微生物檢驗技術考試要點(整理中級)-資料下載頁

　　

【正文】 除胎兒彎曲菌）、馬尿酸鹽水試驗陽性（排除結腸彎曲菌）。多引物一步PCR擴增法空腸彎曲菌mapA基因特異彩片段等。：條件致病菌，需氧，G－桿菌，有鞭毛，20～42℃長，最適產毒溫度是26℃，是35℃，4℃不長，液面可形成菌膜，色素有：綠膿素（溶于水和氯仿），氧化酶陽性，液化明膠、還原硝酸鹽，在42℃條件下能生長。熒光素是綠色熒光素（溶于水不溶于氯化）。O抗原有兩種：內毒素脂多糖原內毒素蛋白OEP（類屬抗原），選擇培養基：NAC（乙酰氨基半乳糖）。107. 流感嗜血桿菌：寄生人體鼻咽部，抵抗力弱，嬰幼兒易感，G—球桿菌，用石碳酸復或美藍單染呈現兩端濃染。要新鮮血液（含Ⅹ和Ⅴ因子）培養基，不溶血，可生長在接種于血平板上的金黃色葡萄球菌的周圍，流感嗜血桿菌菌落較大，越遠越小，即衛星現象。在含1%蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露并加有Ⅹ和Ⅴ因子的酚紅肉湯培養基中進行發酵試驗，是鑒別所有嗜血桿菌菌株的方法。莢膜是本菌的主要毒力因子，根據莢膜多糖抗原分為af 6個血清型，b型致病力最強；依據吲哚試驗、脲素反應、鳥氨酸代謝分為：8個生物型，大部分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，其中以Ⅰ、Ⅲ型為主，血清型b型生物型為Ⅰ型。副流感嗜血桿菌生長只要Ⅴ因子。接種于巧克力色、含腦心浸液的血瓊脂平板。病原鑒定方法： 標本：腦脊液、血液、胸水。108. 軍團菌：1976年，USA費城，G—為胞內寄生菌。無芽胞、無莢膜、有鞭毛，需氧菌（5%CO2剌激生長）常規不易著色，最適為36℃，初次分離要L半胱氨酸，含鐵鹽可促進生長，主要可用活性碳－酵母浸出液平板（BCYE），不分解糖。水解馬尿酸是嗜肺軍團菌特征。活性炭酵母浸出液瓊脂（含焦磷酸鐵、L半胱氨酸），菌落呈灰白色，如加溴甲酚紫，菌落呈淺綠色。有雜菌用選擇培養基（GVPC），是在BCYE中加入甘氨酸、多粘菌素B、萬古霉素及放線酮。試管凝集法抗體的陽性標準：1≥320水是人類感染的主要來源，水樣1L，樣本采集到濃縮培養最長不超過14天，最好不超過2天。血液、痰、尿68℃避光、隔熱運送。并取3份，一份酸處理，一份熱處理50℃水30分鐘。證實試驗：免疫熒光方法。感染臨床主要有2種形式：軍團菌病LD（肺炎型）龐提阿克熱PF109. 克雷伯桿菌：又稱肺炎桿菌，以肺炎克雷伯菌多見，G—有較厚莢膜，多數有菌毛，無芽孢和鞭毛，菌體呈卵圓形或球桿狀成雙排列，有時菌落出現黏液型用接種環可成絲。具有O抗原和K抗原。是人呼吸道及腸道定殖菌，條件致病菌。主要采痰液，用無菌鹽水洗3次+ 1%胰酶37度水中90分鐘使痰液均質化，該菌產生胞外毒性復合物(ETC)，主要成分為莢膜多糖（63%）、脂多糖（30%）和少量蛋白質（7%）。有些菌株還可產生LT和ST腸毒素。莢膜也與致病力有關。動力和鳥氨酸脫羧酶陰性是本菌最大特點。血瓊脂培養基、麥康凱，菌落大呈黏液型，光亮黏稠，菌落易融合，發酵乳糖，呈現有色菌落。利用莢膜腫脹試驗分型，3型和12型，magA基因作該菌診斷。rmpA基因作該菌輔助診斷。三亞種區別：IMViC試驗：肺炎亞種――＋＋，臭鼻亞種－＋－d，鼻硬結亞種－＋――。110. 衣原體：嚴格真核細胞內寄生的原核細胞型微生物，非運動性的細菌，多少呈球形、堆狀，G，一般寄生在動物細胞內。有獨特發育周期，能通過細菌濾器。沙眼，鸚鵡熱嗜衣原體，肺炎嗜衣原體。