3-第三章-資料下載頁

　　

【正文】 NA損傷 。 小鼠胚胎肝細胞經不同濃度阿霉素處理后 DNA損傷情況 對照組 100ng/ml阿霉素 200ng/ml阿霉素 （一）免疫細胞化學 immunocytochemistry 根據免疫學原理，利用抗體同特定抗原專一結合，對抗原進行定位測定的技術。常用的標記物有熒光素和酶。 免疫熒光法 （ immunofluorescent technique） ：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素、羅丹明等。 酶標免疫法 （ enzymelabeled antibody method） ：常用的酶有辣根過氧化物酶，酶與底物發生反應后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。 七、免疫學方法對細胞組分的分析 （二）免疫電鏡技術 Gold particles coated with protein A are used to detect an antibodybound protein by transmission electron microscopy. （三）免疫印跡 ——Western blotting 技術 八、其它生化分析方法 ——X射線晶體衍射 ——電泳、層析、色譜等 第三節 細胞培養及細胞工程 一、細胞培養 （一）動物細胞培養 群體培養 （ mass culture） ：將含有一定數量細胞的懸液置于培養瓶中，讓細胞貼壁生長，匯合（ confluence） 后形成均勻的單細胞層； 克隆培養 （ clonal culture） ：培養高度稀釋的細胞懸液，細胞貼壁生長，每一個細胞形成一個細胞集落，稱為克隆。 Population cell culture Cloning cell culture 原代培養（ primary culture） ：即培養直接來自動物機體的細胞群，將細胞從一個培養瓶轉移到另外一個培養瓶稱為傳代或傳代培養（ Passage）。 細胞系（ cell line） ：具有特定生物學與遺傳學特征，且能在體外穩定永久生生長的細胞群體。通?？蓙碜阅[瘤組織的細胞群或培養中發生突變或轉化的細胞。 有限細胞系 永生化細胞系 細胞株（ cell strain） ：從原代培養細胞群中篩選出的具有特定性質或標志的細胞群。 常用的幾種細胞系 （二）植物細胞培養 1. 外植體培養： 誘發產生愈傷組織。用于研究植物的生長發育、分化和變異；進行無性繁殖；制取代謝產物。 2. 懸浮細胞培養： 適合于進行產業化大規模細胞培養，制取植物代謝產物。 3. 原生質體培養： 培養脫壁后的細胞，特點： – ① 比較容易攝取外來的遺傳物質，如 DNA； – ② 便于進行細胞融合，形成雜交細胞； – ③ 適宜條件下可產生細胞壁，經誘導分化成完整植株。 4. 單倍體培養： 通過花藥或花粉培養可獲得單倍體植株。 二、細胞工程 （一）細胞融合 通過培養和介導，兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程稱為 細胞融合（ cell fusion）或細胞雜交。 同核體 ：相同基因型的細胞融合而成。 異核體 ：不同基因型的細胞融合而成。 自發融合 ：同種細胞在培養過程中自發合并的現象。 誘發融合 ：異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合。 誘導細胞融合的方法 ：生物方法（仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒）、化學方法（聚乙二醇 PEG）、物理方法（電擊和激光）。 （二）單克隆抗體技術 正常淋巴細胞（如小鼠脾細胞）具有分泌抗體的能力，但不能長期培養，瘤細胞（如骨髓瘤）可以在體外長期培養，但不分泌抗體。于是英國人Kohler和 Milstein 1975將兩種細胞雜交而發明了單克隆抗體技術，獲 1984年諾貝爾獎。 （三）顯微注射技術 尼康 NT88NE顯微操作 /注射儀 顯微操作技術（ micromanipulation technique）是指在高倍復式顯微鏡下，利用顯微操作器（ micromanipulator）進行細胞或早期胚胎操作的一種方法。顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內移動的機械裝置。 顯微操作技術包括細胞核移植、顯微注射、嵌合體技術、胚胎移植以及顯微切割等。細胞核移植技術已有幾十年的歷史， Gordon等人（ 1962）對非洲爪蟾進行核移植獲得成功。我國著名學者童第周等在魚類細胞核移植方面進行了許多工作，并取得了豐碩成果。 第四節 模式生物 由于基因在進化上的保守性和遺傳密碼的通用性，從一種實驗生物得到的有關基因性質或功能方面的信息通常也適用于其他生物。 模式生物通常具有個體小、容易培養、操作簡單、生長繁殖快等特點。 思考題 ?名詞解釋： 激光共聚焦顯微鏡 熒光漂白恢復技術 熒光能量共振轉移技術 冷凍蝕刻技術 電鏡負染技術 透射電子顯微鏡 顯微分光光度術 原代培養 克隆培養 細胞系 細胞株 原生質體 模式生物 ?簡述生物學研究的一般策略路線。 ?決定顯微鏡分辨率的參數有哪些？提高顯微鏡分辨率的途徑有哪些？ ?免疫熒光顯微術的原理與應用。 ?流式細胞技術的原理及應用。 ?透射電鏡及掃描電鏡技術的原理及成像特點。