微生物檢驗技術(shù)考試要點(整理中級)-文庫吧在線文庫

　　

【正文】 抗體（不能直接滅活病毒，IgG、IgM、IgA）血凝抑制抗體（HLAb）補體結(jié)合抗體。旁路途徑（二）被細胞的脂多糖激活。細菌生長繁殖分為四期：遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期19.（腸道桿菌）細菌的四種生化反應(yīng)：吲哚（I）、甲基紅（M）、VP（V）、枸櫞酸鹽利用（C），合稱為IMViC。內(nèi)毒素（G脂質(zhì)A）、外毒素（G+產(chǎn)生的毒性蛋白質(zhì)產(chǎn)物，具有抗原性強、毒性強、作用特異性強、不耐熱、人工化學(xué)可脫毒性，%甲醛脫毒后形成類毒素進行人工免疫）。G菌細胞壁的主要成份：肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖（LPS）（類脂A、核心多糖、特異性多糖），菌體脂多糖（LPS）能引起發(fā)熱故稱熱原質(zhì)，又稱為細菌的內(nèi)毒素。25. 細菌遺傳物質(zhì)主要在于染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)位因子中。27. 超凈工作臺應(yīng)采用層流技術(shù)凈化空氣、選擇垂直氣流通風(fēng)方式。背景灰色、菌體紅色、莢膜無色透明鞭毛染色鍍銀法；媒染A液—10%單寧酸10ml+5ml飽和硫酸鉀鋁水溶液+1ml苯胺飽和水溶液+5%氯化鐵水溶液成墨色。：干擾素（IFN）、NK細胞 。：受體菌直接攝取供體菌提供的游離DNA片段，整合重組（與染色體重組）使受體菌的性狀發(fā)生變異。40. 原生質(zhì)融合：兩種經(jīng)過處理失去細胞壁的原生體混合和可發(fā)生融合后的雙倍體可發(fā)生染色體間的重組。目前國際上普遍采用伯杰分類系統(tǒng)，也有用CDC（USA）。適用于對活體細胞生活狀態(tài)下的生長、運動、增殖情況、及細微結(jié)構(gòu)的觀察。56. AMS系統(tǒng)是目前微生物鑒定中最常用的自動化儀器。60. 菌種保存：“凍干”保存—穩(wěn)定劑（脫脂乳、蔗糖）。必須做苯唑西林的敏感試驗。血清凝集試驗（SAT）是常用診斷實驗，虎紅平板凝集試驗（RBPT），補體結(jié)合試驗（CFT）、免疫熒光試驗（IFT）等。標(biāo)本制成懸液，暗視野顯微鏡2010或4010下檢查。對酸堿敏感，～，最適溫28～30℃，12h分裂一次。A群鏈對桿菌肽敏感青霉素G為首選，抑環(huán)＞10cm敏感。氨基糖苷類合用，β溶鏈致病性最強，α溶鏈為條件致病菌。依據(jù)莢膜分13個血清型，主要是ABC三個血清型及W13Y。細菌培養(yǎng)是目前世衛(wèi)推薦的唯一方法，用培養(yǎng)法查女病人宮頸口表面分泌物。病原分離：人工培養(yǎng)基上不易生長，接種兔睪丸或眼前房內(nèi)繁殖，并能保持毒力。專用紙片圈內(nèi)（18mm）可定性和半定量。腸集聚型（EAggEC）：嬰兒和旅游者腹瀉持續(xù)性水樣腹瀉。傷寒沙門菌、甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌、希氏沙門菌。病原鑒定：凡符合克氏雙糖鐵（KIA）斜面或三糖鐵（TSI）：不發(fā)酵乳糖、蔗糖，發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖甘露醇，產(chǎn)氣＋/－，H2S＋，吲哚尿素VP均－，硝酸鹽還原陽性，多價血清陽性的為沙門屬。