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2026-07-27 02:34本頁面

　　

【正文】 HBsAg陽性對照。 HBsAg陰性對照。洗滌液 (濃縮液 )。顯色劑 A、 B。終止液（ 2 mol/L H2SO4）。 2．微量加樣器，混合振蕩器，酶標測定儀，恒溫箱，吸水紙，蒸餾水等。【實驗方法】 1．配液濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水 25倍稀釋使用。 2．編號將微孔條固定于支架，按序編號。 3．加樣分別用加樣器加待檢血清和陰、陽性對照 50 μ1（ 1滴）于相應孔中，設空白對照孔（加 50 μ1洗滌液）。 4．加酶除空白對照外，每孔加酶聯試劑 50 μl（ 1滴）。 5．溫育振蕩混勻，置 37℃ 30 min后取出。 6．洗滌甩去孔內液體，扣干，用洗滌液注滿各孔，靜置2 s，甩干，重復 5次后拍干。 7．顯色每孔加顯色劑 A、 B各 50 μl（ 1滴）振蕩混勻，37℃ 暗置 15 min。【實驗結果】 1．目測在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯藍色者為陽性，無色者為陰性。 2．酶標儀檢測每孔加終止液 50 μl（ 1滴）混勻，用酶標儀 450 nm波長測各孔 A值。計算 P/N值：結果判斷： P/N值 ≥，＜陰性（陰性對照孔 A值小于）。值陰性對照孔值標本孔值AANP ?/【注意事項】 1．試劑盒應于 4℃ 存放，在有效期內使用。 2．微孔條須密封防潮，從冷藏環境中取出時 ,應在室溫中平衡至潮氣盡干后方可開封啟用，余者及時封存。 3．滴加試劑前應將瓶搖勻，使液體混勻。滴加時瓶身應保持垂直，以使滴量準確，注意勿將試劑滴在孔壁上。 4．洗滌時各孔均須加滿，防止孔口內有游離酶未能洗凈。 5．待測標本不可用 NaN3防腐。所有樣品都應按傳染源處理。 ELISA競爭法檢測抗 HBc 【實驗目的】 1．熟悉 ELISA的原理、方法。 2．了解免疫標記技術的原理。【實驗原理】采用基因工程重組 HBcAg包被反應板，加入待測標本，同時加入抗 HBcHRP，與抗原形成競爭結合，如待測標本中抗 HBc含量高，則抗 HBcHRP與 HBcAg結合少，加入 TMB底物時顯色淡，反之則顯色深。 ELISA 【實驗材料】 1．乙肝病毒核心抗體酶聯免疫診斷試劑盒。（ 1）預包被微孔條（預包被純化乙肝核心抗原）。（ 2）酶聯試劑（用 HRP標記特異性乙肝核心抗體）。（ 3）抗 HBc陽性對照。（ 4）抗 HBc陰性對照。（ 5）洗滌液（濃縮液）。（ 6）顯色劑 A、 B。（ 7）終止液（ 2 mol/L H2SO4）。 2．微量加樣器，振蕩器，酶標儀，恒溫箱，吸水紙，蒸餾水，生理鹽水等。【實驗方法】 1．配液濃縮洗滌液用蒸餾水 25倍稀釋使用。 2．樣品稀釋將待測血清樣品用生理鹽水 1:30稀釋后檢測。 3．編號將微孔條固定于支架，按序編號。 4．加樣分別用加樣器加已稀釋的待檢血清和陰、陽性對照 100 μl（ 2滴）于相應孔中，設空白對照（加50 μl洗滌液）。 5．加酶除空白對照外，每孔加酶聯試劑 50 μl（ 1滴）。 6．溫育振蕩混勻，置 37℃ 30 min后取出。 7．洗滌甩去孔內液體，扣干，用洗滌液注滿各孔，靜置 5 s，甩干，重復 5次后拍干。 8．顯色每孔加顯色劑 A、 B各 50 μl（ 1滴），混勻， 37℃ 溫育 15 min。【實驗結果】 1．目測在白色背景下觀察各孔顯色情況，無色或顯色強度與陽性對照相近者，判為抗 HBc陽性，顯色強度接近或深于陰性對照孔者，判為抗 HBc陰性。 2．酶標儀檢測每孔加終止液 50 μl（ 1滴），混勻，用酶標儀（ 450 nm波長）測定各孔 A值。計算 P/N值：結果判斷： P/N≤ HBc陽性， P/N＞ HBc陰性。值陰性對照孔值標本孔值AANP ?/【注意事項】同 HBsAg法定的注意事項。【實驗思考】 1．競爭法能用于檢測一般的抗原嗎？ 2．待測標本顯色強度愈深是否意味著抗體濃度愈高？

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