生物化學酶ppt課件(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 將 (3)代入 (1) 得 k3[Et][S] Km + [S] (4) V = ──── 目錄 （二） Km與 Vm是有意義的酶促反應動力學參數 ? Km值的推導 ? Km與 Vmax的意義 目錄 當反應速率為最大反應速率一半時： ? Km值的推導 Km = [S] ? Km值等于酶促反應速率為最大反應速率一半時的底物濃度，單位是 mol/L。 2 = Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 目錄 ? Km與 Vmax的意義 ?定義： Km等于酶促反應速率為最大反應速率一半時的底物濃度。 ?意義： ? Km是酶的特征性常數之一，只與酶的結構、底物和反應環境（如，溫度、 pH、離子強度）有關，與酶的濃度無關。 ? Km可近似表示酶對底物的親和力； ? 同一酶對于不同底物有不同的 Km值。 Km值 目錄 Vmax ?意義： Vmax=k3 [E] ?定義： Vm是酶完全被底物飽和時的反應速率，與酶濃度成正比。 如果酶的總濃度已知，可從 Vmax計算酶的轉換數 (turnover number)，即動力學常數 k3。 目錄 ?定義 : 當酶被底物充分飽和時 ， 單位時間內每個酶分子催化底物轉變為產物的分子數 。 ?意義 : 可用來比較每單位酶的催化能力 。 ? 酶的轉換數 (turnover number) 目錄 1. 雙倒數作圖法 (double reciprocal plot)，又稱為 林 貝氏 (Lineweaver Burk)作圖法 Vmax[S] Km+[S] V = （林－貝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/[S] 兩邊同取倒數 （三）Ｋ m值與Ｖ max值可以通過作圖法求取 1/Km 1/Vmax 1/[S] 1/V 目錄 2. Hanes作圖法 在林－貝氏方程基礎上，兩邊同乘 [S] [S]/V=Km/Vmax + [S]/Vmax [S] [S]/V Km Km/Vm 1/Vmax 目錄 二、底物足夠時酶濃度對反應速率的影響呈直線關系 ?在酶促反應系統中，當底物濃度大大超過酶的濃度，酶被底物飽和時，反應速率達最大速率。此時，反應速率和酶濃度變化呈正比關系。 目錄 ?當 [S]＞＞ [E]，酶可被底物飽和的情況下，反應速率與酶濃度成正比。 ?關系式為： V = k3 [E] 0 V [E] 當 [S][E]時， Vmax = k3 [E] 酶濃度對反應速率的影響 目錄 三、溫度對反應速率的影響具有雙重性 ?溫度對酶促反應速率具有雙重影響。 ?酶促反應速率最快時反應體系的溫度稱為酶促反應的 最適溫度 (optimum temperature)。 目錄 ? 溫度對淀粉酶活性的影響 目錄 ?酶的最適溫度不是酶的特征性常數，它與反應進行的時間有關。 ?酶的活性雖然隨溫度的下降而降低，但低溫一般不使酶破壞。溫度回升后，酶又恢復其活性。 目錄 四、 pH通過改變酶和底物分子解離狀態影響反應速率 ?酶催化活性最高時反應體系的 pH稱為酶促反應的 最適 pH (optimum pH)。 ? pH對某些酶活性的影響 目錄 ?最適 pH不是酶的特征性常數 ， 它受底物濃度 、 緩沖液種類與濃度 、 以及酶純度等因素的影響 。 目錄 五、抑制劑可逆地或不可逆地降低酶促反應速率 ? 酶的抑制劑 (inhibitor) ? 酶的抑制區別于酶的變性： ? 抑制劑對酶有一定選擇性 ? 引起變性的因素對酶沒有選擇性 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白 變性的物質稱為酶的抑制劑。 目錄 ? 抑制作用的類型 ?不可逆性抑制 (irreversible inhibition) ?可逆性抑制 (reversible inhibition) ?競爭性抑制 (petitive inhibition) ?非競爭性抑制 (nonpetitive inhibition) ?反競爭性抑制 (unpetitive inhibition) 根據抑制劑和酶結合的緊密程度不同，酶的抑制作用分為： 目錄 有機磷化合物 ?? 羥基酶 解毒 解磷定 (PAM) 重金屬離子及砷化合物 ?? 巰基酶 解毒 二巰基丙醇 (BAL) ? 概念 ? 舉例 抑制劑通常以共價鍵與酶活性中心的必需基團相結合，使酶失活。 （一）不可逆性抑制劑主要與酶共價結合 目錄 ESSA s C H C H C l +C H 2 S HC H S HC H 2 O HES HS H+C H 2 SC H SC H 2 O HA s C H C H C lR OR 39。 OPOX+ H O ER OR 39。 OPOO E+ H XC lA sC lC H C H C l + ES HS HESA sSC H C H C l + 2 H C l有機磷化合物 路易士氣 失活的酶 羥基酶 失活的酶 酸 巰基酶 失活的酶 酸 BAL 巰基酶 BAL與砷劑結合物 目錄 （二） 可逆性抑制作用 ?競爭性抑制 ?非競爭性抑制 ?反競爭性抑制 ? 類型 ? 概念 抑制劑通常以非共價鍵與酶或酶 底物復合物可逆性結合 ， 使酶的活性降低或喪失；抑制劑可用透析 、 超濾等方法除去 。 目錄 的活性中心 有些抑制劑與底物的結構相似 ， 能與底物競爭酶的活性中心 ， 從而阻礙酶－底物復合物的形成 。 這種抑制作用稱為競爭性抑制作用 。 ? 定義 目錄 ? 反應模式 + I EI E + S E + P ES I S + + + E S I ES EI P E E 目錄 ? 特點 ?抑制程度取決于抑制劑與酶的相對親和力及底物濃度； ?I與 S結構類似 ， 競爭酶的活性中心； ?動 力 學 特 點 ：Vmax 不變 ， 表觀Km增大 。 抑制劑 ↑ 無抑制劑 1/V 1/[S] V [ S ]m a xV [ I ]K ( 1 ) [ S ]mK i???iK [ I ] 1 11 m ( 1 )VV K [ S ] Vm a x m a x? ? ?