普羅威登斯屬有：產(chǎn)堿，斯氏，雷極，摩根菌只有摩氏摩根菌。48小時為灰白色中央突起菌落，）、動物實驗（小鼠、豚鼠）。膽汁溶菌試驗用于肺炎鏈球菌與甲型鏈球菌鑒別ONPG試驗—遲緩分解乳糖的細菌試驗為陽性。不耐熱的非特異性H抗原，有兩個環(huán)狀染色體，即染色體染色體2。86. 副溶血弧菌：嗜鹽性弧菌（與霍亂顯著區(qū)別），是我國沿海地區(qū)最常見的食物中毒病原菌，兩極濃染，NaCl最適35g/L，無鹽不長，～，最適pH ，不耐熱，不耐酸，在TCBS上不發(fā)酵蔗糖菌落綠色，＞80g/L鹽內(nèi)不長，神奈川現(xiàn)象（β溶血），KP+是致病株能使人或兔紅細胞發(fā)生溶血對馬紅細胞不溶血為陽性。90.《伯杰系統(tǒng)細菌學(xué)分類》的標(biāo)準(zhǔn)：G染特性，形態(tài)，鞭毛，芽胞，莢膜，代謝產(chǎn)物。紫外線下出現(xiàn)熒光也是厭氧菌參考之一，卡那霉素用于梭桿菌與類桿菌的區(qū)分，甲硝唑用于厭氧菌和非厭氧菌的區(qū)別。分離培養(yǎng)：棉拭子取咽喉部、鼻腔、皮膚病變部位，血平板，呂氏血清斜面（生長迅速，乳白色，S型，形態(tài)典型），哥倫比亞血培養(yǎng)基及亞碲酸鉀血瓊脂（48小時以上，菌落黑色，篩選鑒別）。細菌不進入血流。高壓蒸氣滅菌殺死細菌牙芽胞最有效。第四階段：慢性毒性試驗和致癌試驗GB 19489—2004《實驗室生物安全通用要求》分級：危害等級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。大多數(shù)限制內(nèi)切酶使用溫度37℃，保存溫度是20℃。分離DNA片段最佳范圍5500bp十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）蛋白分離聚丙烯酰胺濃度越大，線性分離范圍越小。火箭電泳測抗原量交叉定量免疫電泳醋酸纖維膜電泳免疫球蛋白鑒定變性聚丙烯酰胺凝膠單鏈（DNA或RNA）片段分離與純化四、快速斑點免疫金滲濾法（滴金免疫法）：屬于常用的膠體金技術(shù)。絕大多數(shù)Ⅱ類限制酶識別長度為4或6個核苷酸。一般培養(yǎng)基高壓121℃，㎏30分鐘。2003年8月1日實行。需氧芽胞菌除炭疽外均有鞭毛。大腸菌的RNA聚合酶有5個亞基，其o亞基有啟動子作用。大腸桿菌DNA損傷修復(fù)時填補缺口最重要的酶DNA聚合酶Ⅰ。由IgE介導(dǎo)，肥大細胞和嗜堿粒細胞等效應(yīng)細胞以釋放生物活性介質(zhì)的方式參與反應(yīng)；發(fā)生快，消退亦快；Ⅱ型變態(tài)反應(yīng)：細胞毒型/細胞溶解型，抗體（多屬IgG、少數(shù)為IgM、IgA）首先同細胞本身抗原成分或吸附于膜表面成分相結(jié)合，然后通過四種不同的途徑殺傷靶細胞 Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)：即免疫復(fù)合物型，又稱血管炎型超敏反應(yīng)。T細胞是：細胞毒性T細胞。病毒在胞漿內(nèi)繁殖，芽生釋放。是評價化學(xué)毒物急性毒性大小最重要的參數(shù)。一旦癥狀出現(xiàn)，多為亞急性、進行性，并造成死亡。15. Versen又稱EDTA16. 病毒的形態(tài)學(xué)檢查方法電子顯微鏡（EM）、光學(xué)顯微鏡、超速離心法、超過濾法、X射線晶體衍射法。