基因診斷與基因治療培訓教程-免費閱讀

　　

【正文】 三月 21三月 2113:18:5913:18:59March 22, 20231意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 三月 211:18 下午 三月 2113:18March 22, 20231少年十五二十時，步行奪得胡馬騎。 2023/3/22 13:18:5913:18:5922 March 20231做前，能夠環視四周；做時，你只能或者最好沿著以腳為起點的射線向前。錄目 錄靜夜四無鄰，荒居舊業貧。 （ 5）將抗病毒蛋白質基因，如 239。 （ 2）干擾病毒基因組的轉錄起始和調控。病毒還是造成先天畸形的重要因素之一。錄為了使化療藥物能夠最大程度地殺死腫瘤細胞，可以將某些藥物增敏基因導入腫瘤細胞，特別是對化療藥物原本不敏感的腫瘤細胞，使其對抗腫瘤藥物的敏感性大大增加，從而達到增強化療效果的目的。（ 2）大劑量的化療可能導致患者的正常細胞，特別是骨髓造血細胞的功能受到抑制。錄?自殺基因治療：直接殺死腫瘤細胞。n 家族性高膽固醇血癥 穩定地生成。RNA干擾技術具有高度的序列專一性和有效的干擾能力，可以使特定基因沉默或功能喪失，因此可以作為功能基因組學的一種強有力的研究工具。錄目 錄RNA干擾機制示意圖 在此過程中，與雙鏈RNA有同源序列的信使 RNA（ mRNA） 被降解，從而抑制該基因的表達。目 （ 1）選擇合適的靶部位，該部位具有核酶切割位點，能與核酶分子結合并組成酶活性結構域。（ 3）具有劑量調節效應 可以抵抗環境中的核酸酶的降解作用。錄（一）反義 RNA（ antisense錄錄腺相關病毒載體定點整合 (19號染色體特定區域 )不致病 分裂細胞、非分裂細胞5kb目 錄目 Particles目 錄（ 3）腺病毒相關病毒載體腺病毒載體缺點l 宿主的免疫反應導致腺病毒載體表達短暫。目 kb)雙鏈無包膜 DNA病毒。kb以下的外源基因。目 p 含有負鏈 DNA轉錄的引物結合位點 (PBS)和正鏈 DNA轉錄的引物結合位點 。據統計，有 72%的臨床實驗計劃和 71%的病例使用了病毒載體，其中用得最多的是反轉錄病毒載體 。基因轉移 (gene通過將抗癌免疫增強的細胞因子或 MHC基因導入腫瘤組織，以增強腫瘤微環境中的抗癌免疫反應。simplex錄n 定義： 將 “自殺 ”基因導入宿主細胞中，這種基因編碼的酶能使無毒性的藥物前體轉化為細胞毒性代謝物，誘導靶細胞產生 “自殺 ”效應，從而達到清除腫瘤細胞的目的。augmentation） 對缺陷基因的缺陷部位進行精確的原位修復，不涉及基因組的任何改變。錄目 錄 一、基因治療的策略目 廣義基因治療： ① 外源正常基因導入病變細胞，產生正常基因的表達產物以補充缺失的或失去正常功能的蛋白質； ② 采用適當的技術抑制細胞內過度表達的基因； ③ 將特定的基因導入非病變細胞，在體內表達特定產物； ④ 向功能異常的細胞（腫瘤細胞）中導入該細胞中本來不存在的基因（如自殺基因），利用這些基因的表達產物達到治療疾病的目的。目 錄二、 DNA指紋與法醫學診斷n 個體識別和親子鑒定： 擴增片段長度多態（ amplified錄n 串聯重復序列散在分布于染色體上。錄（ 1） PCRSSCP法： 對腺瘤樣息肉病人 APC基因 PCRSSCP技術進行分析。APC（ adenomatous錄目 （ 3） PCRRFLP分析目 核苷酸雜交技術（如 ASO）： 檢測 ras基因第 12位密碼子點突變。PCR急性淋巴細胞白血病，慢性淋巴細胞白血病等以 Nras突變為主；泌尿系統腫瘤則以 Hras突變為主。胰腺癌、結腸癌、肺癌以 Kras突變為主，如第 12位密碼子突變，由編碼甘氨酸的 GGT突變為 TGT、GTT或 GAT，少數突變為 GCT。ras目 主要采用 PCR技術： ① 檢測 HP染色體 DNA特異片段； ② 檢測 HP尿素酶A基因； ③ 用 PCRRFLP鑒別 HP菌株。 bp序列，再用探針雜交，靈敏度可達到 100個細菌水平。錄 一、病毒性疾病n 甲型肝炎病毒（ HAV）mRNA在幾乎所有患者不表達或只有低表達，從而出現臨床癥狀。8～ 50FVIII基因突變的檢測（ 1）依賴于 FVIII基因內或旁側的多態性標記的連鎖分析（ 2） RFLP連鎖分析（ 3） VNTR分析（ 4）短串聯重復序列（ STR）的連鎖分析目 I型倒位患者表現為 14目 bT注：由于 54? bp、 114HBS的 PCRRFLP分析 3180。