專性細胞內寄生。68日齡雞胚卵黃囊中繁殖，有包涵體。衣原體的兩種形態：原生小體（EB，小而致密的顆粒結構，具感染性，姬染紫紅色，無繁殖力）。始體（網狀體）（RB，大而疏松的結構，衣原體發育中的繁殖體，不具感染性，具增殖力色，絲狀分裂增，姬染蘭殖），產生類似于G桿內毒素。培養物中抑制劑二乙氨基葡聚糖。111. 立克次體：以節肢動物為傳播媒介，嚴格細胞內寄生的原核細胞型微生物。人畜共患，立克次體的致病物質主要有內毒素（脂多糖）和磷脂酶 A。免疫是以細胞免疫為主，體液免疫為輔。培養特性：動物接種是最常用的培養方法 ,采用豚鼠、小鼠可對多種病原性立克次體進行繁殖。雞胚卵黃囊常用于立克次體的傳代。目前常用的細胞培養系統有雞胚成纖維細胞、L929細胞、Vero細胞,用PCR方法進行鑒定。WHO推薦金標方法間接免疫熒光方法（IFA）孵育最適溫度為37℃。常用姬姆尼次、姬姆薩染色，多形性，無芽無鞭。標本保存—80或160℃。雄性豚鼠腹腔接種，,觀察陰囊紅腫（流—，地+）抗原結構：一、可溶性群特異性抗原，與細胞壁表層的脂多糖構成，耐熱。另一種為種特異性抗原，與外膜蛋白構成，不耐熱。但恙蟲病立克次體的細胞壁結構和抗原成分不同，無粘液層、無微莢膜、無肽聚糖和脂多糖，故另立為東方體屬。斑疹傷寒、恙蟲病立克次體的脂多糖與普通變形桿菌某些菌株（如OX 1X2 、OX k 等）的菌體抗原有共同的抗原成分。交叉凝集試驗稱外斐反應（WeilFelix reaction），用于立克次體病的輔助診斷。 補體結合試驗是立克次體最常用的方法。（一）普氏立克次體 () ：是流行性斑疹傷寒的病原體。病人是唯一的傳染源，體虱傳播媒介，在人與人之間傳播（二）莫氏立克次體() ：又名斑疹傷寒立克次體，是地方性斑疹傷寒的病原體。鼠、蚤傳播媒介，又稱鼠型斑疹傷寒。（三）恙蟲病立克次體 () ：恙蟲病立克次體是恙蟲病的病原體。嚙齒類動物、兔類、鳥類為傳染源。人類通過恙螨幼蟲叮咬而感染112. 支原體：無細胞壁，僅有細胞膜（外，中，內，中間是磷脂，內外是蛋白質及糖）呈高度多形性，能通過濾菌器，最小原核細胞微生物。采樣黏膜組織，～，在95%N2，5%CO2中生長好，菌落呈“油煎蛋”）樣菌落，取樣：黏膜組織。分離培養是確診支原體感染的可靠方法之一，接種平板后用膠紙封保濕，培養基中加入膽固醇、血清蛋白和酵母浸液，加酚紅，醋酸鉈及抗生素抑菌。Giemsa染色呈淡紫色，Dienes染色呈藍色不易褪色。40倍鏡下可見油滴狀菌落，100倍下可見桑椹狀菌落。16種支原體中，肺炎、解脲、人型、生殖器、發酵支原體對人致病，肺炎支原體引起間質性肺炎，其它4種引起泌尿生殖道感染。快速檢測：雙抗體夾心ELISA法檢測外膜蛋白、免疫印跡技術檢測抗原114. 肝炎病毒：甲型（HAV）、乙型（HBV）、丙型（HCV）、丁型（HDV）、戊型（HEV）。甲型（HAV）：正鏈小RNA病毒科，球形正十二面體，病毒顆粒無包膜，核酸RNA有感染性。是在各種條件下抵抗外界變化能力最強的病毒之一。1：4000甲醛液（福爾馬林）37度71小時可滅活。糞—口傳播。乙型（HBV）：反轉錄病毒，嗜肝DNA病毒科，病毒顆粒3種：22nm小球形外膜顆粒、40—100nm 22nm管形顆粒、完整42nmDane顆粒。前兩者空心包膜，表面抗原（HBsAg）組成，不含核酸，沒感染性。Dane顆粒呈雙層外殼圓形顆粒，攜帶核心抗原（HBcsAg）,抵抗力很強，100℃10分鐘滅活。，長鏈為—鏈，短鏈為+鏈，短鏈5”末端固定，3”末端不固定。