22. 麻疹病毒主要吸附在白細胞上，加抗凝劑可提高分離率。(3) 用熒光劑對細胞特定成分染色，利用流式細胞儀對處在快速、直線、流動狀態(tài)中的單細胞或生物顆粒進行多參數(shù)、快速定量分析，并能對特定群體加以分選的現(xiàn)代細胞分析技術(shù)。毒力鑒定：質(zhì)粒電泳圖譜分析 PCR擴增其選擇培養(yǎng)基是戊烷脒血平板，鑒定試驗有：青霉素敏感試驗、串珠試驗，噬菌體裂解試驗（AP631株），重碳酸鹽毒力試驗（有毒力形成芽胞呈M型）。依賴細胞免疫，遲發(fā)超敏反應(yīng)伴隨細胞免疫存在而存在。麻風(fēng)菌的有效保護性免疫取決于細胞介導(dǎo)的免疫，沒有體液免疫缺陷。最適溫度為37～42℃。：條件致病菌，需氧，G－桿菌，有鞭毛，20～42℃長，最適產(chǎn)毒溫度是26℃，是35℃，4℃不長，液面可形成菌膜，色素有：綠膿素（溶于水和氯仿），氧化酶陽性，液化明膠、還原硝酸鹽，在42℃條件下能生長。接種于巧克力色、含腦心浸液的血瓊脂平板。血液、痰、尿68℃避光、隔熱運送。莢膜也與致病力有關(guān)。沙眼，鸚鵡熱嗜衣原體，肺炎嗜衣原體。免疫是以細胞免疫為主，體液免疫為輔。另一種為種特異性抗原，與外膜蛋白構(gòu)成，不耐熱。（三）恙蟲病立克次體 () ：恙蟲病立克次體是恙蟲病的病原體。快速檢測：雙抗體夾心ELISA法檢測外膜蛋白、免疫印跡技術(shù)檢測抗原114. 肝炎病毒：甲型（HAV）、乙型（HBV）、丙型（HCV）、丁型（HDV）、戊型（HEV）。長鏈為—鏈，短鏈為+鏈，短鏈5”末端固定，3”末端不固定。有鎂、錳離子存在可保持完整性。血量：成、兒1020ml，嬰幼兒12 ml，30小時內(nèi)處理，室溫保存。小RNA病毒科，單股正鏈無包膜，圓球形顆粒，耐寒70度保存活力8年，不耐熱。副黏病毒科。IgM在出疹7—10天達高峰，28天內(nèi)都能檢測到。單負分節(jié)段RNA，基因組分3個片段（L、M、S），分別編碼RNA聚合酶、包膜糖蛋白、核衣殼蛋白。單股負鏈RNA，長絲狀。病毒的結(jié)構(gòu)蛋白有：M（包膜內(nèi)），C（衣殼內(nèi)），E（嵌在包膜上的糖蛋白）三種，組成血凝素，囊膜內(nèi)尚有內(nèi)膜蛋白（M），參與病毒的裝配。E蛋白主要有A、B、C三個不重疊抗原區(qū)，為主要的毒粒，能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生保護性中和抗體，直接從標(biāo)本中分離病毒是確診登革熱的可靠方法。 123．流行性感冒病毒：正黏科分節(jié)單負鏈RNA病毒，多呈球形，核心由RNA蛋白和P蛋白組成，據(jù)病毒粒核蛋白（NP蛋白）膜蛋白（MP蛋白）的抗原特性分甲、乙、丙三型，包膜（由血紅細胞凝集素HA、神經(jīng)氨酸酶NA）后者是劃分流感病毒亞型的依據(jù)，易變異。屬布尼亞病毒科、內(nèi)羅畢病毒屬。抵抗力弱不耐熱。急性期血標(biāo)本接種于Vero（非洲綠猴腎）細胞培養(yǎng)，或豚鼠腹腔內(nèi)。目前我國所使用的流行性出血熱的疫苗是: 細胞培養(yǎng)滅活疫苗。F蛋白是一種具有膜融合特性的糖蛋白。只有一個血清型，多個基因型。標(biāo)本：糞便（分離主要標(biāo)本），糞便排出病毒主要在麻痹前期、麻痹后2周內(nèi)，排毒呈間歇性，故采樣在14天內(nèi)采集2份糞便，時間間隔24—48小時，量5—8克。