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sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳page測(cè)定蛋白質(zhì)分子量-資料下載頁(yè)

2026-07-08 17:03本頁(yè)面

　　

【正文】配好濃縮膠 ,連續(xù)平穩(wěn)加入濃縮膠至離邊緣 5mm處 ,迅速插入樣梳 ,靜置 40分鐘 . ※ 樣梳需一次平穩(wěn)插入 ,梳口處不得有氣泡 ,梳底需水平 . 四 . 實(shí)驗(yàn)過(guò)程 ,在上槽內(nèi)加入緩沖液 ,沒(méi)過(guò)鋸齒時(shí)可拆去底端的瓊脂糖 . ※ 要使鋸齒孔內(nèi)的氣泡全部排出 ,否則會(huì)影響加樣效果 . 加樣三個(gè)。（ 1）取 10181。l標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶解液于 EP管內(nèi)，再加入 10181。l 2倍樣品緩沖液，上樣量為 20181。l。（ 2）取 10181。l樣品 1溶液，再加入 10181。l 2倍樣品緩沖液，上樣量分別為 5181。l 和 10181。l。 ,加樣前 ,樣品在沸水中加熱 3分鐘，去掉亞穩(wěn)態(tài)聚合。 ※ 注射器不可過(guò)低 ,以防刺破膠體 ,也不可過(guò)高 ,在樣下沉?xí)r會(huì)發(fā)生擴(kuò)散 . ※ 為避免邊緣效應(yīng) ,最好選用中部的孔注樣 . 四 . 實(shí)驗(yàn)過(guò)程，接通電源，進(jìn)行電泳，開(kāi)始電流恒定在 10mA，當(dāng)進(jìn)入分離膠后改為 20mA，溴酚藍(lán)距凝膠邊緣約 5mm時(shí)，停止電泳。：電泳結(jié)束后，撬開(kāi)玻璃板，將凝膠板做好標(biāo)記后放在大培養(yǎng)皿內(nèi)，加入染色液，染色 1小時(shí)左右。：染色后的凝膠板用蒸餾水漂洗數(shù)次，再用脫色液脫色，直到蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰。 ※ 剝膠時(shí)要小心 ,保持膠完好無(wú)損 ,染色要充分 . . 。五 .分析計(jì)算繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：按下式計(jì)算相對(duì)遷移率：以每個(gè)蛋白標(biāo)準(zhǔn)的分子量對(duì)數(shù)對(duì)它的相對(duì)遷移率作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線，量出未知蛋白的遷移率即可測(cè)出其分于量，這樣的標(biāo)難曲線只對(duì)同一塊凝膠上的樣品的分子量測(cè)定才具有可靠性。 = 蛋白樣品距加樣端遷移距離（ c m ）溴酚藍(lán) 區(qū) 帶中心距加樣端距離（ c m ）相對(duì) 遷移率六 .思考題 ? 在不連續(xù)體系 SDSPAGE中 ,當(dāng)分離膠加完后 ,需在其上加一層水 ,為什么 ? ? 電極緩沖液中甘氨酸的作用 ? ? 在不連續(xù)體系 SDSPAGE中 ,分離膠與濃縮膠中均含有 TEMED和 AP,試述其作用 ? ? 樣品液為何在加樣前需在沸水中加熱幾分鐘 ?

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