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2026-07-27 00:27本頁面

　　

【正文】 KD，含有4個或5個亞基，主要負責染色體DNA的復制。DNA聚合酶β，分子量為45KD，僅含有一條鏈，主要作用是修復核內DNA。第三種聚合酶γ，分子量為140KD，存在于線粒體內，負責催化線粒體DNA的復制。最近從兔的骨髓細胞質中分離到一種新的DNA聚合酶，這種酶與上述真核生物的DNA聚合酶不同，而與原核生物的聚合酶類似，具有339。→539。核酸外切酶活性，稱為DNA聚合酶δ。另外，從酵母、原蟲等低真核生物中分離到一些DNA聚合酶。一般來說，這些低等生物都沒有低分子量的DNA聚合酶β，而且與原核生物的DNA聚合酶相似，有339。→539。外切酶活性。實驗室常用的耐熱DNA聚合酶　　耐熱DNA聚合酶多應用在PCR技術中。各種耐熱DNA聚合酶均具有539。339。聚合酶活性，但不一定具有339。539。和539。339。的外切酶活性。339。539。外切酶活性可以消除錯配，切平末端；539。339。外切酶活性可以消除合成障礙。由于上述這些不同，可以將耐熱DNA聚合酶分為三類：　　一、普通耐熱DNA聚合酶　　Taq DNA 聚合酶　　由一種水生棲熱菌yT1株分離提取出，是發現的耐熱DNA聚合酶中活性最高的一種，達200,000單位/mg。具有539。339。外切酶活性，但不具有339。539。外切酶活性，因而在合成中對某些單核苷酸錯配沒有校正功能。　　TaqDNA聚合酶還要具有非模板依賴性活性，可將PCR雙鏈產物的每一條鏈339。加入單核苷酸尾，故可使PCR產物具有339。突出的單A核苷酸尾；另一方面，在僅有dTTP存在時，它可將平端的質粒的339。端加入單T核苷酸尾，產生339。端突出的單T核苷酸尾。應用這一特性，可實現PCR產物的TA克隆法。　　Tth DNA 聚合酶　　從Thermus thermophilus HB8中提取而得，改酶在高溫和MnCl2條件下，能有效地逆轉錄RNA；當加入Mg2+后，該酶的聚合活性大大增加，從而使cDNA合成與擴增可用一種酶催化。　　二、高保真DNA聚合酶　　pfu DNA 聚合酶　　是從Pyrococcus furiosis中精制而成的高保真耐高溫DNA聚合酶，它不具有539。339。外切酶活性，但具有339。539。外切酶活性，可校正PCR擴增過程中產生的錯誤，使產物的堿基錯配率極低。PCR產物為平端，無339。端突出的單A核苷酸。　　Vent DNA 聚合酶　　改酶是從Litoralis棲熱球菌中分離出的，不具有539。339。外切酶活性，但具有339。539。外切酶活性，可以去除錯配的堿基，具有校對功能。　　三、DNA序列測定中應用的耐熱DNA聚合酶　　Promega公司測序級TaqDNA聚合酶　　是在TaqDNA聚合酶的基礎上對它進行修飾，去除539。339。外切酶活性，保證測序記過的高度準確性，可產生強度均一的測序條帶，背景清晰。　　Bca Best DNA 聚合酶　　從Bacillus Caldotenax YTG菌株中提純，并使其539。339。外切酶活性缺失的DNA聚合酶。它的伸長性能優越；可抑制DNA二級結構形成，可以得到均一的DNA測序帶。　　Sac DNA 聚合酶　　從酸熱浴流化裂片菌中分離，無339。539。外切酶活性，可用于DNA測序，但測序反應中ddNTP/dNTP的比率要高。

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