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微生物學目的與要求內容(已修改)

2026-04-14 03:30 本頁面

　

【正文】 . . . . .實驗十病毒的形態學診斷、培養方法和血清學試驗目的（一）觀察病毒包涵體，并掌握其診斷意義。（二）掌握病毒的形態并了解病毒包膜的獲得。（三）了解病毒培養的三種方法。（四）掌握病毒學中主要血清學反應的原理（五）熟悉病毒血凝抑制試驗的測定過程內容（一）病毒的形態學診斷1. 病毒的電鏡照片（示教）2. 狂犬病毒包涵體（示教）3. 麻疹病毒包涵體（示教）（二）病毒的培養法（錄像） 1. 病毒的動物接種法 2. 病毒雞胚培養法 3. 病毒的組織培養法（三）血凝抑制試驗（操作）一、病毒的形態學診斷病毒形態學研究方法可分為兩種：一種是應用電子顯微鏡技術，觀察其大小，形態及排列特征，以幫助診斷；另一種是應用光學顯微鏡通過涂片染色或切片染色，觀察包涵體。病毒感染細胞所產生的包涵體，其特征基本是固定的，故對病毒性疾病的診斷具有一定價值。【方法】（一）病毒的電鏡照片（示教）觀察腺病毒、皰疹病毒的電鏡照片，注意其形態結構、大小、排列、及其包膜的形成。（二）狂犬病病毒內基（Negri）包涵體（示教）用高倍鏡或油鏡觀察經HE（蘇木紫伊紅染色）染色的死于狂犬病的犬腦組織切片，注意包涵體在細胞內的形態、位置及染色性。（三）麻疹病毒包涵體（示教）用高倍鏡或油鏡觀察經麻疹病毒培養后，HE染色的人胚或羊膜細胞標本片，注意包涵體在細胞內的位置、形態、染色性以及細胞融合情況。二、病毒動物接種法實驗動物在病毒學研究中有四方面用途：①分離鑒定病毒，如乙腦病毒；②連續傳代通過，以減弱有毒株對人的致病力，如狂犬病病毒；③制備抗血清；④病毒致病機理的研究。常用的實驗動物有小白鼠、地鼠、豚鼠、家兔、綿羊、雞、猴等。在病毒學研究中，動物接種時為避免動物本身可能帶有病毒，多采用實驗室自己繁殖的動物。首先根據研究目的選擇動物種類，對病毒致病機制的研究，則選擇愈接近人類的高等動物（例如靈長類）研究結果愈有價值；其次要注意動物的年齡、性別和接種的途徑等各種因素，一般年幼的動物比成年動物對病毒的敏感性高。至于接種的途徑應根據病毒的嗜性決定，例如腦炎病毒以腦內注射最敏感。（一）小白鼠尾靜脈接種（錄像）【材料】 1. 動物：小白鼠 2. 病毒懸液 3. 碘酒、酒精、二甲苯、4號針頭及小鋁匣【方法】 1. 將小白鼠固定在小鋁匣內，露出尾部，用碘酒消毒尾部，然后用酒精棉球連續擦尾部皮膚（必要時用二甲苯擦）使血管擴張。 2. 尾背和左右兩側三根血管皆為靜脈，可選一根擴張較好的靜脈作接種用。左手拇指捏住尾部的遠端，向下彎45176。，右手持注射器，于彎處進針靜脈。注意：推注時遇阻力且皮下隆起發白時，表示針頭不在血管內應拔出重新進針；如針頭在血管內，推注時不感阻力，且可看到血管中血液由于注入液體而后退。接種后逐日觀察動物發病情況。（二）小白鼠鼻內接種（錄像）【材料】小白鼠、流感病毒鼠肺適應株病毒懸液、無菌小試管、無菌毛細管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。【方法】 1. 首先將沾有乙醚的棉球放入一清潔小玻瓶內。左手握小瓶，右手抓住小白鼠，將其頭部塞入瓶口，進行全身麻醉。注意麻醉深度，不宜太淺或太深，太深時易遭致麻醉死亡或非特異性吸入性肺炎，太淺則易在滴種時打噴嚏。 2. 用無菌毛細吸管吸取病毒懸液少許，連同毛細吸管插在無菌試管中備用。 3. 用左手將小白鼠握在手掌中，大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其頭部朝前并呈仰臥位置，另一手取事先吸有病毒懸液的吸管，慢慢滴出一點于滴管口而不使其自然掉落，呈懸滴狀。將懸滴靠近動物鼻尖，動物在呼吸時自然吸入，～，不宜過多。 4. 小白鼠慢慢蘇醒，在飼養盒中逐日開始發病，發病的癥狀常為毛聳、咳嗽、不食、甚至死亡。解剖尸體可觀察到肺炎或血性病灶。（三）小白鼠腦內接種（錄像）【材料】腦炎病毒（小白鼠腦脊髓炎病毒）懸液。腦組織先用無菌生理鹽水洗去血液，再加10％脫脂奶鹽水研磨成10－1懸液，然后用3000轉/分離心沉淀30分鐘，吸取上清液供接種用。小白鼠：3周齡，體重6～8克。（4號）、煮針鍋、碘酊、棉簽。【方法】 1. ，去除注射器內的氣泡。 2. 取出小白鼠，左手將小白鼠固定，固定時用大拇指和食指捏住小白鼠的頭部，左手手掌輕輕按住小白鼠的體部。 3. 右手以棉簽蘸以碘酒，消毒小白鼠顳部皮毛（不碰到眼）。 4. 右手拿注射器在小白鼠顳部（眼與耳根連線的中點略偏耳朵的方向）刺入，進入顱腔，進針2～3毫米，不要插得太深，～。 5. 注射完畢，將用過得注射器放入煮針鍋內煮沸消毒。動物一般在3～4天后開始發病，食欲減退，活動遲鈍，毛聳，震顫，慢慢發展為麻痹，癱瘓而死亡。本法適用于一些腦炎病毒的分離培養。三、病毒雞胚培養法雞胚培養法常用于痘類病毒、粘病毒和皰疹病毒的分離、鑒定、制備抗原、生產疫苗以及研究病毒性質等。雞胚和實驗動物一樣，為一整體動物，有神經血管的分布及臟器的構造；雞胚的組織分化程度低，病毒易于繁殖，感染了病毒的膜結構和液體中，含有大量病毒；雞胚來源充足，操作簡單、通常本身是無菌的，對接種的病毒不產生抗體為其優點，但除產生

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