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2026-07-26 15:15本頁面

　　

【正文】在培養瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶，細胞才能繼續生長。這一過程就叫傳代。傳代培養可獲得大量細胞供實驗所需。傳代要在嚴格的無菌條件下進行，每一步都需要認真仔細的無菌操作。原代培養細胞在瓶壁匯合后，需進行分離再培養，否則會因細胞密度過大，或生存空間不足、營養不夠導致細胞衰老、停止生長甚至死亡。細胞的再培養，即將原代培養瓶內的細胞分離、稀釋、接種到新培養瓶|內繼續擴增培養。原代培養的首次傳代稱為第二代，是建立細胞系的關鍵時期。首次傳代時，細胞接種數量要多，使細胞盡快適應新環境，有利于二細胞的生存和增殖。通常，原代細胞按l：2分種傳代。生長快的細胞系(株)按l：4分種傳代。根據細胞生長特點，傳代方法有三種：懸浮生長細胞傳代；半懸浮生長細胞傳代；貼壁生長細胞傳代。實驗材料材料原代培養的細胞（肝或腎或脾細胞）儀器與用具二氧化碳培養箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、移液槍、酒精燈。試劑培養液，Hanks液，胰蛋白酶液實驗步驟，一般經過7d左右可形成致密單層細胞。，用1 ml Hanks液洗一遍(若需收集分裂細胞，則輕輕振動培養瓶。將貼壁疏松的有絲分裂球形細胞振人培養液內，最后移入離心管中）。 ml胰蛋白酶液，翻轉培養瓶，使消化液浸泡細胞面。30s后，立即終止消化。終止消化的方法為：加培養液，用吸管頭輕輕地、有序地吹打瓶壁細胞(從瓶底到瓶口，從瓶的一側到另一側，注意吹打邊角細胞)，細胞從支持物上脫落，并彼此分離懸浮于水中，液體混濁。，37℃5% CO2培養箱中培養。

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