GTGCCT錄n 正常的（ N）的 ASO探針：（二） β珠蛋白生成障礙性貧血癥 polymorphism)目 (variablePCR）目 錄目 錄基因芯片雜交流程示意圖目 錄目 PCRRFLP目 變異產生新的酶切位點或原有的酶切位點消失，在用限制性核酸內切酶消化時產生不同長度或不同數量的片段。DNAconformation錄錄PCR在基因診斷中的應用n RTPCRn 熒光定量 PCRn 多重 PCRn PCRASOn ASPCRn PCRSSCPn PCRRFLP目 錄固相夾心雜交法示意圖 目 hybridization)padlock)(fluorescence(allele目 2.提取 DNA→ 限制性內切酶消化 DNA以產生特定長度的片段 → 凝膠電泳分離 錄目 目 錄二、基因診斷中常用的分子生物學技術n 核酸分子雜交（ Nucleic錄目 錄診斷依據 (遺傳物質改變 )l DNA、 RNA或蛋白質水平變化，如病毒基因及其轉錄產物在體內從無到有、癌基因表達水平從低到高；l 基因結構變化，如點突變引起基因失活、染色體轉位引起基因異常激活或滅活。1976年加州大學華裔科學家 錄目 錄F 第一節 基因診斷學基礎F 第二節 遺傳病的基因診斷F 第三節 傳染病的基因診斷F 第四節 腫瘤的基因診斷F 第五節 基因診斷在法醫學上的應用 F 第六節 基因治療的概念及策略 本章內容提要目 錄一、 基因 診 斷的概念、特點及 臨 床意義 定義： 利用分子生物學技術，通過檢測基因及基因表達產物的存在狀態，對人體疾病作出診斷的方法。 早期診斷性252。n 限制性片段長度多態性（ RFLP） n Western 免疫印跡（ Western目 blotting)目 斑點雜交（ dot錄反向斑點雜交（ reverse錄5. 原位分子雜交n 熒光原位雜交先將捕捉探針吸附于固相支持物上，與靶基因序列 A部分雜交，再加入標記的檢測探針，檢測探針與靶基因序列 B部分雜交，檢測雜交信號。Mg2+錄目 錄2.PCRASON：正常基因； H：雜合子基因； M：突變基因ASO1 ASO2NHM目 length錄（五） chips）n 蛋白質芯片 (protein目 包括數十個堿基到數千個堿基的丟失、插入、替換、重復和倒位等，以及染色體突變或畸變，包括染色體的易位、缺失或染色三體（如唐氏綜合征）等。端的互補與否，設計一對與正常或突變模板配對的特異引物等位基因特異 PCR錄目 錄目 錄間接診斷：檢測與致病基因連鎖的遺傳標記三代遺傳標記：① repeats)③ 錄目 錄（一）鐮狀細胞貧血病一、血紅蛋白病 ——ASO 雜交法 PCRRFLP分析 GC3180。5180。ASO雜交法目 錄正常人 突變攜帶者 患者鐮狀紅細胞貧血病的限制性內切酶譜分析目 1:未酶解片段； 3： bA/錄目 kb、 14目 三核苷酸重復序列的異常擴增以及相鄰CpGmutation）。2． DNA連鎖分析 錄目 錄目 第 282位點突變率最高。（ 2） DNA序列分析gene）的突變。突變分布于整個編碼序列，沒有明顯的突變簇或突變熱點。BRCA2基因在 30% ～ 40% 的散發性乳腺癌有雜合性缺失（ LOH）。cancer）基因失活是結腸癌發展的晚期事件。p53基因的突變是結腸癌發展過程的晚期現象。如 hMSHhMLH hPMS1或 hPMS2基因的突變所致的 DNA錯配修復缺陷與遺傳性非息肉性結腸癌的發生有關。錄目 (CGG)n等，稱為微衛星 DNA。錄錄目 錄法醫案檢中的基因診斷技術n VNTR（可變數目串聯重復序列 /小衛星）的核酸分子雜交分析n STR（短串聯重復序列 /微衛星）的 PCR分析n SNP的基因芯片檢測目 Index， PI）值、父權相對指數或親子關系概率值計算方法基本一致。錄錄n 基因治療： 指將目的基因通過基因轉移技術（病毒載體介導或者非病毒載體介導的基因轉移技術）導入靶細胞內，目的基因表達產物對疾病起治療作用。 體細胞 (somatictargeting）n 細胞內基因同源重組的發生率很低。錄目 錄自殺基因的作用機制 目 GCV） 轉變成毒性 GCV三磷酸核苷，后者能抑制 DNA聚合酶活性，導致細胞死亡。 錄 （五）基因免疫治療