基因診斷與基因治療培訓教程(專業版)

　　

【正文】 13:18:5913:18:5913:183/22/2023 1:18:59 PM1越是沒有本領的就越加自命不凡。 13:18:5913:18:5913:18Monday, March 22, 20231乍見翻疑夢，相悲各問年。向腫瘤患者的骨髓細胞導入某種耐藥基因，增強骨髓細胞的抗藥性，以便耐受大劑量的化療藥物，達到徹底殺滅腫瘤細胞的目的。多藥耐藥（ mdr1） 基因編碼的 P糖蛋白、多藥耐藥相關蛋白（ MRP） 以及肺耐藥相關蛋白等；錄（二）惡性腫瘤基因治療研究 （ 1）通過基因置換和基因補充，導入多種抑癌基因以抑制癌癥的發生、發展和轉移； 腫瘤發生是一個極為復雜的過程，許多基因的突變會導致腫瘤的發生。錄（一）遺傳病的基因治療研究 (一 )遺傳病基因治療必須符合以下要求 DNA水平明確其發病原因及機制；，而且屬隱性遺傳；；達并發揮其生理作用； (如不治療難以存活等 )。這與傳統上對反義 RNA技術的解釋正好相反。在基因治療時，利用核酶分子結合到靶RNA分子中適當的部位，形成錘頭狀核酶結構，將靶 RNA分子切斷，通過破壞靶 RNA分子而達到治療疾病的目的。目 錄 基因直接注射法的優點p 制備具有調控部件的質粒 DNA重組體的技術較容易；p 排除病毒載體可能潛在的致癌性或其他副作用；p 導入的基因不需整合即可表達，避免了反轉錄病毒載體導入整合后，一旦發生副作用不易中止或逆轉的缺點；p 基因直接注射法可反復使用，而病毒載體則可能誘導體內免疫應答，致使反復治療效果下降。基本原理 :利用陽離子脂質體單體與 DNA混合后，可以自動形成包埋外源 DNA的脂質體，然后與細胞一起孵育，即可通過細胞內吞作用將外源DNA（ 即目的基因）轉移至細胞內，并進行表達。可能會引起免疫排斥。目 kb， 無包膜，外形為裸露的 20面體顆粒。目 反轉錄病毒載體的主要缺點packagingU3和 U5兩端分別有病毒整合序列 (IS)錄二、基因轉移技術 基因治療的兩種途徑載體目的基因in vivoex vivo 靶細胞目 effect）目 Therapy)目 n 基因同源重組技術又稱為 基因打靶 (gene錄基因治療分類216。Alec John JeffreysOxford, United Kingdom 目 2．結腸癌基因診斷方法第五節 基因診斷在法醫學上的應用Application of Gene Diagnosis in Forensic Medicine目 BRAC1突變易致乳腺癌。cancer1．乳腺癌常見基因變異n p53基因以密碼子第 175位、第 248位、第 249位、第 273位及 錄一、原癌基因與抑癌基因的檢測 二、常見腫瘤的基因診斷 乳腺癌 結腸癌 目 目 n 丙型肝炎病毒（ HCV）n 乙型肝炎病毒（ HBV）智力低下基因 1（ FMR1） 5ˊ非翻譯區遺傳不穩定的 (CGG)nI等內切酶（酶切位點位于交換點兩側）消化，用特異探針進行雜交分析，正常人表現為 HBS的限制性內切酶譜分析目 HBS的間接基因診斷repeats)mRNA長度分析目 錄 根據引物 3180。錄目 錄錄（六）生物芯片 （ biochips）n 基因芯片（ genefragment錄4.PCR）模板引物dNTP4.印跡雜交 (Southern 高靈敏性252。目 錄 → 變性處理 → DNA轉印到膜上并使其牢固結合 → 將標記的探針與膜上 DNA片段雜交，分析雜交信號。in situ錄目 錄（二） 聚合酶鏈式反應 (polymerase3.PCRSSCP分析 －目 錄DNA序列測定原理 (雙脫氧末端終止法)目 錄5/——5 /—3 /3/—RFLP（ 1）有限制性內切酶位點改變目 目 mRNA的絕對定量分析 DNA多態性： 指群體中的 DNA分子存在至少兩種不同的類型，即個體間同一染色體的相同位置上核苷酸序列存在一定的差異或變異。number錄目 錄13kb患者正常(CCT GAG G)5180。錄目 將基因組 DNA用 Nco錄目 目 設計保守區序列引物，擴增各型 HBVHCV為正鏈 RNA病毒，先反轉錄成 cDNA，再進行巢式 PCR檢測 HCV。錄目 基因家族由 Hras、 Kras和 Nras組成。 