用ELISA測p24抗原，可使感染的窗口期縮短1左右。世界81第一例，我國85。核心含單股負鏈共價閉合環(huán)裝RNA、HDAg抗原，核衣殼是一粗糙球形結(jié)構(gòu)。糞—口傳播。分離培養(yǎng)是確診支原體感染的可靠方法之一，接種平板后用膠紙封保濕，培養(yǎng)基中加入膽固醇、血清蛋白和酵母浸液，加酚紅，醋酸鉈及抗生素抑菌。 補體結(jié)合試驗是立克次體最常用的方法。WHO推薦金標(biāo)方法間接免疫熒光方法（IFA）孵育最適溫度為37℃。始體（網(wǎng)狀體）（RB，大而疏松的結(jié)構(gòu)，衣原體發(fā)育中的繁殖體，不具感染性，具增殖力色，絲狀分裂增，姬染蘭殖），產(chǎn)生類似于G桿內(nèi)毒素。rmpA基因作該菌輔助診斷。具有O抗原和K抗原。水解馬尿酸是嗜肺軍團菌特征。要新鮮血液（含Ⅹ和Ⅴ因子）培養(yǎng)基，不溶血，可生長在接種于血平板上的金黃色葡萄球菌的周圍，流感嗜血桿菌菌落較大，越遠越小，即衛(wèi)星現(xiàn)象。分離培養(yǎng)：采樣棉拭子涂于萬古霉素、多粘菌素的肉湯增菌培養(yǎng)，再接種于哥倫比亞血(5%脫纖維綿羊血)平板上,42℃培養(yǎng)微需氧（85%N、10%CO5%O2）23天，不溶血、灰色扁平、濕潤光澤、像水滴，邊緣完整發(fā)亮。結(jié)核樣型患者中很少找到細菌。104. 麻風(fēng)病原： Hamsen在1937年發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)分枝桿菌。可出現(xiàn)Koch現(xiàn)象（初次不發(fā)生速發(fā)型過敏反應(yīng)），是Koch在1891年觀察到。檢驗技術(shù)資格考試考點精要——微生物學(xué)檢驗（中級下）101. 炭疽桿菌：最大的致病G＋桿菌，菌落灰白色，表面干燥呈“毛玻璃”狀，稍隆起，低倍鏡下菌落邊緣呈明顯卷發(fā)狀如（獅鬃），人工培養(yǎng)呈竹節(jié)狀長鏈，不分解乳糖，對碘和氧化劑敏感，有菌體多糖，莢膜多肽，芽胞，炭疽毒素四抗菌素原，質(zhì)粒編碼：毒力因子毒素、莢膜。25. 流式細胞術(shù): (1)一種細胞分選或分析技術(shù)。加入HEPES具有較強的緩沖能力。11. 蓄積系數(shù)經(jīng)值：＜1高度、1—3明顯、3—5中度、＞5輕度。一、致死劑量LD: (1)絕對致死劑量LD100 (2)最小致死劑量LD01 (3)最大耐受劑量LD0二、效應(yīng)、反應(yīng)、劑量—效應(yīng)、劑量—反應(yīng)、關(guān)系曲線6．超過濾法：用不同孔徑的火棉膠濾膜過濾病毒懸液。2．人工綜合組織培養(yǎng)營養(yǎng)液：氨基酸、糖類、無機鹽、維生素、輔助生長因子。可用于檢測致瀉大腸埃希菌腸毒素的方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測LT和ST、雙向瓊脂擴散試驗檢測LT、乳鼠灌胃試驗檢測ST.瓊脂糖凝膠電泳緩沖液通常用：1**TBE，溴化乙錠是誘變劑。是機體黏膜防御感染的重要因素。在體內(nèi)DNA復(fù)制必須有RNA引物。DNA多聚酶只能結(jié)合在一長段DNA單鏈的一小段局部雙鏈結(jié)構(gòu)上，才能順利開始DNA合成。共同特點：TIAg刺激機體產(chǎn)生的Ab僅是免疫球蛋白M，不引起回憶應(yīng)答，不引起細胞免疫。