丙型（HCV）：黃科病毒，球型顆粒，1：1000甲醛液（福爾馬林）37度92小時可滅活。母嬰、輸血、血源性傳播。丁型（HDV）：衛星病毒科，是一種缺陷病毒，需在（HBV）或嗜肝DNA病毒的輔助下才能復制增殖。核心含單股負鏈共價閉合環裝RNA、HDAg抗原，核衣殼是一粗糙球形結構。對各種滅活劑、脂溶劑敏感，耐干熱。輸注含HDV的血液或血制品。戊型（HEV）：無包膜線狀單股正鏈RNA病毒球形，對高熱敏感。有鎂、錳離子存在可保持完整性。糞—口傳播115. 人類免疫缺陷（HIV）：是獲得性免疫缺陷綜合征。簡稱艾滋病（AIDS），主要通過性接觸、血液、母嬰傳播。感染后損傷免疫系統，引起致死性機會感染或腫瘤，乙類。世界81第一例，我國85。HIV屬逆轉錄病毒科慢病毒屬，分HIVHIV2型，95%由HIV1造成，球形，由兩條單股正鏈RNA、逆轉錄酶、整合酶、蛋白酶、核心蛋白質組成。對理化因素抵抗弱，但在2022℃活7天，冷凍血制品中需68℃加熱72小時才滅活，對紫外線不敏感。標本：外周全血，抗凝劑：檸檬酸葡萄糖溶液B（ACD）用于新鮮抽提或凍存的血樣、肝素、CPD。血量：成、兒1020ml，嬰幼兒12 ml，30小時內處理，室溫保存。分離病原：在生物安全3級實驗室（BSL1）、生物安全柜內進行，最敏感的分離技術是共培養，特征性細胞病變為融合細胞。核酸檢測：定性：PCR、RTPCR技術；定量：逆轉錄PCR 實驗（RTPCR）核酸序列擴增實驗（MASBA）。報告定性結果時應注明反應條件、引物序列，報告定量結果時注明實驗方法、樣品種類及量。用ELISA測p24抗原，可使感染的窗口期縮短1左右。HIV1 p24抗原陽性結果須中和試驗確認。WHO及我國推薦HIV感染診斷用：血清學抗體檢測（監測、診斷、血液篩查），篩查試劑須是HIV1/2混合型。確證試驗法：免疫印跡試驗（WB國常用）、條帶免疫試驗、放射免疫沉淀試驗（RIPA）、免疫熒光試驗（IFA）116. 脊髓灰質炎病毒：小兒麻痹癥，糞—口傳播。小RNA病毒科，單股正鏈無包膜，圓球形顆粒，耐寒70度保存活力8年，不耐熱。按抗原分；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3個血清型。脊灰病毒基因組呈單鏈線性，病毒的主要抗原是VP1蛋白。口服脊灰疫苗（OPV），脊灰Ig G≥1：100為陽性。標本：糞便（分離主要標本），糞便排出病毒主要在麻痹前期、麻痹后2周內，排毒呈間歇性，故采樣在14天內采集2份糞便，時間間隔24—48小時，量5—8克。患者超14天就診，采5位0—4歲密切接觸糞便。糞便須進行氯仿處理，可除支細菌、真菌、有包膜病毒、細胞毒性脂類，使聚集的病毒分散。WHO推薦用：人橫紋肌肉瘤細胞（RD）、轉人脊灰病毒受體的小鼠肺細胞（L20B）117. 麻疹病毒：以發熱、呼吸道卡他癥狀和全身丘疹為特征的急性傳染病（丙類）。副黏病毒科。病毒為螺旋對稱，有包膜，單股負鏈RNA不分節段，有6個結構基因。包膜表面兩種刺突；血凝素HA、血溶素HL，均為中和抗原可誘導產生中和抗體。血凝素HA只能凝集猴紅細胞，并能與宿主細胞吸附；血溶素HL具有溶血和使細胞發生融合形成多核巨細胞的作用。只有一個血清型，多個基因型。抵抗力弱。病原分離：取出疹前3天至疹后3天的咽拭子，尿液標本或血中淋巴細胞，不超過出疹前后5天。細胞分離：Vero細胞（非洲綠猴腎細胞）、原代外周血單核細胞（PBMC）、B95a細胞（EB病毒轉化的絨猴淋巴細胞），WHO推薦使用首選Vero/SLAM分離麻疹病毒；用ELISA方法檢測特異AgM抗體進行麻疹診斷。