目 及 PCRSSCP分析： 擴增 ras 基因第12位密碼子點突變部位，再用 SSCP技術進行分析，或者直接測序確定患者 ras原癌基因的點突變。2. ras原癌基因突變常用的檢測方法目 錄目 （ 2）異源雙鏈 PCR法： 檢測 APC基因變異。1985年，英國遺傳學家Jeffeys等人用 TR的核心序列為探針進行 RFLP分析時，檢測到許多HVR，并產生相應的圖譜，所得圖譜具有高度的個體特異性，達到了如同人類指紋那樣的高度專一性，所以稱其為DNA指紋圖譜（ DNA目 目 n 應用： 是惡性腫瘤基因治療的主要方法之一。定義 : l 在 U3內有增強子和啟動子； 錄反轉錄病毒介導的基因轉移系統目 它通過受體介導的內吞作用進入細胞內，然后腺病毒基因組轉移至細胞核內，保持在染色體外，不整合進入宿主細胞基因組中。錄目 錄AAV的特點l 以潛伏感染為主；l 病毒基因組與細胞共存；l 只要宿主細胞正常， AAV基因表達被抑制而維持潛伏狀態；l 若細胞受刺激，表達應激基因， AAV基因表達從而使 AAV病毒復制；l 產生子代病毒并釋放，又感染新的細胞，建立新的潛伏狀態。n 將促進心臟血管生長的基因直接注入實驗鼠的心臟，可使其心臟壁內毛細血管增加 30% ～ 40% ；n 將胰島素基因直接注入鼠骨骼肌細胞，能分泌糖尿病所缺少的胰島素；n 肌內注射凝血因子 Ⅸ 基因，可產生血友病所需的凝血因子 Ⅸ 有義 RNA（ sensesiRNA的產生目 n 囊性纖維化病 ?腫瘤的免疫基因治療：激發機體腫瘤免疫效應或提高免疫效應細胞功能。耐藥基因治療： （ 3）抑制病毒基因組的復制和蛋白質合成。 三月 21三月 21Monday, March 22, 2023雨中黃葉樹，燈下白頭人。 2023/3/22 13:18:5913:18:5922 March 20231空山新雨后，天氣晚來秋。勝人者有力，自勝者強。 三月 211:18 下午 三月 2113:18March 22, 20231行動出成果，工作出財富。病毒感染人體后不僅可能急性發病，還可以在人體內長期潛伏，造成終身傷害。P450）、 谷胱甘肽 S轉移酶（ GST） 以及谷胱甘肽過氧化物酶（ GSHPX）等。腫瘤細胞耐藥性與多種糖蛋白或酶：臨床上對腫瘤患者進行化療時，通常面臨兩大難題：（ 1）患者機體內的腫瘤細胞對化療藥物的敏感程度存在差異，特別是某些經過多次化療的患者，其體內的腫瘤細胞已經產生了多藥耐藥性，對多種化療藥物產生交叉耐受，最終導致化療失敗。目 錄由于 RNA， siRNA）目 但核酶也可以由兩個 RNA分子組成。錄三、基因干預 （ gene interference） 目 錄目 整合 致病性 感染細胞 克隆容量反轉錄病毒 載體隨機整合，效率高可能致病 分裂細胞 7kb腺病毒載體 不整合，可能丟失不致病 分裂細胞、非分裂細胞Virus反轉錄病毒載體的容量較小，只能容納 7錄 病毒載體 介導的基因轉移效率較高，因此它也是使用最多的基因治療載體。單純皰疹病毒（ herps錄（二） 基因添加 （ gene 生殖細胞 (germline)基因治療v 只限于某一體細胞的基因的改變v 只限于某個體的當代v 對缺陷的生殖細胞進行矯正v 當代及子代目 目前解決親權糾紛最簡單的辦法是先在孩子 DNA指紋圖中找出非母片段并計數為 P，然后分析爭議父 DNA指紋圖，看 P條非母帶在爭議父中出現多少條。錄目 DNA長度多態除可用 Southern印跡雜交法檢測外，還可以通過 PCR擴增后電泳來檢出。錄n 重復序列以各自核心序列（重復單元）首尾相連多次重復，稱為串聯重復序列，其重復次數在人群中存在變異，形成多態性。二、常見腫瘤的基因診斷目 BRCA1在 N端的一半部位截短，與乳腺癌和卵巢癌的高風險相關；而在 C端截短則主要與乳腺癌高危有關。n p53的基因診斷方法有先設計一對特異性引物，用 PCR技術擴增出一 383錄二、細菌引起的疾病n 結核分枝桿菌 第三節 傳染病的基因診斷 Gene Diagnosis of Infectious Diseases目 n 正常人中約為 kb三種類型。4： bT/錄目 錄3.CCTACT錄目 錄specific錄目 設計適當的擴增引物，使擴增片段包括某一個或數個限制性內切酶識別序列，在 PCR