliposome,Simmunoliposome)是一種表面結合有 特異抗體的空間穩定脂質體，可在循環中長時間存在使得其有充 分的機會尋找靶位并與之結合而進一步提高治療指數。 Allen等制 備了阿霉素靶向脂質體，在鼠體內較非靶向脂質體對人類 B型淋 巴瘤更有效。在抗體和 PEG鏈同時結合在脂質體表面的情況下， 使用高分子量的 PEG（ 5000Da） 時，空間位阻使抗體與靶位的結 合受到阻礙；而使用低分子質量的 PEG（ 如 750Da)時，將會使脂 質體在循環中的半衰期變短；中等分子量的 PEG則可兼顧靶向性 和長循環性，但對于小分子配體如葉酸則難以奏效。從 1993年開 始，一種新的結合技術使抗體或配體結合到脂質體表面上的 PEG 鏈的末端上，而避免了 PEG鏈對靶位識別的干擾。 Blume等使用 這種技術合成了 PEGDSPE的羧基衍生物（ COOHPEGDSPE）， 將一種蛋白質（胞質素），結合到 PEG的末端，體內試驗證實， 脂質體仍保持著長循環性，而且對靶體纖維蛋白的結合能力沒有 變化；用類似方法， Zalipsky合成了 PEGDSPE的酰肼衍生物， Maruyama合成了 PEGDSPE的馬來酰亞胺衍生物（ MalPEGDSPE）， 將抗體結合到脂質體 PEG的末端，同樣具有長循環性和靶向識別能 力。為減小免疫原性，近年采用所謂“小型化抗體”，即去除 Fc段的 Fab片段，與抗原親和力無明顯下降。 2） 長循環 PH敏感脂質體 脂質體包封的藥物若經內吞進入溶酶 體，則不易進入胞漿，產生作用， AdlakhaHutcheon等制備了米托 蒽醌 PFV（ Programmable Fusogenic Vesicles）， 到達低 PH的腫瘤 部位后，二油酰磷脂酰乙醇胺無法穩定地以雙分子層存在，脂質體 解體，藥物爆發性釋放；動物模型實驗表明其療效優于普通長循環 脂質體。 （ 二）衍生材料的發展和長循環脂質體的推廣應用 研究證明，磷脂酰乙醇胺聚甲基 /乙基唑啉衍生物與磷脂酰 乙醇胺聚乙二醇衍生物作用相當；一種稱為 Fleximer的聚合物也與 PEG相當。然而可高比例使用或選擇性降解的衍生材料并未見于報 道。脾臟攝取作用主要是與粒徑相關的濾過機制，而肝臟攝取則主 要受各類受體介導；開發可大比例使用的衍生脂材料，有助于實 現特異性的脾靶向，并可制備更大粒徑的長循環脂質體。長循環 脂質體應用于基因治療，可保護治療基因和反義核苷酸免受血液 中的酶解和內皮網狀系統的破壞，降低陽離子脂質的組織毒性； 但到達靶位后，表面的親水性高分子層不利于脂質體與靶細胞的 融合，從而妨礙治療基因的表達和反義核苷酸對目標基因的阻斷； 開發可選擇性降解的衍生脂材料，有助于實現高效的非病毒介導 基因治療和更精確的靶向給藥。 現在， SEQUUS公司的阿霉素隱形脂質體 Doxil和 NEXSTAR 公司的柔紅霉素長循環脂質體 DaunoXome以液體制劑形式獲得 FDA 最后批準，應用于愛滋病（ HIV） 并發的難治性卡波濟氏肉瘤（ KS） ； NEXSTAR公司的血管造影脂質體 Indium獲得 FDA最后批準；美 國脂質體公司的阿霉素長循環脂質體 TLCD99已在歐洲得最終批準 用于乳腺癌治療。人們有理由相信，隨著研究的進一步深入，必 將會有更多的長循環脂質體制劑投入臨床。 中藥脂質體制備的研究進展 ? 1 中藥脂質體的制備方法 ? ? 紫杉醇和人參皂苷脂質體的制備 ? －超聲波分散法 ? 大黃素納米脂質體，黃連素脂質體，豬苓多糖脂質體的制備 ? ? 黃芪多糖脂質體和高三尖脂堿多相脂質體的制備 備蓖麻毒素脂質體 駱駝蓬總堿和丹參酮脂質體 唐松草新堿脂質體、雷公藤內酯酮多相脂質體、去氫駱駝蓬堿脂質體和小檗堿脂質體 補骨脂素脂質體、香菇多糖脂質體、天麻素脂質體、冬蟲夏草多糖脂質體和紫杉醇磁性長循環脂質體。 制備高三尖杉酯堿脂質體 丹參酮前脂質體 制備漢防己甲素脂質體 3中藥脂質體的應用 、抗病毒藥物 4評價與展望