IgM在出疹7—10天達高峰，28天內都能檢測到。IgG持續終身。IgG用于人群抗體陽性率調查、抗體水平測定、疫苗初免結果觀察。在結構基因中，H、N基因最易變異的基因。F蛋白是一種具有膜融合特性的糖蛋白。F蛋白、H蛋白都是中和抗原118. 流行性出血熱：又稱腎綜合征出血熱HFRS。由漢坦病毒HV引起的自然疫源性疾病。鼠類為宿主和傳染源。單負分節段RNA，基因組分3個片段（L、M、S），分別編碼RNA聚合酶、包膜糖蛋白、核衣殼蛋白。A549（人肺癌）傳代細胞、VeroE6（非洲綠猴腎）細胞、2BS（人胚肺二倍體）細胞、RL（大白鼠肺）細胞用于病毒分離。發病5日之內靜脈血接種，用標準抗體做免疫熒光試驗、標準毒株抗血清做中和試驗、交叉阻斷試驗，ELISA、反向間接血凝試驗測抗原。ELISA夾心法用于基層診斷和流行病學調查。目前我國所使用的流行性出血熱的疫苗是: 細胞培養滅活疫苗。我國流行的是Ⅰ和Ⅱ型，伴三痛（頭，眼眶，腰）及紅（面，頸，上胸部）。新疆出血熱病毒。119. 埃博拉出血熱：傳染性十分強烈的出血性發熱性疾病。單股負鏈RNA，長絲狀。病毒在胞內繁殖，芽生釋放。病毒基因組長19kb，由7個連續排列的基因組成，分別編碼；核蛋白、基質蛋白、多聚酶、3種小蛋白。病毒分離必須在生物安全4級實驗室進行。急性期血標本接種于Vero（非洲綠猴腎）細胞培養，或豚鼠腹腔內。用熒光免疫法病毒抗原積聚在細胞漿內。120. 流行性乙型腦炎：又日本腦炎，（乙類），經三帶啄庫蚊傳播媒介，豬主要宿主和傳染源。屬黃病毒科，基因組長11 kb 單股正鏈RNA，球形，有包膜，根據E蛋白的核苷酸差異將乙腦分為5個基因組。病毒的結構蛋白有：M（包膜內），C（衣殼內），E（嵌在包膜上的糖蛋白）三種，組成血凝素，囊膜內尚有內膜蛋白（M），參與病毒的裝配。病毒RNA在細胞漿內直接起mRNA作用，翻譯出結構蛋白和非結構蛋白，在胞漿粗面內質網裝配成熟，出芽釋放。乙腦病毒以接種卵黃囊最佳，常用檢測標本：血液、腦脊液、尸檢標本、蚊蟲，保持冷鏈。最易感染的動物是出生2～3天的乳鼠，經皮下接種，小鼠是常用的動物模型。抵抗力弱不耐熱。病毒分離：BHK、C6/36傳代細胞。乙腦早期診斷：潛伏期是4—21天，用發病4—7天血液、腦脊液用ELISA測特異性IgM抗體.。12登革熱DF：乙類，傳播媒介伊蚊，屬黃病毒科及屬，正鏈RNA，含有一條單一開放讀碼框架，3個結構蛋白：衣殼蛋白C、膜蛋白M、包膜蛋白E。E蛋白主要有A、B、C三個不重疊抗原區，為主要的毒粒，能誘導宿主產生保護性中和抗體，直接從標本中分離病毒是確診登革熱的可靠方法。4個血清型，分離細胞（C6/36株）。用逆轉錄—聚合酶鏈反應（RTPCR）檢測登革熱RNA。檢測抗體經典法：血凝抑制試驗、補體結合試驗、中和試驗122．克里米亞—剛果出血熱CCHE：傳播媒介蜱，宿主蜂，又新疆出血熱。屬布尼亞病毒科、內羅畢病毒屬。負鏈分節段RNA，3個基因節段：首選乳鼠腦內、腹腔接種，取乳鼠腦組織制成抗體進行血清學交叉試驗。反向間接血凝（RPHA）、雙抗體心ELISA法檢測急性末梢血液，可早期快速診斷。抗體陽性應兩種方法同時陽性來最終確認陽性結果。 123．流行性感冒病毒：正黏科分節單負鏈RNA病毒，多呈球形，核心由RNA蛋白和P蛋白組成，據病毒粒核蛋白（NP蛋白）膜蛋白（MP蛋白）的抗原特性分甲、乙、丙三型，包膜（由血紅細胞凝集素HA、神經氨酸酶NA）后者是劃分流感病毒亞型的依據，易變異。甲型流感病毒HA易發生點突變，導致氨基酸序列發生替換，造成抗原性