細菌的生化反應(yīng)試驗糖醇類代謝試驗：糖發(fā)酵試驗、甲基紅試驗、VP試驗、葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗（O/F試驗）、七葉苷水解試驗、B半乳糖苷滲透酶試驗。適宜測定土壤中微生物中的特定生理群。細菌的培養(yǎng)技術(shù)一、培養(yǎng)基：營養(yǎng)物質(zhì)：蛋白胨、肉浸汁和牛肉膏、糖醇類、血液、動物血清與雞蛋、無機鹽類、生長因子。玻片凝集反應(yīng)23分鐘看結(jié)果；試管凝集反應(yīng)18—24小時看結(jié)果；沉淀反應(yīng)72小時看結(jié)果；補體結(jié)合試驗（CFT）30分鐘看結(jié)果過濾式微生物采樣器根據(jù)過濾材料不同有：薄膜過濾器、玻璃纖維過濾器、凝膠過濾器、谷氨酸堿過濾器。（分析大分子物質(zhì)）瓊脂糖凝膠電泳核酸分離與純化1%瓊脂糖作支持介質(zhì)，有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。原理：纖維素或凝膠介質(zhì)帶電荷不同。生物安全柜三級：2．普通光學(xué)顯微鏡：,不能觀察細菌的亞結(jié)構(gòu)3．暗視野顯微鏡：,、 mm4．熒光顯微鏡：5．—,。化學(xué)毒物在體內(nèi)的代謝分為兩相：Ⅰ反應(yīng)氧化、還原、水解；Ⅱ反應(yīng)與體內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合亞慢性毒性試驗?zāi)康模鹤畲鬅o作用劑量、最大耐受劑量估測閾劑量。可獲持久免疫力咳碟法：包姜培養(yǎng)基（含青霉素G）置10cm使飛沫直射于培養(yǎng)基上，37℃23天鼻咽拭子法：—%蛋白胨生理鹽水中2小時內(nèi)檢 99. TBETris硼酸緩沖液，長時間電泳選用。出現(xiàn)各種心肌炎，軟腭麻痹是白喉晚期死亡的主要原因。所致疾病為氣性壞疽，有捻發(fā)感，青霉素為首選，萬古為次選。應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基，應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基應(yīng)煮沸10min以驅(qū)氧并立即冷卻。傳染源主要是人，糞口途徑。常見的流行株為噬菌體13型，生物型ad型，常見的有：la、lb、ld。食品及水樣常用堿性蛋白胨水增菌培養(yǎng)后再接種，鈉離子可剌激生長，但在＞8%NaACI中不生長。：免疫層析技術(shù)。鼠疫耶爾森：有莢無芽無鞭，兩極濃染，28～30℃，～，液體中培養(yǎng)好，底部可有鐘乳石樣，常用1%溶血的胰酶消化肉瓊脂（赫氏瓊脂）加入亞硫酸鈉或脫纖維血有刺激生長，用腐敗材料分離，培養(yǎng)基中加入甲紫、膽酸鈉抑制雜菌，龍膽紫亞硫酸鈉為其選擇性培養(yǎng)基，3%氯化鈉上生長呈多形性。AF群沙門菌（O）多價血清作玻片凝集，陽性則選用O O O O9因子定群。發(fā)熱、惡寒、嘔吐、腹痛、水樣腹瀉。糞便不能即時送檢，需保存在30%甘油緩沖鹽水中。腸致病型（EPEC）：作用小腸，水樣腹瀉，是嬰兒腹瀉主要病原菌。最常用VDRE、RPR試驗。：菌體形似彈簧，運動活潑，兩端尖直，有細胞壁和膜，原生質(zhì)圓柱體且有34根周漿鞭毛，G抵抗力極弱，對青霉素、四環(huán)素、紅霉素、砷劑敏感。快速檢測：乳膠凝集試驗測抗原。2型致病其屬于R群，屬特異基團tuf、種特異基