基因工程原理(存儲版)

　　

【正文】 eI用途 2.DNA聚合酶1.DNA擴增技術又稱為 聚合酶鏈式反應 ，它包括以下三個步驟：引物延伸 (75℃) Taq5’復性 引物 PAGCTTHOA5’HOA退火T3’TTCGAPOHA5’質粒 DNA不僅能在細菌中復制，并且在添加真核復制信號和啟動子后，可以構建出能在原核和真核細胞中均可復制的穿梭質粒，并在真核細胞中表達，因此這類載體在基因工程中應用廣泛。二、質粒 DNA的分離與純化（放在實驗中講）三、質粒載體的構建及類型（一）質粒載體的發展概況；（二）質粒載體的特點（基本條件）；（三）遺傳標記基因（四）質粒載體的類型（一）發展概況pBR313和 pBR322第二階段： 增大載體容量（降低載體長度），建立多克隆位點區和新的遺傳標記基因。至少應有一個遺傳標記基因，以指示載體或重組 DNA分子是否進入宿主細胞。 Tetr2）指示外源 DNA分子 是否插入載體分子 形成了重組子。TetracyclineAmpr Cmr） 該蛋白質可分為兩部分： α鏈和 β鏈。β鏈）互補，產生有活性的 β— 半乳糖苷酶，在含有指示劑 Xgal和誘導劑 IPTG的存在下，菌落呈現蘭色；外源基因的插入后，破壞了 lacZa.LacZα基因組或 cDNA文庫的構建 。vector）一般無檢測標記基因；終止子+轉錄起始區 表達外源基因以產生大量外源基因產物四、常用質粒載體舉例 pBR322載體 pUC載體 pBR322載體優點：分子量較小，為 4363bp，不僅利于自身 DNA的純化，可容納的外源 DNA也較大。重組分子 Ⅱ Tcr轉化子影印到 Tc平板上 TcS為重組子Apr每一種限制性內切酶會產生不同的粘性末端，可選用兩種內切酶組合在質粒載體和外源 DNA上產生相同的末端，進行雙粘端連接，既提高克隆的效率，又可以定向克隆。 三者均有限制 修飾系統和重組基因缺陷，外源 DNA可存活，且不發生重組2） 三月 21三月 21Thursday, 20:43:4220:43:4220:43Thursday,三月 20231行動出成果，工作出財富。 三月 21三月 21Thursday, 20:43:4220:43:4220:43Thursday,三月 20231少年十五二十時，步行奪得胡馬騎。 三月 21三月 21Thursday, 20:43:4220:43:4220:43Thursday, 1120231業余生活要有意義，不要越軌。POWERPOINTLoremFuscepurus.cursus.ac,adipiscing下午 8:43下午 三月 2120:43March11,PM1越是沒有本領的就越加自命不凡。下午 8:43下午 三月 2120:43March20231意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。PM1成功就是日復一日那一點點小小努力的積累。下午 8:43下午 三月 2120:43March20231他鄉生白發，舊國見青山。PM1以我獨沈久，愧君相見頻。 載體容量 M13mp載體 4 kb 細菌質粒載體 10kb λ 載體 23kb cos質粒載體 48kb P1載體 95 kb pYAC載體 ∽1000 kb5.如常用于基因工程的宿主菌 ，菌株不同，基因型亦不同，不同載體要求不同菌株。 （ 2）、含易于檢測是否有外源 DNA插入的標記基因 LacZα ，可利用 ?互補原理進行藍白篩選。涂布 Tc平板 Apr轉化子 分別轉化 (ApS外源 DNABamHI片段重組分子 I表達載體的類型也就確定了。終止子（常稱之為表達分泌型載體）三種表達型載體結構圖表達單元 外源基因表達基因的啟動子序列和終止子序列；pBR322和 pUC載體。2)個用于轉化體選擇，另一個用于重組子檢測。 質粒型載體 — 環狀 dsDNA分子，自主復制 （ 2） .αPb.這兩個基因（ LacZ和 LacZα）均可作為標記基因。β— 半乳糖苷酶基因有 1021卡那霉素 (Kanr),氯霉素抗性基因 （ 2)至少應有一個克隆位點，以供外源 DNA插入。2.colE1,在細胞的增殖構成中，其中必然有一種會被逐漸地排斥（稀釋）掉。 R質粒可將其抗性轉移到缺乏該質粒的適宜的受體細胞，使后者也獲得同樣的抗菌素抗性能力。5’AAGCTTT3’5’AHOPAGCTTCGAPOHA2)5’ 五、連接酶（一）、 T4延伸 3’5’3’ 與 DNA引物退火 (45℃ )為 polT4切口移位制備探針 合成第二條 cDNA補齊 5’突起端除去 3’端突起的單鏈 DNA（在無 dNTP時）polI的切口移位 Pol基因突變時產生切口 當酶濃度很低時， ds2+DNaseH用于除去 DNA樣品中的 RNA分子PP539。4P539。OH339。HO339。P539。P539。切口 (nick)缺口 ,2)1)改變某些限制酶識別順序的特異性，以便重組體的形成順序完全重疊 CGG三個系統中的甲基化酶可使細菌 DNA分子中的胞嘧啶和腺嘌呤發生甲基化，形成 5’甲基胞嘧啶和 6’甲基腺嘌呤。GGGGTACCCCGGG。5’CCC３） AA３）對稱性 — 雙 對稱CCGGN’N’N’N’N’CCGGGGCCGGATCC： PpuMIⅢSacIRI狹義指 II型限制酶。modification其它酶類 用于生物細胞的破壁，轉化，核酸純化，檢測等一、限制性內切酶（一）、限制修飾系統的種類（二）、限制性內切酶的定義、命名（三）、限制酶的特點（四）、異源同序酶（ isoschizomer，同裂酶）（五）、 中藥新劑型第二節 基因工程中的工具酶限制性內切酶 — 主 要用于 DNA分子的特異切割 中藥藥靶 （基因）或作用位點基因的尋找由單個質量性狀基因向多基因數量性狀轉變。移植 19皮膚病 22艾滋病及相關疾病 26神經系統疾病 心臟病 產品數量感染性疾病 疾病種類 發酵工程技術發酵對象： 酶工程的主要內容酶的分離純化酶與細胞的固定化技術及反應器酶制劑的發酵生產酶分子化學修飾、遺傳突變及結構改造酶抑制劑與激活劑開發與研究人工設計與合成模擬酶及酶分子發酵工程概念蛋白質氨基酸序列的分析三、基因工程技術及其應用轉基因植物轉基因動物作為生物發生器基因本身也是一個產業Rockfellertechnique)克隆 (clone):基因克隆 (gene目的基因的分離第五節 基因克隆的質粒載體第四節 engineering)。DNA將目的基因克隆到表達載體上，導入寄主細胞，使之在新的遺傳背景下實現功能表達，產生出人類所需要的物質。隨著科學的發展，尤其是基因工程技術的日趨完善，為酶工程賦予了新的內容，特別是利用 DNA操作技術，修飾改造酶分子的結構或活性位點、酶與底物作用位點，重組酶的生產，模擬酶的人工設計與合成等成為新的內容。發酵工程屬于生物技術的下游技術，是工業化大規模培養細胞、生產生物制品的一種技術。新型食品；營養食品；保健食品；輕工用酶 如美國 Amgen公司，首次開發上市的 EPO、 GSCF到 1997年的銷售額分別接近和達到 20億美元基因工程試劑的高回報堿性成纖維細胞生長因子 231元 /ug紅細胞生成素